Egr1基因剔除對雨蛙素誘導小鼠胰腺炎的影響

1、Egr1基因剔除對雨蛙素誘導小鼠胰腺炎的影響作者：段佑才，姜泊，智發(fā)朝，宋于剛，陳學清【關鍵詞】急性病pan creatitis inKno ckout Egr1 ameliorates cearule inin duced mice【Abstract 】 AIM:To study the role of Egr1 in the initiationof acute pan creatitis.METHODS: Exp erime ntal pan creatitiswas in ducedin the Egr1 kno ckout mice with highdose of cearule

2、in. The pan creatitis in dices such as water content of pan creas, serum amylase and myeloperoxidase (MPO)activities were measured. The histology of pancreas and lung was observed un der microsc opy. RESULTS:The water content ofpancreata in Egr1 knockout mice was significantly reduced () % vs () % ,

3、 Pv . No significant differenee of MPO levels in pancreata and serum amylases was found betwee n the wildt ype and Egr1 kno ckout mice. However, the lung MPO levels in Egr1 kno ckout mice were sig nifica ntly reduced pared with those in wildtype mice( ) % vs ( % ), Pv .In Egr1 kno ckout mice, the hi

4、stological app eara nee in pan creas and lung improved, though somevacuoles in acinar cells and light edemain pancreas were observed in pancreas. CONCLUSION: The severity of pancreatitisandlung damageis ameliorated in Egr1 knockout mice stimulated by highdosage of cearulein, suggesting that Egr1 is

5、one of the important factors in the in itiati on of acute pan creatitis.【Keywords! acute disease; pancreatitis; early growth response factor 1; mice, kno ckout【摘要】 目的：探討Egr1在實驗性胰腺炎發(fā)病中的作用. 方法：利 用Egr1基因剔除小鼠，采用大劑量雨蛙素誘導的實驗性胰腺炎模型，觀察Egr1基因剔除后，胰腺組織水腫，組織髓過氧化物酶(MPO水平，血清淀粉酶水平， 肺組織MPOK平，以及胰腺與肺組織學改變.結果：與野生型相比，E

6、gr1基因 剔除小鼠胰腺組織水腫明顯減輕( ) % vs ( )%, pv,但組織MPO 水平與血清淀粉酶與野生型組間相比無明顯改變；肺組織MPO水平與野生型組相 比明顯降低( ) % vs ( ) %, pv.在組織學上，Egr1基因剔除組 胰腺和肺組織學明顯改善，但胰腺腺泡仍有空泡變性及輕度腫脹.結論：Egr1基因剔除可明顯減輕實驗性胰腺炎胰腺和肺組織的損傷.【關鍵詞】 急性病；胰腺炎；早期生長反應因子 1;小鼠，基因敲除0引言前炎性轉錄因子及炎性因子在急性胰腺炎的發(fā)生和發(fā)展中有重要作用.其中，核轉錄因子 K B (nuclear factork B, NF k B)及其靶因子的研究加深了

7、人們的認識1-4 .核轉錄因子早期生長反應因子 1(early growth response1)在實驗性胰腺炎早期高表達5 . Egr1是炎癥啟動的關鍵因子，可能在急性 胰腺炎的啟動中有著十分重要的作用 6.為進一步研究Egr1在急性胰腺炎中 的作用，我們利用Egr1基因剔除小鼠，用大劑量的雨蛙素誘導制造急性胰腺炎 模型，對Egr1的作用進行探討.1材料和方法材料Egr1基因缺失(Egr1 KO)小鼠(美國華盛頓大學Jeffrey Milbrandt同意使用)飼養(yǎng)于12 h明亮/黑暗環(huán)境中，自由進食和飲水.由于Egr1 KO的小鼠無 生殖能力，故用雜合子的Egr1基因缺失小鼠交配繁殖可得到

8、Egr1 KO小鼠，雜 合子小鼠及正常小鼠(野生型，wildtype, WT .小鼠基因型分析鑒定采用PCR 方法.將出生34 wk的小鼠用蛋白酶K 55C過夜消化后，加5 mol/L的氯化 鈉離心得上清，再將上清中入預冷的乙醇中，其沉淀物即基因組DNA.基因型鑒定用常規(guī)PCF方法，弓I物為：egr1上游5 AACCGGCCCAGCAAGACC SF游 5 GGGCACAGGGGATGGGAAT產物片段 400 pb ; neo 基因： 5 CTCGTGCTTTACGGTATCQC和egr1上游引物一起使用，產物片段 420 bp.方法小鼠(雌雄不拘，2226 g)在實驗前禁食24 h，但可自

