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1、生化下期末復習資料一、蛋白質(zhì)與氨基酸的分解代謝與合成1、脫氨基作用的種類?(轉(zhuǎn)氨基作用與聯(lián)合脫氨基作用)分類:氨基酸的轉(zhuǎn)氨基作用、氧化脫氨基作用、其他的脫氨基作用、聯(lián)合脫氨基作用。轉(zhuǎn)氨基作用是a -氨基酸和a -酮酸間的氨基轉(zhuǎn)移反應。除賴氨酸、蘇氨酸和甘氨酸外,其|余a -氨基酸均可參加轉(zhuǎn)氨基作用,且各有其特異的轉(zhuǎn)氨酶。轉(zhuǎn)氨酶中,以谷丙轉(zhuǎn)氨酶 GPTS谷草車t氨酶GOTM為重要。GOT和GPT人體中,GOT&心臟中活力最大, 其次是肝臟中;GPT則在肝臟中活力最大。 當 肝細胞受損時,GPT!放到血液中,使血液中 GPTB活力上升。所以臨床上將其作為推斷肝 功能正常與否的一項指標。轉(zhuǎn)氨酶種類很
2、多,但輔酶只有一種:磷酸比哆醛。轉(zhuǎn)氨基作用為可逆反應。聯(lián)合脫氨基作用:一一般認為,氨基酸在體內(nèi)不是直接氧化脫氨基,而是先與a-酮戊二酸經(jīng)轉(zhuǎn)氨基作用轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳腶 -酮酸和谷氨酸,谷氨酸再通過 2種方式氧化脫氨基。1 .轉(zhuǎn)氨酶-谷氨酸脫氫酶的聯(lián)合脫氨基作用:過程:a -氨基酸先與a -酮戊二酸在轉(zhuǎn)氨酶的催化下,經(jīng)轉(zhuǎn)氨基作用,生成相應的a -酮酸 和谷氨酸;谷氨酸再經(jīng)谷氨酸脫氫酶的作用,進行氧化脫氨基,重新生成a-酮戊二酸,并釋放出氨。2 .轉(zhuǎn)氨酶-喋吟核甘酸循環(huán)聯(lián)合脫氨基作用:a -酮戊二酸先接受來自其他氨基酸的氨基,生成谷氨酸;谷氨酸再與草酰乙酸經(jīng)轉(zhuǎn)氨基生成天冬氨酸。之后便與喋吟核甘酸聯(lián)合作用
3、:次黃喋吟核甘酸與天冬氨酸作用,生成中間產(chǎn)物:腺甘酸代琥珀酸。此物在裂合酶催化下,分裂成腺甘酸和延胡索酸。腺甘酸水解后產(chǎn)生游離氨和次黃喋吟核甘酸。2種聯(lián)合脫氨基作用在如:肝臟、腎臟等組織處,以轉(zhuǎn)氨酶-谷氨酸脫氫酶的聯(lián)合脫氨基作用為主。在心肌、骨骼肌和腦組織中,以轉(zhuǎn)氨酶-喋吟核甘酸循環(huán)聯(lián)合脫氨基作用為主。如:腦組織中有50%勺氨是由轉(zhuǎn)氨酶-喋吟核甘酸循環(huán)聯(lián)合脫氨基作用產(chǎn)生的。2、尿素循環(huán)?主要機理:排尿素動物在肝臟中合成尿素。由 2分子a -氨基酸脫下的氨基,即 2分子氨, 和1分子CO密鳥氨酸循環(huán),生成 1分子尿素,反應需 3分子ATP參與。尿素是無毒的近中性化合物,且為水溶性,可由血液循環(huán)經(jīng)
4、腎臟隨尿排出。1 .合成氨甲酰基磷酸:進入尿素循環(huán)的第1分子氨,一部分來自于肝臟線粒體中谷氨酸的氧化脫氨基。NH3與經(jīng)檸檬酸循環(huán)生成的 CO2在線粒體內(nèi)氨甲酰磷酸合成酶的催化下,生成氨甲酰磷酸。每生成1分子氨甲酰磷酸,需 2分子ATP供能,所以反應不可逆。催化此反應的是位于線粒體內(nèi)的氨甲酰磷酸合成酶I o該酶屬于調(diào)節(jié)酶,N-乙酰谷氨酸為其正調(diào)節(jié)物。2 .形成瓜氨酸:氨甲酰磷酸極不穩(wěn)定,易將氨甲?;┙o鳥氨酸,生成瓜氨酸。鳥氨酸本在胞液中生成,經(jīng)特殊內(nèi)膜傳遞系統(tǒng)傳遞,進入線粒體內(nèi)。瓜氨酸又離開線粒體進入胞液。3 .形成精氨琥珀酸:第2分子氨由天冬氨酸的氨基提供。天冬氨酸在有 ATP供能的條件下,
