抗生素類藥物分析ppt課件

1、精選ppt第十六章第十六章抗生素類藥物分析抗生素類藥物分析精選ppt第一節(jié)第一節(jié) 概述概述精選ppt一、抗生素的定義及特點一、抗生素的定義及特點低化學純度低化學純度同系物多、異構體多、降解物多同系物多、異構體多、降解物多活性組分的變異性活性組分的變異性生產(chǎn)過程中條件的變化生產(chǎn)過程中條件的變化不穩(wěn)定性不穩(wěn)定性不穩(wěn)定性結構不穩(wěn)定性結構 是指是指“生物在其生命活動中產(chǎn)生的，能在生物在其生命活動中產(chǎn)生的，能在低微濃度下有選擇地抑制或影響它種生物機低微濃度下有選擇地抑制或影響它種生物機能的化學物質的總稱能的化學物質的總稱”精選ppt抗生素的分類抗生素的分類內(nèi)酰胺類抗生素內(nèi)酰胺類抗生素四環(huán)素類抗生素四環(huán)素

2、類抗生素氨基糖苷類抗生素氨基糖苷類抗生素大環(huán)內(nèi)酯類抗生素大環(huán)內(nèi)酯類抗生素多烯大環(huán)類抗生素多烯大環(huán)類抗生素制菌霉素、兩性霉素制菌霉素、兩性霉素多肽類抗生素多肽類抗生素放線菌素、多黏菌素放線菌素、多黏菌素酰胺醇類抗生素酰胺醇類抗生素氯霉素氯霉素抗腫瘤類抗生素抗腫瘤類抗生素其他抗生素其他抗生素二、抗生素類藥物的分類二、抗生素類藥物的分類按化學結構分按化學結構分精選ppt三、抗生素類藥物的細菌耐藥性三、抗生素類藥物的細菌耐藥性精選ppt精選ppt精選ppt精選ppt三、抗生素類藥物的細菌耐藥性三、抗生素類藥物的細菌耐藥性1、耐藥性的種類、耐藥性的種類固有耐藥性固有耐藥性：天然耐藥性，由細菌染色體基因決

3、定：天然耐藥性，由細菌染色體基因決定獲得性耐藥性獲得性耐藥性：2、耐藥的機制、耐藥的機制（1）產(chǎn)生滅活酶，使抗菌藥失活）產(chǎn)生滅活酶，使抗菌藥失活 如如-內(nèi)酰胺酶內(nèi)酰胺酶（2）抗菌藥物作用靶位改變）抗菌藥物作用靶位改變（3）降低細菌外膜通透性）降低細菌外膜通透性（4）影響主動流出系統(tǒng)）影響主動流出系統(tǒng)精選ppt精選ppt四、抗生素藥物的質量分析四、抗生素藥物的質量分析鑒別試驗鑒別試驗1、官能團的顯色反應、官能團的顯色反應特殊基團特殊基團的反應的反應2、光譜法、光譜法特征吸收特征吸收3、色譜法、色譜法保留行為保留行為4、生物學方法、生物學方法抗菌能力抗菌能力精選ppt檢查檢查1、影響產(chǎn)品穩(wěn)定性的檢

4、查項目、影響產(chǎn)品穩(wěn)定性的檢查項目水份、酸水份、酸堿度等堿度等2、控制有機和無機雜質的檢查項目、控制有機和無機雜質的檢查項目3、與臨床安全性密切相關的檢查項目、與臨床安全性密切相關的檢查項目異異常毒性、熱原等常毒性、熱原等4、其他檢查項目、其他檢查項目其他共存組分其他共存組分精選ppt 含量或效價測定含量或效價測定1、微生物檢定法、微生物檢定法比濁法比濁法管碟瓊脂擴散法管碟瓊脂擴散法抑菌圈抑菌圈Potency:是指每是指每ml或每或每mg中含有某種中含有某種抗生素有效成分的多少抗生素有效成分的多少 U/mg是以抗生素對微生物的殺傷或是以抗生素對微生物的殺傷或抑制程度為指標來判斷效價的抑制程度為指

5、標來判斷效價的一種方法一種方法方法方法精選ppt靈敏度高、需用量少靈敏度高、需用量少適用范圍廣適用范圍廣純品、不純品、已知的和新的純品、不純品、已知的和新的可一次測定同類型抗生素的總效價可一次測定同類型抗生素的總效價無需分離純化無需分離純化與臨床的應用要求一致與臨床的應用要求一致操作繁瑣、費時費力操作繁瑣、費時費力誤差較大誤差較大是結構復雜和多組分抗生是結構復雜和多組分抗生素效價測定的首先方法素效價測定的首先方法優(yōu)點優(yōu)點 含量或效價測定含量或效價測定1、微生物檢定法、微生物檢定法缺點缺點精選ppt 2、物理化學法、物理化學法 HPLC LC-MS UV 容量法容量法準確可靠、專屬性高、操作簡單

