實驗室常用培養(yǎng)基的配制方法.

1、五、實驗室常用培養(yǎng)基的配制方法Amp icilli n（組份濃度 配制量 配制方法氨卡青霉素）（100 mg/ml）100 mg/ml A mp icillin50 ml1. 稱量5 g Ampicillin置于50 ml離心管中。2. 加入40 ml滅菌水，充分混合溶解后，定容至 50 ml。3. 用0.22 m過濾膜過濾除菌。4. 小份分裝（1 ml/份）后，-20C保存。IPTG（異丙基-P -D-硫代半乳糖苷）（24 mg/ml） 組份濃度配制量配制方法24 mg/mL IPTG50 mL1. 稱1.2 g IPTG置于50 ml離心管中。2. 加入40 ml滅菌水，充分混合溶解后，定

2、容至 50 ml。3. 用0 22 m過濾膜過濾除菌。4小份分裝（1 ml，份）后，-20r保存。X-Gal （20 mg/ml） 組份濃度配制量配制方法20 mg/ml X-Gal50 ml1. 稱量I g X-Gal置于50 ml離心管中。2. 加入40 ml DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50 ml。3. 小份分裝（1 ml/份）后，-20C避光保存。LB培養(yǎng)基組份濃度配制量 配制方法1%（W/V）Tryptone（胰蛋白胨）,0.5%（W/V）Yeast Extract（酵母提取物）, 1%（W/V）NaCl1 L1.稱取下列試劑，置于l L燒杯中。Tryptone10

3、 gYeast Extract5 gNaCl10 g2. 加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。3. 滴加 5 N NaOH（約 0.2 m1），調(diào)節(jié) pH 值至 7.0。4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1 L。5咼溫咼壓火菌后，4。C保存。LB/Amp培養(yǎng)基組份濃度1%(W/V)Tryptone0.5%(W/V)Yeast Extract1%(W/V)NaCl0.1 mg/mlAmp icilli n配制量 1 L配制方法 1.稱取下列試劑，置于I L燒杯中。Tryptone10 gYeast Extract5 gNaCl10 g2. 加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。3. 滴

4、加 5 N NaOH(約 0.2 mL)。調(diào)節(jié) pH 值至 7.0。4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1 L。5. 高溫高壓滅菌后，冷卻至室溫。6. 加入 1 ml Ampicillin(100 mg/ml)后均勻混合。7.4C保存。TB培養(yǎng)基組份濃度1.2%(W/V)Tryptone2.4%(W/V)Yeast Extract0.4%(V/V)Glycerol17mMKH2PO472mMK2HPOa配制量 配制方法1. L1. 配制磷酸鹽緩；中液(0.17 M KH2PO4, 0.72 M K2HPO4)100 ml。 溶解2.31 g KH2PC4和12.54 g K2HPO4于90 ml的去

5、離子水中，攪 拌溶解 后，加去離子水定容至100 ml，咼溫咼壓火菌。2. Tryptone12 gYeast Extract24 gGlycerol4 m3. 加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1 L后，高溫高壓滅菌。5. 待溶液冷卻至60C以下時，；加入100 ml的上述滅菌磷酸鹽緩沖液。64C保存。TB/Amp培養(yǎng)基組份濃度1.2%(W/V)Tryptone2.4%(W/V)Yeast Extract0.4%(V/V)Glycerol17 mMKH 2PO472 mMK2H PO40.1 mg/mlAmp icilli n配制量 1 L配制方法 1

6、.配制磷酸鹽緩沖液(0.17 M KH 2PO4，0.72 M K2HP04)100 ml。 溶解2.31 g KH2PO4,和12.54g K2HPO4于90 ml的去離子水中，攪 拌溶解后，加去離子水定容至100 ml，咼溫咼壓火菌。2.稱取下列試劑，置于I L燒杯中。Tryptone12 gYeast Extract24 gGlycerol4 ml3. 加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至I L后，高溫高壓滅菌。5. 待溶液冷卻至60C以下時，加入100 ml的上述滅菌磷酸鹽緩沖 液。6. 均勻混合后4C保存。SOB培養(yǎng)基2%(W/V)Trypton

7、e0.5%(W/V)Yeast Extract0.05%(W/V)NaCI2.5mMKCl10 mMMgCI 2L組份濃度配制量 配制方法11. 配制y 250 mM KCl 溶液。在90 ml的去離子水中溶解l.86 g KCl后，定容至100 ml。2. 配制2 M MgCI 2溶液。在90 ml去離子水中溶解19 g MgCI2后，定容至100 ml，高溫高壓滅菌。3.稱取下列試劑，置于I L燒杯中。Tryptone20 gYeast Extract5 gNaCI0.5 g4. 加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。5. 量取10 m1 250 mM KCI溶液，加入到燒杯中。6.