5、以其氨基與瓜氨酸的氨甲酰碳原子上烯醇式的羥基縮合且脫水,產(chǎn)生精氨琥珀酸。4 .形成精氨酸:在精氨琥珀酸裂解酶作用下,精氨琥珀酸裂解生成精氨酸和延胡索酸。 以上四步反應在所有生物體內(nèi)均可進行。5 .形成尿素:排尿素動物體內(nèi)含大量精氨酸酶,此酶可將尿素從精氨酸分子上水解下來,生成鳥氨酸。鳥氨酸可重復進入鳥氨酸循環(huán)反應2,從而形成循環(huán)。為何缺乏尿素循環(huán)酶類無法應用蛋白質(zhì):其蛋白質(zhì)代謝中產(chǎn)生的氨無法轉(zhuǎn)化為尿素排出,只能以氨的形式積累在體內(nèi)。為何患者的中樞神經(jīng)系統(tǒng)及肝臟易受到毒害:氨濃度較高時,線粒體中發(fā)生:NH+a-酮戊二酸+NADH+W一谷氨酸+NAD+H2Q a -酮戊二酸同時又是檸檬酸循環(huán)中反應
6、(6)的底物。所以游離氨與檸檬酸循環(huán)爭奪a-酮戊二酸并占優(yōu)勢,使檸檬酸循環(huán)因缺乏中間產(chǎn)物:a -酮戊二酸而被迫減慢速度甚至停頓下來,使與檸檬酸循環(huán)緊密聯(lián)系的呼吸鏈也受影響,從而使對O2濃度最敏感的中樞神經(jīng)系統(tǒng)表現(xiàn)出缺氧。在病人肝臟電忑|檸檬酸循環(huán)的停頓而使 脂類代謝中產(chǎn)生的乙酰輔酶 A無法徹底氧化分解,只能轉(zhuǎn)變?yōu)橥w。酮體中多為酸性物質(zhì), 若在血液中過量積累,會使血液pH值下降,出現(xiàn)酸中毒現(xiàn)象。若將病人膳食中的蛋白質(zhì)換成必需氨基酸相應的a -酮酸,便可得到治療。 原因:a -酮酸與血液中積累的氨結(jié)合,生成a -氨基酸,從而緩解了氨的高濃度積累。3、名詞解釋:生糖氨基酸:能通過代謝轉(zhuǎn)變成葡萄糖和
7、糖原的氨基酸。如丙氨酸/經(jīng)代謝轉(zhuǎn)變成丙酮酸、a-酮戊二酸、琥珀酸或草酰乙酸,再通過這些竣酸變成葡萄糖和糖原(包括丙氨酸、精氨 酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、組氨酸、甲硫氨酸、脯 氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、異亮氨酸、繳氨酸等15種氨基酸)。生酮氨基酸:|經(jīng)過代謝能產(chǎn)生酮體的氨基酸。如亮氨酸/在分解代謝過程中能轉(zhuǎn)變成乙酰乙酰輔酶A的氨基酸,共有亮氨酸、賴氨酸、色氨酸、苯丙氨酸和酪氨酸5種氨基酸。生糖和生酮氨基酸:經(jīng)過代謝,既能產(chǎn)生酮體,又能轉(zhuǎn)化為葡萄糖的氨基酸(如苯丙氨酸和酪氨酸)。4、名詞解釋:(+一個例子)必需氨基酸:|人體自身不能合成或合成速度不能滿足人體需要,必須