6、、省時、樣品用量少準確可靠、專屬性高、操作簡單、省時、樣品用量少1、對結構已知或提純的抗生素、對結構已知或提純的抗生素2、需要標準品對照、需要標準品對照儀器分析方法儀器分析方法 含量或效價測定含量或效價測定精選ppt第二節(jié)第二節(jié) -內(nèi)酰胺類抗生素內(nèi)酰胺類抗生素精選ppt-內(nèi)酰胺類抗生素內(nèi)酰胺類抗生素6-氨基青霉烷酸氨基青霉烷酸（6-APA）；）；青青霉素類；霉素類；7-氨基頭孢菌烷氨基頭孢菌烷酸（酸（7-ACA）；）；頭孢菌素類；頭孢菌素類；一、結構及分類一、結構及分類NSCH3CH3COOHONHRO1234567HHHNONHRO567SCOOHCH2R181234HH氫化噻嗪環(huán)氫化噻嗪環(huán)

7、氫化噻唑環(huán)氫化噻唑環(huán)精選pptCONSOHNCOOHCH3CH3CH2青霉素青霉素（青霉素鉀、鈉）（青霉素鉀、鈉）精選pptNH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH2氨芐西林氨芐西林（氨芐青霉素）（氨芐青霉素）精選ppt阿莫西林阿莫西林（羥氨芐青霉素）（羥氨芐青霉素）NH2CONSOHNCOOHCH3CH3HOCH2C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2精選ppt頭孢氨芐頭孢氨芐NONHSCH3COOHOCNH2CH2精選ppt頭孢羥氨芐頭孢羥氨芐NONHSCH3COOHOCNH2CH2HO精選ppt 理化性質理化性質1 1、酸性與溶解性、酸性與溶解性

8、2 2、旋光性、旋光性3 3、紫外吸收特性、紫外吸收特性4 4、不穩(wěn)定性、不穩(wěn)定性NONHRO567SCOOHCH2R181234精選pptNSOHNCOOKCH3CH3OCCH2酸性酸性一、結構特點與性質一、結構特點與性質NaNa與堿金屬與堿金屬(Na(Na+ +、K K+ +) )成鹽成鹽 （一）羧基（一）羧基 易溶于水易溶于水 與有機堿與有機堿( (普魯卡因普魯卡因) )成鹽成鹽 難溶于水難溶于水普魯卡因普魯卡因青霉素青霉素C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2NSO123456787654321NOS頭孢菌素類頭孢菌素類 C6 C7青霉素類青霉素類

9、 C3 C5 C6 旋光性旋光性 NSO頭孢菌素類頭孢菌素類 母核有共軛體系母核有共軛體系 青霉素類青霉素類 母核無明顯母核無明顯UVUV 多數(shù)有苯環(huán)取代基多數(shù)有苯環(huán)取代基 NOS UVUV精選ppt（四）（四）內(nèi)酰胺環(huán)的不穩(wěn)定性內(nèi)酰胺環(huán)的不穩(wěn)定性 水溶液水溶液 不穩(wěn)定不穩(wěn)定 干燥純凈干燥純凈 穩(wěn)定穩(wěn)定 不穩(wěn)定不穩(wěn)定性因素性因素四元環(huán)張力大四元環(huán)張力大 酰胺鍵易水解酰胺鍵易水解 含水量含水量 純度純度 精選ppt青霉素類青霉素類 某些氧化劑某些氧化劑酸、堿、青霉素酶酸、堿、青霉素酶（某些金屬離子）（某些金屬離子） （溫度）（溫度）降解降解失效失效（四）（四）內(nèi)酰胺環(huán)內(nèi)酰胺環(huán) 精選pptNSCH

10、3CH3COOHONHRO1234567HHNSCH3CH3COOHONHRO1234567HOH青青 霉霉 素素 酶酶青青 霉霉 噻噻 唑唑 酸酸強強 酸酸 性性 環(huán)環(huán) 境境NSCH3CH3COOH1234HNRHOOCN酸酸 性性 加加 熱熱CH2CONHCH2CHOCCH3HSCH3CHCOOHH2N+弱弱 酸酸 性性青青 霉霉 醛醛青青 霉霉 胺胺ONORNHCH3CH3HSCOOH青青 霉霉 烯烯 酸酸NH2OH青青 霉霉 噻噻 唑唑 酸酸 酰酰 基基 羥羥 胺胺 酸酸HgCl2青青 霉霉 酸酸與含水量和純度密切相關與含水量和純度密切相關青霉素的降解途徑青霉素的降解途徑精選ppt青霉

