腫瘤轉(zhuǎn)移的臨床檢測(cè)進(jìn)展

1、腫瘤轉(zhuǎn)移的臨床檢測(cè)進(jìn)展腫瘤轉(zhuǎn)移的臨床檢測(cè)進(jìn)展發(fā)布時(shí)間： 20XX-10-15作者：謝志堅(jiān)綜述 吳求亮審校腫瘤轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤最基本的生物學(xué)特征，是一系列具有內(nèi)在的多個(gè)步驟相互作用的結(jié)果，最早是Liotta提出的粘附、降解、移動(dòng)學(xué)說，每個(gè)步驟也是 有多個(gè)因素的共同參與，因而其具有復(fù)雜性。它是目前腫瘤患者死亡的主要原因。 當(dāng)前確定腫瘤轉(zhuǎn)移主要是依據(jù)常規(guī)病理切片的結(jié)果，但有些患者雖進(jìn)行了根治手術(shù)，且常規(guī)病理切片淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移，但隨后仍出現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移。所以單純根據(jù)常規(guī)病理 切片來進(jìn)行預(yù)后的判斷往往欠科學(xué)，因此急需發(fā)展新的手段來檢測(cè)腫瘤的轉(zhuǎn)移。近 年來隨著免疫學(xué)與分子生物學(xué)的發(fā)展，為更敏感地檢測(cè)到淋巴道、血道

2、中轉(zhuǎn)移的腫 瘤細(xì)胞提供可能，本文對(duì)該領(lǐng)域的研究進(jìn)展作一綜述。1 常規(guī)病理學(xué)方法淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的檢測(cè)通常是 HE染色，但敏感性較低，一般為104105 個(gè)正常細(xì)胞中能檢出一個(gè)腫瘤細(xì)胞，連續(xù)切片檢測(cè)能增加結(jié)果的穩(wěn)定性，最早對(duì)淋巴結(jié)的 微小轉(zhuǎn)移灶的檢測(cè)方法是連續(xù)切片法，有作者對(duì)400例乳腺癌常規(guī)切片陰性的淋巴結(jié)進(jìn)行連續(xù)切片檢測(cè)，檢出率為13% Wilkinson和Fisher的研究表明連續(xù)切片檢 測(cè)可使檢出率提高14%24%但由于該法工作量大且有較高的假陰性，所以難以推廣 應(yīng)用02 免疫組織化學(xué)方法粘附分子腫瘤要產(chǎn)生轉(zhuǎn)移必須先從原發(fā)灶脫落，然后游走至血管、淋巴管，與之產(chǎn)生粘附并進(jìn)入管腔才能產(chǎn)生轉(zhuǎn)移，而粘

3、附分子在其中起著重要作用。粘附分子有許 多種類，與腫瘤的轉(zhuǎn)移有關(guān)的研究主要集中在上皮粘附素1'- eadl'erin；'和CD44這兩個(gè)因子上。上皮粘附素I-： ccidhuriri是一種鈣依賴性的具有使細(xì)胞之間產(chǎn)生粘附功能的糖蛋白，是產(chǎn)生細(xì)胞連接的分子基礎(chǔ)。有研究表明許多腫瘤如乳腺癌、結(jié)腸癌、胃癌、膀胱 癌均可出現(xiàn)I：ri的減少，匸閒的減少使腫瘤細(xì)胞之間的粘附力降低，腫瘤細(xì)胞容易脫落而出現(xiàn)轉(zhuǎn)移。因此I-： adhuriri被看作抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的因素1 Hu nt 2的研究表明，對(duì)于較小的乳腺腫瘤，匸貂1血冷的表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移 具有相關(guān)性，認(rèn)為I： CcicRiuHri的減