8、從食物中攝取的氨基酸。(如:賴氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、繳氨酸)。非必需氨基酸:|人或動物機體能自身合成,不須通過食物補充的氨基酸。(如:甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、絲氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸)C5、按合成起始物的不同可分成6類氨基酸?(填空)谷氨酸族氨基酸|由檸檬酸循環(huán)中間產(chǎn)物a-酮戊二酸衍生而來的氨基酸。天冬氨酸族氨基酸:|由草酰乙酸衍生而來的氨基酸。丙酮酸族氨基H二|由糖酵解產(chǎn)物:丙酮酸衍生而來的氨基酸。屬于這族的氨基酸有丙氨酸、纈絲氨酸族氨基酸:由糖酵解中間產(chǎn)物:3-磷酸-甘油酸衍生而來的氨基酸。芳香族氨基酸:I由磷酸戊糖
9、途徑中間產(chǎn)物: 丙酮酸衍生而來的氨基酸。組氨酸合成起始物是 5-磷酸-核糖。4-磷酸-赤群糖和糖酵解中間產(chǎn)物:磷酸烯醇式6、谷氨酸的生成途徑途徑1:由“-酮戊二酸形成谷氨酸:a -酮戊二酸與游離氨在 L-谷氨酸脫氫酶催化下發(fā)生氨基化作用。動物體內(nèi),L-谷氨酸脫氫酶可利用 NAD/NADH和NADP/NADPH兩類輔酶。途徑2:由a -酮戊二酸形成谷氨酰胺:| (在自然界中普遍發(fā)生)先由a -酮戊二酸氨基化生成 L-谷氨酸,再由L-谷氨酸生成谷氨酰胺。 接著由谷氨酸合酶催 化,a -酮戊二酸接受來自L-谷氨酰胺的酰胺基,生成谷氨酸。叫:催化反應的噌酰胺合成酶的而性,受饋抑制系網(wǎng)調(diào)控。9種含氮物可
10、對該酶活性產(chǎn)生抑制:6-磷酸-氨基葡萄糖、色氨酸、丙氨酸、甘氨酸、絲氨酸、組氨酸、CTP AM可口氨甲酰磷酸。*兩種合成谷氨酸途徑的比較途徑(1)其實在自然界并不普遍發(fā)生,只有少數(shù)生物在環(huán)境中NH+濃度很高時,才以此途徑合成谷氨酸。最普遍的還是途徑(2)。雖從能量角度看,由于在從谷氨酸生成谷氨酰胺時需消耗ATP,并不經(jīng)濟。但由于途徑(2)只需極低濃度 NH+即可發(fā)生,途徑(1)卻需很高的NH+濃度。而一般在自然條件下,環(huán)境中NH+濃度并不會很高。7、芳香族氨基酸合成的共同途徑(P356)芳香族氨基酸:由磷酸戊糖途徑中間產(chǎn)物: 丙酮酸帝生而來的氨基酸。莽草酸途徑:4-磷酸-赤群糖加糖酵解中間產(chǎn)物
11、:磷酸烯醇式8、谷氨酰胺與天冬酰胺的合成,其中哪一種合成反應較易進行?1 .先由a -酮戊二酸氨基化生成 L-谷氨酸,再由L-谷氨酸生成谷氨酰胺。2 .草酰乙酸接受來自谷氨酸的氨基形成天冬氨酸,催化酶是谷草轉(zhuǎn)氨酶。哺乳動物體內(nèi),天冬氨酸3 -竣基上轉(zhuǎn)移上一個來自谷氨酰胺的酰胺基,生成天冬酰胺。催化酶是天冬酰胺合成酶,ATP在反應中被消耗2個高能磷酸鍵;細菌體內(nèi),由NH+提供轉(zhuǎn)移上去的酰胺基。反應中也有ATP降解為AMP勺過程。天冬酰胺與谷氨酰胺合成不同點,在谷氨酰胺合成反應中,ATP只被打斷1個高能磷酸鍵而生成 ADR 而天冬酰胺合成反應中, ATP則被才T斷2個高能鍵生成 AM林口 PPi。
12、因此從能量角度看,天燈酰胺的4成反應比谷氨酰胺合成更易進行。9、氨基酸之間相互轉(zhuǎn)化的例子(2個)核酸及核甘酸的代謝與合成1、核酸內(nèi)切酶及外切酶的作用方式、作用特點及產(chǎn)物?核酸外切酶:作用方式:作用于核酸鏈的一端,逐個水解下核甘酸的核酸酶為核酸外切酶。作用特點:為非特異性核酸酶,對于 RNA DNAM低分子量寡核甘酸等底物都能分解。如:蛇毒磷酸二酯酶(從核甘酸鏈的3-羥基端開始,逐一水解下 5-核甘酸)、牛脾磷酸二酯酶(從核甘酸鏈的 5-羥基端開始,逐一水解下 3-核甘酸)等。最終產(chǎn)物:是單個的核甘酸( DNAfy dNTR RNA為NTP核酸內(nèi)切酶:作用方式:能水解核酸分子內(nèi)部磷酸二酯鍵的磷酸