11、素的降解產(chǎn)物青霉素的降解產(chǎn)物青霉噻唑酸青霉噻唑酸青霉素酶青霉素酶青霉酸青霉酸強酸性環(huán)境強酸性環(huán)境青霉烯酸青霉烯酸弱酸性環(huán)境弱酸性環(huán)境青霉醛青霉醛強酸性強酸性-加熱加熱青霉胺青霉胺強酸性強酸性-加熱加熱/青霉素酶青霉素酶-重金屬重金屬降解產(chǎn)物降解產(chǎn)物精選ppt二、鑒別反應二、鑒別反應（一）顯色反應（一）顯色反應1、異羥肟酸鐵反應、異羥肟酸鐵反應NONHRO567SCOOHCH2R181234NaOHHNONHRO567SCOONaCH2R11234NHOHFe3+HNONHRO567SCOONaCH2R11234FeNHO精選pptNH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH22. 茚三酮反應茚

12、三酮反應 -氨基氨基 -氨基氨基茚三酮茚三酮 藍紫色藍紫色精選ppt3. 雙縮脲反應雙縮脲反應 CONH（開環(huán)分解）（開環(huán)分解） - 內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類堿性酒石酸銅堿性酒石酸銅紫紫精選ppt精選ppt4. 與重氮苯磺酸反應與重氮苯磺酸反應橙黃色橙黃色重氮苯磺酸重氮苯磺酸 5 56 6OHHC（偶合）（偶合）酚羥基酚羥基頭孢哌酮頭孢哌酮精選ppt1. K+、Na+的火焰反應的火焰反應（二）各種鹽的反應（二）各種鹽的反應 焰色焰色鮮黃色鮮黃色 + 醋酸氧鈾鋅醋酸氧鈾鋅黃黃 Na+ 焰色焰色紫色紫色 + 0.1%四苯硼鈉四苯硼鈉 白白 K+精選ppt2. 沉淀反應（青霉素鹽）沉淀反應（青霉素鹽）遇酸遇

13、酸白白青霉素青霉素青霉素鈉青霉素鈉青霉素鉀青霉素鉀+ +H+精選ppt3. 重氮化重氮化 - - 偶合反應偶合反應 青霉素普魯卡因普魯卡因青霉素+H重氮化重氮化-偶合反應偶合反應紅紅 芳伯氨基芳伯氨基精選ppt光譜法光譜法（三）（三）1、 UV法法 樣品、分解產(chǎn)物樣品、分解產(chǎn)物nm339HA + +苯苯唑唑青青霉霉烯烯酸酸苯苯唑唑青青霉霉素素Cu2+AEcm,min,max,%11光譜圖頭孢氨芐頭孢氨芐 max = 262nm青霉素青霉素V鈉鈉 A280nm/A264nm = 1.301.50精選ppt精選ppt2、IR法法3180cm-1 N-H內(nèi)酰胺內(nèi)酰胺 C=O1780cm-13470c

14、m-1 O-H1690cm-1仲酰胺仲酰胺 C=O1250cm-1 C-O以阿莫西林為例以阿莫西林為例精選ppt色譜法色譜法（四）（四）1、 TLC法法對照品對照法對照品對照法和和斑斑點點顏顏色色比比較較供供試試品品對對照照品品相相同同條條件件fR2、 HPLC法法Rt比比較較供供試試品品對對照照品品相相同同條條件件精選ppt三、雜質檢查三、雜質檢查 藥物藥物 檢查項目檢查項目 檢查方法檢查方法 頭孢他啶頭孢他啶 聚合物聚合物 HPLCHPLC法法 頭孢曲松鈉頭孢曲松鈉 頭孢哌酮鈉頭孢哌酮鈉 頭孢噻肟鈉頭孢噻肟鈉 頭孢呋辛酯頭孢呋辛酯 有關物質和異構體有關物質和異構體 HPLCHPLC法法 頭

15、孢氨芐頭孢氨芐 有關物質有關物質 反相反相TLCTLC法法 青霉素鉀（鈉）青霉素鉀（鈉） 吸收度吸收度 紫外分光光度法紫外分光光度法 精選ppt 1.1.頭孢他啶頭孢他啶聚合物聚合物的測定的測定 分子排阻色譜法分子排阻色譜法 固定相：葡聚糖凝膠固定相：葡聚糖凝膠G-10G-10 流動相流動相A A：3.5%3.5%硫酸銨的硫酸銨的0.01mol/L0.01mol/L磷酸鹽緩沖液磷酸鹽緩沖液 流動相流動相B B：0.01%0.01%十二烷基硫酸鈉十二烷基硫酸鈉 對照品溶液：頭孢他啶對照品對照品溶液：頭孢他啶對照品 100100g/mlg/ml精選ppt 1 1）系統(tǒng)適用性試驗：理論塔板數(shù)和拖尾因