4、低是腫瘤轉(zhuǎn)移過程中的早期事件。CD44另一個(gè)粘附分子CD44主要參與細(xì)胞與基質(zhì)間的粘附，且參與細(xì)胞的偽 足形成，與細(xì)胞的遷移有關(guān)3。許多研究表明，CD44基因的表達(dá)與腫瘤的轉(zhuǎn)移具有顯 著相關(guān)性，尤其CD44V與細(xì)胞骨架的相互作用在腫瘤的發(fā)展與轉(zhuǎn)移中起著重要作 用4 。且CD44V6陽性患者的預(yù)后顯著較差，經(jīng)多因素分析認(rèn)為CD44V6是獨(dú)立于腫瘤分期、淋巴結(jié)狀態(tài)的預(yù)后指標(biāo)5。其他粘附分子其他的粘附分子有整合素族與選擇素族。整合素族為細(xì)胞表面的糖蛋白受體，是由a、B亞單位通過非共價(jià)鍵連接的異二聚體，可以與纖粘蛋白、層粘蛋白、 膠粘蛋白等結(jié)合，參與細(xì)胞與基質(zhì)的粘附。有研究表明，惡性腫瘤細(xì)胞間粘附力

5、降低、侵襲力增加與整合素受體表達(dá)下降有關(guān)，Gui的研究對(duì)正常、良性、惡性乳腺組織的整合素受體表達(dá)水平進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)惡性腫瘤的整合素受體表達(dá)明顯下 降，多因素分析結(jié)果表明B l、a l、a亞屬可作為乳腺癌腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的重要指標(biāo)。選擇素族有P、E、L三種亞型，有研究表明E，選擇素在乳腺癌的轉(zhuǎn)移 中起著重要作用6。自分泌運(yùn)動(dòng)因子及受體自分泌運(yùn)動(dòng)因子（AMF）是一種分子量為亦霍 淋【）的熱溶蛋白質(zhì)，它 是一個(gè)家族，通過與受體（AMFR作用而刺激細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，AMFF是一個(gè)分子量為78KD的糖 蛋白，研究證實(shí)AMF受體gp78的表達(dá)直接與腫瘤的轉(zhuǎn)移能力有關(guān)，人癌標(biāo)本中的gp78 表達(dá)與臨床病理特征和病人預(yù)

6、后有關(guān)。Maruyama7的研究表明101例食道癌中有55例gp78表達(dá)陽性，它的表達(dá)與腫瘤生長(zhǎng)方式、腫瘤大小有關(guān)，且淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移者gp78表達(dá)率較高，說明與AMFF相關(guān)的腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)促進(jìn)了腫瘤的生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移。有 淋巴轉(zhuǎn)移的大腸癌其gp78表達(dá)率明顯增高，gp78陽性患者的5年生存率明顯低于 陰性者8。3 多聚酶聯(lián)反應(yīng)（PCR）方法近年來，在這方面的研究取得了長(zhǎng)足的進(jìn)展，多采用RT卩法擴(kuò)增外周血、骨髓或淋巴結(jié)在正常情況下不表達(dá)的組織或腫瘤特異性mRNA其敏感性為1X 106。因?yàn)閙RN在細(xì)胞外很不穩(wěn)定，所以一旦在組織或體液中檢測(cè)到特異性mRNAJ意味著有腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移，且有些腫瘤盡管有 RNA表達(dá)

7、但無蛋白表達(dá)，因此RT卩R法 比蛋白測(cè)定具有更高敏感性。前列腺特異性抗原mRNA有研究者對(duì)前列腺癌的微轉(zhuǎn)移進(jìn)行了研究，檢測(cè)了前列腺癌患者外周血、骨髓或淋巴結(jié)中前列腺特異性抗原（PSA）表達(dá)，結(jié)果表明：在確定有轉(zhuǎn)移的患者外周 血中PSA的檢出率為40%顯著高于無轉(zhuǎn)移的10%且具有良好的特異性9,10。 細(xì)胞角蛋白mRNA細(xì)胞角蛋白（CK）是一個(gè)多基因家族，主要在上皮細(xì)胞表達(dá)，CKs有20 多個(gè)不同亞類構(gòu)成，主要有 CK8 CK19 CK20等，由于CK8 CK19能在正常人外周血中 表達(dá)，而CK20不在外周血中表達(dá)，所以CK20可作為有些腫瘤如乳腺癌、膀胱癌和大 腸癌的血道轉(zhuǎn)移指標(biāo)11。Soet