13、二酯酶稱核酸內(nèi)切酶。作用特點:特異性強。如:第一個被分離純化并得到結(jié)晶的RNA酶牛胰核酸酶,專一性作用于RNA中的喀咤核甘酸,生成3-磷酸J密嚏核昔或末端為 3-磷酸/密嚏核昔的寡核甘酸。如:于1957年被從曲霉中分離提純的另一種RNAB: T1 。最終產(chǎn)物:核酸的片段。限制性內(nèi)切反T|:細菌體內(nèi)存在著一類能識別并水解外源雙鏈DNA的核酸內(nèi)切酶,稱“限制性內(nèi)切酶” 。它們識別DNA中特定核甘酸序列,并在特定位點切斷DNA鏈,產(chǎn)生雙鏈裂口。但若識別序列中的堿基預先經(jīng)修飾,就不起作用。限制性內(nèi)切酶往往與一種甲基化酶同時成對存在,二者具相同底物專一性。 甲基化酶選擇性地催化細菌自身 DNA的甲基化修
14、飾反應。限制性內(nèi)切酶只降解異種 DNA ,不分解自身DNA ,可保衛(wèi)自身遺傳特性。作用方式:限制性內(nèi)切酶作用專一性強,有特異性識別序列,識別序列長度一般在4-8個堿基,且通常具有回文結(jié)構。2、喋吟和喀咤核甘酸從頭合成的各原子來源(P391-396)喋吟核甘酸從頭合成途徑中,喋吟環(huán)上原子來源于:N1來自天冬氨酸的氨基氮,甲酸鹽是C2和C8的來源,N3和N9來自于谷氨酰胺的酰胺氮,甘氨酸是C4 C5和N7的來源,CQ或碳酸氫鹽是C6的來源。喀咤核甘酸從頭合成途徑中,喀咤環(huán)上原子來源于:CO、NH (或氨甲酰磷酸)和天冬氨酸。動物機體中,喀咤核甘酸的合成場所是肝臟。與喋吟核甘酸不同的是,在從頭合成喀
15、咤核甘酸時,首先生成喀咤堿,再與磷酸-核糖復合物結(jié)合所有喀咤核甘酸中,最先合成的是尿甘酸。3、名詞解釋:西 以親代 DNA分子雙鏈為模板,按照堿基配對原則,合成與親代DNA分子相同的兩個雙鏈DNA分子的過程。曲以DNA分子中一條鏈為模板,按照堿基配對原則,合成一條與模板DNA互補的RNA分子的過程。所又稱“轉(zhuǎn)譯”,是指在mRNA旨令下,按照三聯(lián)體密碼原則,把mRNAh遺傳信息轉(zhuǎn)換成蛋白質(zhì)中特定氨基酸順序的過程。4、DNA的半不連續(xù)復制的定義及原因DNA的半不連續(xù)復制|: DNAM制時,前導鏈連續(xù)復制、滯后鏈不連續(xù)復制的現(xiàn)象。以復制叉向前移動為標準,一條模板鏈的走向為3 - 5在其上DNA能從5
16、 一 3方向連續(xù)合成,稱前導鏈,另一條模板鏈的走向為 5 -3在其上DNA也是從5 一3方向 合成。但是與復制叉移動方向正好相反,隨著復制的移動,形成許多不連續(xù)的片段,最后成一條完整的DNA鏈,稱滯后鏈,由于前導鏈的合成通常是連續(xù)的,因此稱DNA勺半不連續(xù)復制。5、大腸桿菌中3種主要的DNA聚合酶的作用特點,及異同點比較作用特點:DNA聚合酶I 7催化核甘酸聚合反應,使DNA鏈沿5 一 3方向延長即用漕!功能。由3 -OH端?g3 一 5方向水解DNA鏈,即3 一 5核酸外切酶功能,具有校刈作用。一| 由5-端沿5 一 3方向水解 DNA鏈,即5 一 3核酸外切酶功能。此功能只用于切除匚 由紫