9、由飲水.雨蛙素(cearulein ， Sigma)溶于生理鹽水中(50 g/L), ip50卩 g/(kg ? h) 5 h 誘導實驗性胰腺炎結束時，用乙醚麻醉后剪開胸腔，抽取心內血液，并取少量肺組 織.然后，剪開腹腔，顯露胰腺組織，小心剪下放入預冷的中性PBS液(pH 中，并剔除脂肪.一部分固定于中性100 g/L的多聚甲醛，其它放入液氮中冷凍 后，-70C保存.血液離心后取血清，分裝后-70C保存.正常對照組(control, Con)小鼠注射同體積的生理鹽水.實驗分正常對照組，野生型雨蛙素組(WT 和Egr1基因剔除雨蛙素組(KO,每組5只.血清淀粉酶(P hadebas淀粉酶試驗)、

10、組織髓過氧化物酶(myeloperoxidase, MPO )、組織含水的比率的檢測，以及組織學檢查參考文 獻3進行.其中酶活性和含水量，均為與對照的百分比來表示.統(tǒng)計學處理：數(shù)據(jù)均用(X s)表示.用SSPS軟件F檢驗對數(shù)據(jù)進行分析.2結果大劑量的雨蛙素可明顯引起胰腺炎，胰腺組織表現(xiàn)為急性水腫、組織間隙 增寬，胰腺腺泡細胞明顯腫脹，少數(shù)細胞表現(xiàn)為空泡變性(Fig 1A)，而正常對照組胰腺組織在組織學上沒有明顯的改變(Fig 1B).在組織學上，KO組( Fig 1C)無明顯水腫，組織間隙無明顯增寬，其組織水腫與正常對照組相比也無明顯 的差異.但是，胰腺腺泡細胞仍輕度腫脹及空泡變性， 并可見少

11、量炎性細胞的浸 潤.血清淀粉酶()%、組織MPq( )%和組織含水量( )%在 WT組與 正常對照組織相比也均明顯升高(Fig 1D )，與文獻報道相似.但是，大劑量雨 蛙素不能誘導Egr1 KO小鼠出現(xiàn)典型的實驗性胰腺炎.對胰腺炎指標的檢測表明， KO組的血清淀粉酶()%和組織MPq ( )%、與 WW間無明顯差異，但KO 組的組織含水量明顯減低()%、( Fig 1D ).結果表明，Egr1基因剔除， 可明顯減輕胰腺組織的水腫.在組織學上，與正常對照組(Fig 2A)和KOffl( Fig 2B)相比，W1ffl( Fig 2C )肺組織有大量的炎性細胞浸潤.對肺組織MPO勺檢 測(Fig

12、 2D )也表明，( )%、明顯高于對照組和 KOffl： ( )% :， 但同時，K0組與正常對照組相比，MPOK平也明顯增高.結果提示，Egr1基因 剔除，可以明顯減輕實驗性胰腺炎肺組織的炎癥.3討論我們利用Egr1基因剔除小鼠，對Egr1在急性胰腺炎中的作用探討發(fā)現(xiàn)， 在雨蛙素誘導的胰腺炎模型中，Egr1基因剔除可明顯減輕胰腺組織的水腫，表 明Egr1對TF有調節(jié)作用5 . Egr1基因剔除對于組織MPC及血清淀粉酶無明 顯影響.由于NFk B是急性胰腺炎炎癥的重要調節(jié)因子 3，而且胰腺炎發(fā)生時 胰酶本身對于胰腺組織的可能的直接損傷作用，所以，我們認為胰腺本身的炎癥和損傷在很大程度上可能

13、與 NFk B和胰腺激活有關7.我們的結果提示，NFk B 和胰酶的激活在對胰腺組織直接損傷方面可能起著較為重要的作用.雖然Egr1基因剔除不能完全減輕胰腺腺泡細胞損傷， 但可明顯減輕肺組織 的損傷.以前的研究表明，如果減少炎癥因子如ICAM1 C5a在肺組織中的表達 2, 8 ，可明顯減輕肺組織的炎性浸潤.所以，肺組織的炎癥損傷是急性胰腺 炎全身炎癥反應的一部分.因此我們推測，Egr1基因剔除減輕肺組織的炎癥和 損傷可能是通過減少胰腺組織所釋放的炎性因子所致 .【參考文獻】1 馬茂，耿志琴，和新穎，等.地塞米松抑制炎癥介質改善重癥急 性胰腺炎的預后J.第四軍醫(yī)大學學報.20XX; 23 (1

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