8、h用巢式RT卩1CR監(jiān)測(cè)了 57例大腸癌患者的骨髓CK20mRNA表達(dá)，陽性率為65% 12。CK19作為乳腺癌淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移指標(biāo)也取得了較好 的結(jié)果，10個(gè)常規(guī)切片陽性的淋巴結(jié) CK19mRN也為陽性，而53個(gè)陰性淋巴結(jié)中有5個(gè)CK19mRNA為陽性，表示有微小轉(zhuǎn)移13。CK是目前檢測(cè)腫瘤微轉(zhuǎn)移使用較多的 一個(gè)指標(biāo)。特別是檢測(cè)食道癌與頭頸鱗癌的淋巴轉(zhuǎn)移方面，得到大家的認(rèn)可。酪氨酸酶mRNA酪氨酸酶是黑色素細(xì)胞合成黑色素的關(guān)鍵酶，在正常情況下黑色素細(xì)胞不會(huì)出現(xiàn)在外周血，所以一旦在外周血檢出酪氨酸酶可提示有血道轉(zhuǎn)移。Wang 14對(duì)29例黑色素瘤患者的區(qū)域淋巴結(jié)，其中一半作 HE染色，不確定時(shí)作F

9、朋4b或 S 100免疫組化染色，另一半作酪氨酸酶mRNA勺R(shí)T卩R檢測(cè)。29例臨床I、U期 黑色素瘤常規(guī)病理檢查有11例淋巴結(jié)陽性，而檢出酪氨酸酶的有 19例，18例陰性的 淋巴結(jié)RT卩R陽性有8例，平均隨訪1年后，這8例患者全部復(fù)發(fā)。因此酪氨酸酶 mRN的 RT卩CR對(duì)于判斷術(shù)后是否需要全身化療以及化療效果具有指導(dǎo)意義。有研究者報(bào)道，應(yīng)用RT卩法能敏感地檢出黑色素瘤免疫治療后患者血與骨髓中的殘留細(xì)胞，對(duì)預(yù)示復(fù)發(fā)及探討復(fù)發(fā)機(jī)制具有重要意義。腫瘤排斥抗原mRNA腫瘤排斥抗原MAG也被列為腫瘤轉(zhuǎn)移指標(biāo)，有研究表明，94%勺食道癌，81%勺大腸癌，80%勺乳腺癌，83%勺胃癌在12種MAG基因亞型

10、中至少有一種陽性。在14例常規(guī)病理檢查為陰性的淋巴結(jié)中，有7例MAG陽性，其中有5例出現(xiàn)血管侵襲。 該方法的特異性高，假陽性率很低，但由于有 12種基因亞型給實(shí)驗(yàn)操作帶來困難。 癌胚抗原mRNA癌胚抗原CEA曾被廣泛用于惡性腫瘤的診斷，近來有研究表明檢測(cè)外 周血中CEAmRNA勺表達(dá)可以作為是否存在血道轉(zhuǎn)移的指標(biāo)，31例結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者中 有26例外周血CEAmRN的表達(dá)陽性15。從102例消化道腫瘤、乳腺癌的606個(gè)淋 巴結(jié)中進(jìn)行CEA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，常規(guī)組織切片淋巴結(jié)陽性率為 16%而CEA診斷陽性率 為56%從預(yù)后結(jié)果來看，CEA與組織學(xué)診斷的陽性率在根治切除患者中分別為 64%與 4%在相

11、對(duì)治愈切除患者中分別為85%與 37%在姑息切除患者中分別為100%與 86% 在復(fù)發(fā)患者中分別為100%與 85%由此可見CEAmRN可作為一個(gè)重要的檢測(cè)指標(biāo)。Mori 16 對(duì)13例大腸癌患者的117個(gè)淋巴結(jié)進(jìn)行了 CEAmRN檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)88個(gè)常規(guī) 檢測(cè)陰性的患者淋巴結(jié)有47個(gè)淋巴結(jié)CEAmRN陽性。該作者還對(duì)65例消化道腫瘤及乳 腺癌患者的406個(gè)淋巴結(jié)進(jìn)行CEAmRN的RT卩R檢測(cè)并進(jìn)行了隨訪，微轉(zhuǎn)移率為 % 有淋巴轉(zhuǎn)移的15例患者6例復(fù)發(fā)，29例有微轉(zhuǎn)移的患者4例復(fù)發(fā)。21例無微轉(zhuǎn) 移患者無復(fù)發(fā)，這進(jìn)一步說明了 CEAmRN的重要性17。蛋白溶解酶類mRNA癌細(xì)胞合成和釋放溶解酶是促