17、外線照射而形成的喀仁更匚|DNA聚合酶n 1多亞基酶。其 5 一 3聚合酶活力比聚合酶I高,還具有3 一 5核酸外 切酶功能。推測其生理功能主要是參與DNA的損傷修復。DNA聚合酶出口寡聚酶,全酶由 10種亞基組成,含 Zn原子。它是三種聚合酶中活性最高 的,具聚合酶及3 一5核酸外切酶功能。 異同點:(1)都需模板指導,以四種脫氧核甘三磷酸為底物,且需具有3-羥基的引物存在,聚合反應沿 5 一 3方向進行。(2)都兼有3 一 5核酸外切酶活力,在聚合中起校 對作用。 不同點(1)酶I具有5 一 3核酸外切酶活力,酶H和出沒有這種活力。(2)酶H和出最適合作用于有小段缺口的雙鏈DNA酶I最適合
18、作用于具有大段單鏈區(qū)的雙鏈DNA (3)酶I屬于單體酶,酶n屬于多亞基酶而酶出屬于寡聚酶。(4)三種聚合酶活力的不同, 酶出活力最高,酶n活力次之,酶I活力最低。6、DNA連接酶的作用、要求作用:勝接酶可催化雙鏈 DNA中一條鏈斷口末端的 3-羥基與另一條鏈末端的 5-磷酸 基間生成3, 5-磷酸二酯鍵,從而將兩段 DNA1接起來。DNA1接酶在DNA的復制、修復 及重組中很重要。要求:旌接反應需能。細菌中的連接酶以NAD作為能量來源,真核細胞內(nèi)以 ATP為能量來源。7、名詞解釋:各類DNA損傷修復的定義錯配修復DNAM制中可能發(fā)生錯配, 若能及時校正,則新鏈上基因編碼的信息可得到恢復, 即進
19、行錯配修復。若被校正的是模板鏈,就意味著錯配的核甘酸以突變的形式被固定下來。 直接修復包括光修復系統(tǒng)和暗修復系統(tǒng)。光修復系統(tǒng):受紫外線損傷的細胞,在強可見光(波長為400-500nm)照射后,大部分能恢復正常機能。這是由于可見光, 尤其是其中的藍光激活細胞內(nèi)的光復活酶,使酶與喀咤二聚體結(jié)合并將二聚體分開,重新恢復為2個單獨的喀咤堿基。暗修復系統(tǒng):即切除含喀咤二聚體的核酸鏈,然后再修復合成。切除修復指在酶的作用下,將 DNA分子中受損部分切除,再以完整的那條鏈為模板,合成被切掉的部分,使 DNA恢復正常結(jié)構。包括切開、切除受損部分、修補及封口4步。重組修復|:結(jié)構損傷的 DNA在修復前仍可復制,
20、但在新合成子鏈中,與模板鏈受損部位對應的位置會有缺口。 帶缺口的子鏈與完整姐妹雙鏈中的親代鏈重組交換,用來自姐妹雙鏈的正常DNA片段填補子鏈上缺口。姐妹雙鏈中親代鏈上的缺口,以完整子鏈為模板,由DNA聚合酶催化修復合成。最后由DNA!接酶將新合成的片段連接到缺口處。應急反應(SOS和易錯修復mSOS反應是細胞在DNA受損或復制系統(tǒng)受抑制的緊急情況下, 為求生存而表現(xiàn)出的應急效應。此修復系統(tǒng)包括避免出錯的修復和傾向出錯的修復2類。其中傾向出錯的修復,因誘導產(chǎn)生了缺乏校對功能的DNA聚合酶。這些酶能在DNA受損部位催化復制,從而避免細胞死亡,但也帶來高變異率。8、大腸桿菌RNA聚合酶的亞基組成及各