8、 滴加5 N NaOH溶液(約0.2 m1)，調(diào)節(jié)pH值至7.0。7. 加入去離子水將培養(yǎng)基定容至I L。8. 咼溫咼壓火菌后，4C保存。9. 使用前加入5 ml滅菌的2 M MgCI 2溶液。SOC培養(yǎng)基組份濃度2%(W/V)Tryptone0.5%(W/V)Yeast Extract0.05%(W/V)NaCl2.5 mMKCl10 mMMgCl220 mMGlucose100 mL1. 配制y l M Glucose 溶液。將18 g Glucose溶于90 ml去離子水中，充分溶解后定容至100 ml。用0.22 E濾膜過濾除菌。配制量 配制方法2. 向I 00 ml SOB培養(yǎng)基中加

9、入除菌的1 M Glucose溶液2 ml，均勻混合。2 NT培養(yǎng)基組份濃度 配制量 配制方法3.4c保存。1.6%(WV)Tryptone , 1%(W/V)Yeast Extract，0.5%(W/V)NaCI1 L1. 稱取下列試劑，置于l L燒杯中。Tryptone16 gYeast Extract10 gNaCl5 g2. 加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。3. 滴力卩5 N NaOH,調(diào)節(jié)pH值至7.0。4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1 L。5. 咼溫咼壓火菌后，4C保存。 bx broth組份濃度2%(W/V)Tryptone ， 0.5%(W/V)Yeast Extr

10、act ， o5%(W/V)MgSO 4 7H2O配制量 1 L配制方法 1.稱取下列試劑，置于I L燒杯中。Tryptone20 gYeast Extract5 gMgSO4 7H2O5 g2. 加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。3. 滴加1 N KOH。調(diào)節(jié)pH值至7.5。4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1 L。5. 高溫高壓滅菌后，4C保存。NZCYM培養(yǎng)基組份濃度0.5%(WV)Yeast Extract0.1%(WV)Casamino Acid （酪蛋白氨基酸）1%(WV)NZ胺0.5%(WV)NaCl0.2%(WV)MgSO4 7Ho1 L1.稱取下列試劑。置于I L燒杯中

11、。Yeast Extract5 gCasam ino Acid1 gNZ胺10 gNaCl5 gMgSO4 7Ho2 g2. 加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。3. 滴加 5 N NaOH（約 0.2 m1），調(diào)節(jié) pH 值至 7.0。4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1 L。5. 高溫高壓滅菌后，4C保存。配制量配制方法NZYM培養(yǎng)基組份濃度0.5%(WV)Yeast Extract1%(WV)NZ胺0.1%(WV)NaCl0.2%(WV)MgSO4 7HO配制方法NZYM培養(yǎng)基除不含Casamino Acid外，其他成份與 NZCYM培養(yǎng) 基相同。NZM培養(yǎng)基組份濃度1%(WV)NZ

12、胺0.1%(WV)NaCl0.2%(WV)MgSO4 7Ho配制方法 NZM培養(yǎng)基除不含Yeast Extract酵母提取物）外，其他成份與NZYM 培養(yǎng)基相同。一般固體培養(yǎng)基的配制配制方法 1.按照液體培養(yǎng)基配方準備好液體培養(yǎng)基，在高溫高壓滅菌前，加 入下列試劑中的一種。Agar（瓊脂；鋪制平板用）15 g/LAgar（瓊脂；配制頂層瓊脂用）7 g/LAgarose（瓊脂糖；鋪制平板用）15 g/LAgarose（瓊脂糖；配制頂層瓊脂用）7 g/L2.咼溫咼壓火菌后，戴上手套取出培養(yǎng)基，搖動容器使瓊脂或瓊脂糖充分混勻（此時培養(yǎng)基溫度很高，小心燙傷）。3. 待培養(yǎng)基冷卻至5060C時，加入熱不

13、穩(wěn)定物質(zhì)（如抗生素等）, 搖動容器充分混勻。4. 鋪制平板（3035 ml培養(yǎng)基/90 mm培養(yǎng)皿）。配制量 配制方法LB/A mp /X-Gal/L PTG 平板培養(yǎng)基 組份濃度1%(W/V)Tryptone0.5%(W/V)Yeast Extract1%(W/V)NaCl0.1 mg/mlAmpi cilli n0.024mg/mlIPTG0.04 mg/mlX-GaL1.5%(W/V)Agar1 L1.稱取下列試劑，置于I L燒杯中。Tryptone10 gYeast Extract5 gNaCl10 g2. 加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。3. 滴加 5 N NaOH（約