12、進(jìn)癌細(xì)胞從瘤體分離繼而引起轉(zhuǎn)移的一個(gè)重要因素。腫瘤部位細(xì)胞外液中許多酶活性增高，如肽酶和組織蛋白酶，這些酶多來 自于癌細(xì)胞的溶酶體，也可來自腫瘤壞死區(qū)的巨噬細(xì)胞，這些酶在癌細(xì)胞分解細(xì)胞 外基質(zhì)與松解細(xì)胞粘附中起重要作用。內(nèi)糖苷酶mRNA內(nèi)糖苷酶能特異地降解基底膜成分硫酸乙酰肝素，該酶的活性與一些腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力有關(guān)18。W型膠原酶mRNAW型膠原是基底膜的主要成分，它能被W型膠原酶特異性水解，它至少有三種不同形式，它不僅能降解W型膠原，還能降解V、/、X型膠原，纖粘蛋 白，彈性蛋白及白明膠。有研究發(fā)現(xiàn)，該酶的水平在許多高轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞中增加， 因此該酶在腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移中起著重要作用。在小鼠

13、雜交瘤細(xì)胞和癌基因轉(zhuǎn)染 的細(xì)胞中，W型膠原酶的表達(dá)與轉(zhuǎn)移能力相關(guān)。Pyke等利用原位雜交發(fā)現(xiàn)在大部分 浸潤(rùn)型基底細(xì)胞癌和鱗癌中可見W型膠原酶的 mRNA表達(dá)19。有研究者對(duì)高轉(zhuǎn)移 與非轉(zhuǎn)移口腔癌細(xì)胞株的金屬蛋白酶 2(MMP2表達(dá)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)高轉(zhuǎn)移口腔癌細(xì) 胞株主要表達(dá)MMP2且MMP2勺活性與淋巴轉(zhuǎn)移和對(duì)局部下頜骨侵襲顯著相關(guān) 20。 血纖維蛋白溶酶原激活酶 mRNA血纖維蛋白溶酶原激活酶（PA）是一種特異性的絲氨酸蛋白酶，它催化非活性血纖維蛋白酶轉(zhuǎn)化為活性血纖維蛋白酶。血纖維蛋白酶是一種廣譜蛋白酶。它催 化血纖維蛋白、粘連蛋白及層粘連蛋白。還能活化潛在的蛋白酶。它以組織型I卩爾 與尿激酶

14、I.卩型兩種形式存在，它們的功能是不同的，參與癌侵襲與轉(zhuǎn)移的 是I門0組織蛋白酶B、DmRNA組織蛋白酶B、D是溶酶體蛋白酶，參與對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的溶解，有一些 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，它們也與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)21 。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C及受體mRNA血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子©是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子家族中的一員，是近 年來才被發(fā)現(xiàn)的一種生長(zhǎng)因子。Jeltsch 22發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 C基因鼠皮下 出現(xiàn)大量擴(kuò)張淋巴管，這才確立了血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 C在淋巴管生成中的重要地位。 它可由腫瘤細(xì)胞或基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生，作用于淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞上的酪氨酸激酶受體（flt4）而后出現(xiàn)淋巴內(nèi)皮細(xì)胞增殖。這樣，對(duì)腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制有

15、了新的、 更進(jìn)一步的認(rèn)識(shí)。有研究者運(yùn)用原位雜交技術(shù)對(duì)前列腺癌的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（；（V：GFC）及受體的表達(dá)進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C及受體mRN表達(dá)在淋巴 結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組明顯高于陰性組23 o Kurebayashi 24對(duì)乳腺癌的VI'.fT ;、B、 C、D的mRN進(jìn)行PCR僉測(cè)，發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組只表達(dá) VEi；F C，這進(jìn)一步說 明了 VEGF I：在淋巴轉(zhuǎn)移中的重要作用。但也有作者發(fā)現(xiàn)在惡性間皮瘤中VEGF （:的表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移無關(guān)25o在這一方面還存在較大的爭(zhēng)論。我們認(rèn)為從理論上說既然腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移是腫瘤細(xì)胞脫離原發(fā)部位，通過腫瘤周圍淋巴管游走至淋巴結(jié)，且 有充分證