21、亞基的功能大腸桿菌的RNA聚合酶全酶由5個亞基(a,2 3 , 3 , b)構成,co亞基。功能:a亞基上有3亞基結(jié)合位點,功能是進行全酶裝配及與DNA莫板上的啟動子區(qū)結(jié)合。3亞基上有底物 NTP吉合部位,功能是結(jié)合 NTP底物、引發(fā)RNAW鏈合成及催化延長。3 亞基可與 DNA模板結(jié)合,且與轉(zhuǎn)錄的終止有關。b亞基上有DNA啟動子識別位點,可進行啟動子識別,促進轉(zhuǎn)錄起始,又稱“起始亞基” 。詳細的請看書本457頁。9、大腸桿菌RNA轉(zhuǎn)錄的終止子(2類)不依賴于pg子的胃止子:又稱簡單終止子。簡單終止子除能形成發(fā)夾結(jié)構處,在終點前還有寡聚U系列|可能提供信號使 RNAm合酶脫離模板 DNA此外,
22、其回文對稱區(qū)常有一段而含G-C的序列c (3類終止信號)依賴于p因子的終止子:事較短,沒有富含G-C的序列,無U系列。作用機理:p因子先結(jié)合到 RNA新鏈上,位置在RNAm合酶后。然后借助水解NTP釋放的能 量推動自身在 RNA鏈上移動。當RN咪合酶遇到終止子而轉(zhuǎn)錄暫停時, p因子追上RNAm合 酶并將RNAlf鏈從模板DN釋放。RNAm合酶也與p因子一起從 DNA鏈上脫落。(P因子是一種分子量約 46000dal的蛋白質(zhì),具NTP水解酶活性,用于自身的獲能)10、真核生物mRNA轉(zhuǎn)錄后加工的主要內(nèi)容及加工過程真核生物中多數(shù)編碼蛋白質(zhì)的mRNA基因為不連續(xù)基因,其編碼序列(即外顯子)被非編碼序
23、列(即內(nèi)含子)隔成若干個片段。轉(zhuǎn)錄時,外顯子和內(nèi)含子一起被轉(zhuǎn)錄,生成分子量很 大的轉(zhuǎn)錄原初物。它在轉(zhuǎn)錄后加工過程中,被分成一些大小不等的中間產(chǎn)物,稱“核不均一 RNA,即 hnRNA。hnRNA中有一部分可轉(zhuǎn)變成細胞質(zhì)內(nèi)的成熟mRNA。具體加工過程真核生物mRNA前體的加工其實主要指 hnRNA的加工。加工過程包括:在 5-端形成特殊的帽子結(jié)構,在3-端添加多聚腺甘酸(即 polyA)尾巴,剪除內(nèi)含子并將外顯子拼接起來,對鏈內(nèi)特定核甘酸進行甲基化修飾;等等。5-端加帽:hnRNA的5-端原是三磷酸喋吟核甘,轉(zhuǎn)錄開始后三個磷酸中被脫去一個,成為二磷酸。此物質(zhì)與脫去一分子焦磷酸的GTP作用,使鳥喋
24、吟戊糖的 C5與原喋吟核甘酸戊糖 C5間以3個磷酸鍵相連。此物質(zhì)5-端鳥喋吟N7上被S-腺昔甲硫氨酸(SAM)甲基化,形成帽子結(jié)構。不同類型白帽子:CapO型、Cap I型、Cap n型。3-末端的產(chǎn)生和多聚腺甘酸化:mRNA3 -端多聚腺甘酸尾巴的產(chǎn)生過程可能: 由RNA酶出催化,在hnRNA的3-端切斷。 再在多聚腺甘酸聚合酶作用下,以帶 3-端-OH的RNA為受體,以ATP為腺甘酸供體,以 Mg2+或Mn2+為輔助因子,將 3-端進行多聚腺甘酸化。除酵母外的多數(shù)高等真核生物及病毒mRNA在近3-端處,者B有一段保守序列 AAUAAA 。推測,此保守序列是為 3-端的切斷及繼續(xù)發(fā)生多聚腺甘
25、酸化提供了信號。mRNA的多聚腺甘酸尾巴的功能用多聚腺甘酸化的特異性抑制劑:3-脫氧腺甘(即冬蟲夏草素)進行抑制實3后證明,hnRNA 3-端的多聚腺甘酸化是轉(zhuǎn)錄后加工中不可缺少的一步。mRNA的多聚腺甘酸尾巴在核酸外切酶降解RNA鏈時,可起到緩沖作用,對 mRNA上攜帶的信息進行保護。mRNA的內(nèi)部甲基化:真核生物的 mRNA及hnRNA分子內(nèi)部均發(fā)現(xiàn)有甲基化的堿基,主要是N6-甲基腺喋吟(m6A )。但有些真核生物及病毒的 mRNA分子中并無N6-甲基腺喋吟。這個甲基化修飾產(chǎn)物的功能不清。據(jù)推測,可能是與hnRNA的加工識別作用有 關。三、蛋白質(zhì)的合成及轉(zhuǎn)運1、遺傳密碼字典中的重要密碼子(