14、0.2 mL），調(diào)節(jié) pH 值至 7.0。4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1 L后，加入15 g Agar。5. 咼溫咼壓火菌后，冷卻至 60 C左右。6. 加入 1 ml Ampicillin（100 mg/ml）、1 ml IPTG（24 mg/ml）、2 ml X-Gal（20 mg/mL）后均勻混合。7. 鋪制平板（3035 ml培養(yǎng)基/90 mm培養(yǎng)皿）。8.4C避光保存。配制量 配制方法TB/A mp /X-Gal/L PTG 平板培養(yǎng)基 組份濃度1.2%(W/V)Tryptone2.4%(W/V)Yeast Extract0.4%(V/V)Glycerol17 mMKH 2PO47

15、2 mMK2H PO40.1 mg/mlAmp icilli n0.024 mg/mlIPTG0.04mg/mLX-GaL1.5%(W/V)Agar1 L1.配制磷酸鹽緩沖液(0.17 M KH2PO4, 0.72 M K2HPO4)100 ml。溶解2.31 g KH2PO4和12.54 g K2HPO4于90 ml的去離子水中，攪八、SDS-PAGE分離膠配方表拌溶解后，加去離子水定容至100 ml，咼溫咼壓火菌。2. 稱取下列試劑，置于I L燒杯中。Tryptone12 gYeast Extract24 gGlycerol4 ml3. 加入約800 ml的去離子水，充分攪拌溶解。4. 加

16、去離子水將培養(yǎng)基定容至1 L后。加入I 5 g Agar。5. 咼溫咼壓火菌后，冷卻至 60C左右。6. 加入100 ml的上述滅菌磷酸鹽緩沖液、I ml Ampicillin （100mg/ml）、1 ml IPTG（24mg/mL）、2 ml X-Gal（20 mg/ml）后均勻混合。7. 鋪制平板（3035 ml培養(yǎng)基/90 mm培養(yǎng)皿）。8 4 C避光保存。六、抗生素的貯存溶液及其工作濃度抗生素貯存液*1工作濃度濃度保存條件嚴緊型質(zhì)粒松弛型質(zhì)粒氨芐青霉素50 mg/ml（溶于水）-20 C20 g/ml60 g/ml羧芐青霉素50 mg/mL（溶于水）-20 C20 g/ml60 g/

17、ml氯霉素34 mg/mL（溶于乙醇）-20 C25 g/mll70 g/mL卡那霉素10 mg/mL（溶于水）-20 C10 g/ml50 g/ml鏈霉素10 mg/mL（溶于水）-20 C10 g/ml50 g/ml四環(huán)素*25 mg/mL（溶于乙醇）-20 C10 g/ml50 g/mL*1以水為溶劑的抗生素貯存液應通過 0.22 m濾器過濾除菌。以乙醇為溶劑的抗 生素溶液無須除菌處理。所有抗生素溶液均應保存于不透光的容器中。*2鎂離子是四環(huán)素的拮抗劑，四環(huán)素抗性菌的篩選應使用不含鎂鹽的培養(yǎng)基（如LB培養(yǎng)基）。七、SDS-PAGE 濃縮膠（5%Acrylamide）配方表各種凝膠體積所對

18、應的各種組份的取樣量各種組份名稱1 m12 m13 m14 ml5 ml6 m18 m110 mLH2O0.681.42.12.73.44.15.56.830%Acrylamide0.170.330.50.670.831.01.3171.0M Tris-HCI( pH6.8)0.130.250.380.50.630 751.0l.2510%SDS0.010.020.030.040.050 060.080.110%過硫酸銨0.010.020.030.040.050.060.080.1TEMED.0.0010.0020.0030.0040.0050.0060.0080.01各種組份名稱各種凝膠體積

19、所對應的各種組份的取樣量5m110m115m120 mI25m130m140m150 mI6%GelH2O2.65.37.010.613.215.921.226.530%Acrylamide1.02.03 04.05.06.08.010.01.5 M Tris-HCI( pH8.8)1.32.53.85.06.37.510.012.510%SDS0.050.10.150.20.250.30.40.510%過硫酸銨00.050.10.150.20.250.30.40.5TEMED.0-0.0040.0080.0120.0150.020.0240.0320.048%GelH2O2.34.66.99.311.513.918.523.230%AcryIamide1.32.74.05.36.78.010.713.31.5M Tris-HCI( pH8 8)1.32.53.85.06.37.510.012.510%SDS0.050.10.150.20.250.30.40.510%過硫酸銨0.0.050.10.150 20.250.30 40.5TEMED0.0030.0060.0090.0I20.0150.0180.0240.0310%GeLH2O1.94.05.97.99.914.915.919.830%Acr