16、據(jù)證明YF.GF (:是與淋巴管增生有關(guān)，那么YECF (:很可能參與腫瘤轉(zhuǎn)移 的過程，這當(dāng)然需要研究的更進(jìn)一步證實(shí)。4 基因水平分析方法腫瘤基礎(chǔ)研究表明，腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移須通過多個(gè)步驟才能完成，且每個(gè)步驟多由多個(gè)基因共同控制，只有在轉(zhuǎn)移相關(guān)基因與轉(zhuǎn)移抑制基因平衡失調(diào)才最終決定 是否導(dǎo)致轉(zhuǎn)移。近年來有關(guān)該領(lǐng)域的研究一直是腫瘤基礎(chǔ)研究的熱點(diǎn)。由于腫瘤的 發(fā)生發(fā)展與癌基因的激活有關(guān)，所以部分癌基因的表達(dá)可能與腫瘤的轉(zhuǎn)移有關(guān)。1984 年Vousden等發(fā)現(xiàn)小鼠淋巴瘤有了活化的C K雹憶基因表達(dá)時(shí)，同時(shí)也就獲得 了轉(zhuǎn)移性o 1987年Collard以人的C II雹點(diǎn)癌基因轉(zhuǎn)染非侵襲性、無轉(zhuǎn)移能力的小鼠B

17、W5147T淋巴瘤細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞侵襲力增高，將這種細(xì)胞經(jīng)尾靜脈注射， 可發(fā)生肝、腎等器官的轉(zhuǎn)移，且這種轉(zhuǎn)移與細(xì)胞的ras基因的表達(dá)水平有關(guān)。有研究者用fos基因轉(zhuǎn)染大鼠3Y1細(xì)胞，可使其獲得較高的肺轉(zhuǎn)移能力。隨著近年來對(duì)癌基因的臨床意義的闡明，一些癌基因不僅可作為腫瘤的常規(guī)診斷指標(biāo)，而且可被列為轉(zhuǎn)移的指標(biāo)。原癌基因RET可作為轉(zhuǎn)移性髓樣甲狀腺癌的診斷指標(biāo)26; Zhang 27的研究表明P53基因突變可作為結(jié)直腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn) 移的前兆，而在頭頸部鱗癌中P53基因的過表達(dá)也有明確的診斷意義：P16往往表 達(dá)在轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)中28； c erbB ?已被列為膀胱癌、乳腺癌、卵巢癌的惡性指 標(biāo)；

18、最近有研究發(fā)現(xiàn)口腔與肺鱗癌中有 U ijfbl! 2的過表達(dá)29。有研究者30 從鼠高轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞中篩選出轉(zhuǎn)移相關(guān)基因mtal ,它在高轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞株中的表達(dá)比低轉(zhuǎn)移株高4位，且與轉(zhuǎn)移潛能有關(guān)。還有研究者31發(fā)現(xiàn)旳：與 胚I 2基因在乳腺癌中的共同表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)。5 展望腫瘤轉(zhuǎn)移一直是腫瘤基礎(chǔ)研究的熱點(diǎn)，隨著近年來分子生物學(xué)的發(fā)展， 在該領(lǐng)域研究取得了突破，但怎么找到更敏感，更具特異性的指標(biāo)始終是腫瘤研究工 作者的奮斗目標(biāo)。敏感性提高的同時(shí)怎樣降低假陽性率，確定腫瘤微轉(zhuǎn)移與個(gè)體的 預(yù)后之間的關(guān)系，以及闡明腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因之間的相互作用還需我們付出更多的 努力，總之，隨著腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)機(jī)理

19、因素的進(jìn)一步闡明，必將對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的早期診 斷、治療方案的選擇及預(yù)后的判斷帶來深遠(yuǎn)的影響。參考文獻(xiàn)Res,1995;599220:5195-5199Arch,1997;430(4):285-299In vestDermatol,1993;100 (2) :115Neuroo ncol,1995;26(3):201-208,1995;345:615-619Res,1997;17(2B):1367-JR,Hermar JG,LapidusRG,etNCQouglas AG,Jass niB,etL, EtohT,Stame ndovicL,et-120LY,L idaN,Welsh CF,etM,H

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