26、掌握典型的密碼子)見附錄2、密碼子的基本特性1 .方向性:密碼子的閱讀方向和 mRNAk從起始信號到終止信號白方向一樣,均為從| 5,-端至IJ 3二謫 這與mRN型物合成時鏈延伸方向也一致。2 .例并性:密碼表的64組密碼子中,除 UAA UAG UGAE組為終止密碼子外,其余 61組密碼子分別 代表20種氨基酸。象這樣編碼同一種氨基酸的密碼子稱“同義密碼子”。這種現(xiàn)象稱“密碼的簡并性”。簡并性的存在減少了由于堿基取代而造成的有害突變。偏愛密碼子。3 .根用性:病毒、原核生物或真核生物都共同使用同一套密碼字典。這種現(xiàn)象稱“密碼的通用性”。4 .枚碼的連續(xù)性7在mRNAit上,從起始信號到終止
27、信號,密碼子的排列一般是連續(xù)的。即密碼子間既沒有重 疊也不存在間隔,即無標點性。5.1 始密碼子和終止密碼子:AUGB編碼甲硫氨酸外,還是肽鏈合成的起始密碼子。少數(shù)情況下,也有以GUG乍為起始密碼子的。一般由UAAZUAGEEUGA這三組密碼子作為多終卜密碼子,4它們不編碼氨基酸。6.變偶性:密碼子的專一性主要取決于前 2位堿基,而第三位堿基重要性相對較低, 可以有一定程度的 變動。稱“變偶性”。3、三類經(jīng)典RNA中的tRNA的功能及其結(jié)構中的重要位點功能:蛋白質(zhì)生物合成需要tRNA作為氨基酸的轉(zhuǎn)運工具 重要位點:作為蛋白質(zhì)合成中的接頭分子,tRNA上與多肽合成相關的位點有:tRNA上3-端C
28、CAff列上的氨基酸接受位點; 識別氨酰-tRNA合成酶位點;核糖體識別位點; 反密碼子位點。四、基因表達調(diào)控1、名詞解釋:麋縱子:在細菌基因組中,編碼一組在功能上相關的蛋白質(zhì)的幾個結(jié)構基因,和共同的控制位點所組成的一個基因表達的協(xié)同單位,合稱操縱子。操縱子是DNAk控制蛋白質(zhì)合成的一個功能單位。控制位點一般位于結(jié)構基因上游,主要由操縱基因和啟動子組成,可接受調(diào)節(jié)基因產(chǎn)物的調(diào)節(jié)作用。*大腸桿菌乳糖操縱子的基因組成乳糖根存4括三個結(jié)杓基因Z、丫和A,其控制位點包括調(diào)率基因R序動基因p、叵基因。及終止基因t。啟動基因P提供轉(zhuǎn)錄起始信號,同時也是 RNA聚合酶的結(jié)合位點。 操縱基因。和其下游的結(jié)構基
29、因緊密結(jié)合,也可和調(diào)節(jié)基因的表達產(chǎn)物: 阻遏蛋白結(jié)合。 調(diào)節(jié)基因R可經(jīng)轉(zhuǎn)錄、翻譯產(chǎn)生阻遏蛋白。阻遏蛋白控制著操縱基因的開或關。三個結(jié)構基因Z、丫、A可經(jīng)轉(zhuǎn)錄、翻譯,產(chǎn)生蛋白質(zhì)產(chǎn)物,即三種酶:3半乳糖甘酶、3-半乳糖昔透性酶和3 半乳糖昔轉(zhuǎn)乙酰酶。 終止基因t提供轉(zhuǎn)錄的終止信號。2、酶合成的誘導和阻遏作用的機理誘導作用機理如:大腸桿菌乳糖操縱子模型。酶合成的誘導作用過程:乳糖操縱子中的三個結(jié)構基因 Z、Y、A是作為一個單位,同時進行轉(zhuǎn)錄和翻譯。轉(zhuǎn)錄時,由 RNA聚合酶結(jié)合到啟動基因上,然后右行經(jīng)過操縱基因,同時開始 轉(zhuǎn)錄三個結(jié)構基因,最后,轉(zhuǎn)錄過程終止于終止基因。調(diào)節(jié)基因經(jīng)轉(zhuǎn)錄、翻譯,生成阻遏蛋
30、白,有活性的阻遏蛋白會結(jié)合到操縱基因上,使RNA聚合酶不能再結(jié)合到啟動基因上,從而阻止下游三個結(jié)構基因的轉(zhuǎn)錄。 當培養(yǎng)基中有乳糖存在時,乳糖作為誘導物,可與阻遏蛋白優(yōu)先結(jié)合,生成二者復合物,使阻遏蛋白變構,失去活性,無法再與操縱基因結(jié)合,則阻遏作用消失。RNAm合酶可以結(jié)合到啟動基因上并右行,正常轉(zhuǎn)錄三個結(jié)構基因,并翻譯產(chǎn)生三種酶蛋白分子。 阻遏作用機理如:大腸桿菌色氨酸操縱子模型,色氨酸操縱子包括 5個結(jié)構基因,依次為 E、D C、日A, 分別編碼色氨酸合成中用于催化的鄰 -氨基苯甲酸合酶、鄰-氨基苯甲酸磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶、口引 喋-3-甘油磷酸合酶及色氨酸合酶的3和a亞基。單獨存在的阻遏蛋白無
31、活性,不能與操縱基因結(jié)合,即不能阻遏結(jié)構基因合成各種酶蛋白。當有輔阻遏物存在時,阻遏蛋白可與輔阻遏物結(jié)合,使阻遏蛋白被活化而變構。該復合物反而可與操縱基因相結(jié)合,使之被封閉,RNA聚合酶無法右行,導致結(jié)構基因不能合成相應的酶蛋白。3、酶合成的誘導和阻遏作用的異同點酶合成的誘導和阻遏作用是相似機制的兩種不同表現(xiàn)形式。 誘導作用是在各種分解酶中的通則,阻遏作用則是在合成酶中的通則。誘導物一般是代謝過程中的底物,輔阻遏物一般是代謝過程中的產(chǎn)物。二者都作為阻遏蛋白的拮抗物,但拮抗作用的最終結(jié)果剛好相反。麗京:目的都是控制酶合成的速度。作用都具高度特異性。4、降解物阻遏及衰減作用的機理降解物衰減作用的機
32、制:當培養(yǎng)基中無任何氨基酸時,前導肽不能形成,前導序列以A圖樣結(jié)構存在。此結(jié)構中 1和2、3和4互相配對而形成特殊莖環(huán)構象及mRNA鏈末端的PolyU區(qū)都提供了終止信號,促使轉(zhuǎn)錄停止。當培養(yǎng)基中色氨酸豐富時,前導序列翻譯產(chǎn)生前導肽。這時核糖體占據(jù)1和2位置,但3和4互補配對了,即形成終止信號,故轉(zhuǎn)錄也被終止。當培養(yǎng)基中有其他種類氨基酸但色氨酸量不足時,核糖體被阻滯在區(qū)域1的Trp密碼子處,導致2和3配對,而3和4不能配對形成終止信號。這樣轉(zhuǎn)錄可繼續(xù)進行。雖然衰減作用與阻遏作用一樣,都是在轉(zhuǎn)錄水平上進行的調(diào)控,但作用機制完全不同,它控制的是轉(zhuǎn)錄起始后能否繼續(xù)到 RNA聚合酶通過衰減基因并形成完整的mRNA。衰減子調(diào)控比阻遏作用調(diào)控更為精細。除色氨酸外,苯丙氨酸、蘇氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、繳氨酸和組氨酸的相關基因組中都存 在著衰減子的調(diào)節(jié)位點。
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