16、）系統(tǒng)適用性試驗：理論塔板數(shù)和拖尾因子用子用1mg/ml1mg/ml藍色葡聚糖藍色葡聚糖20002000、流動相、流動相A A測定；重測定；重復性用對照品溶液、流動相復性用對照品溶液、流動相B B測定。測定。 N N不低于不低于900900，拖尾因子，拖尾因子0.0.751.5.5，峰面積的，峰面積的RSDRSD應小于應小于5.0%5.0%2 2）測定方法）測定方法 進樣供試液，用流動相進樣供試液，用流動相A A；進樣對照液，用；進樣對照液，用流動相流動相B B。以外標法計算，含頭孢他啶聚合物以。以外標法計算，含頭孢他啶聚合物以頭孢他啶計不得超過頭孢他啶計不得超過0.3%0.3%。精選ppt

17、2. 2.頭孢呋辛酯中頭孢呋辛酯中有關物質和異構體有關物質和異構體的檢查的檢查 固定相：固定相：ODSODS 流動相：流動相：0.2mol/L0.2mol/L磷酸二氫銨磷酸二氫銨- -甲醇（甲醇（62:3862:38） 1 1）頭孢呋辛酯）頭孢呋辛酯2 2- -異構體的制備異構體的制備：頭孢呋辛酯對：頭孢呋辛酯對 照品照品+ +流動相流動相 頭孢呋辛酯頭孢呋辛酯2 2- -異構體。異構體。2 2）系統(tǒng)適用性試驗：）系統(tǒng)適用性試驗：各異構體之間的各異構體之間的R1.5R1.5，以，以 頭孢呋辛酯頭孢呋辛酯A A異構體計算異構體計算n1500n1500。2112RRttr異構體異構體A A異構體異

18、構體B B頭孢呋辛頭孢呋辛精選ppt3.3.頭孢氨芐中頭孢氨芐中有關物質有關物質的檢查的檢查- -反相反相TLCTLC法法 固定相：活化后的硅膠固定相：活化后的硅膠G G板置板置5%5%（V/VV/V）正十四）正十四 烷的正己烷溶液中，展至頂部，涼干烷的正己烷溶液中，展至頂部，涼干 展開劑：展開劑：0.1mol/L0.1mol/L枸櫞酸枸櫞酸-0.2mol/L-0.2mol/L磷酸氫二磷酸氫二 鈉鈉- -丙酮（丙酮（120120：8080：3 3） 供試液：本品供試液：本品 50mg/ml 50mg/ml 對照液（對照液（1 1）：本品）：本品 0.5 mg/ml0.5 mg/ml 對照液（對

19、照液（2 2）：）：-苯甘氨酸苯甘氨酸 0.5 mg/ml0.5 mg/ml 對照液（對照液（3 3）：）：7-7-氨基去乙酰氧基頭孢烷酸氨基去乙酰氧基頭孢烷酸 0.5 mg/ml0.5 mg/ml精選ppt結果判斷結果判斷：供試液如顯雜質斑點，與對：供試液如顯雜質斑點，與對照液（照液（2 2）（）（3 3）位置相同上所的斑點比）位置相同上所的斑點比較，其顏色不得更深；如顯其他雜質斑較，其顏色不得更深；如顯其他雜質斑 點，與對照液（點，與對照液（1 1）所顯的主斑點比較，）所顯的主斑點比較，其顏色不得更深。其顏色不得更深。精選ppt4.4.青霉素鈉（鉀）的青霉素鈉（鉀）的吸收度吸收度檢查：檢查

20、： 供試液供試液 1.80mg/ml1.80mg/ml， 結果判斷：結果判斷：A A280280不得大于不得大于0.100.10精選ppt（一）高效液相色譜法（一）高效液相色譜法原理：利用青霉素類抗生素在一定條件下在反相原理：利用青霉素類抗生素在一定條件下在反相硅膠上的保留行為的不同而實現(xiàn)高效分離，并與硅膠上的保留行為的不同而實現(xiàn)高效分離，并與標準品相對照，而對其進行定量的一種方法。標準品相對照，而對其進行定量的一種方法。優(yōu)化色譜分析條件優(yōu)化色譜分析條件（1 1）Column Column -CN ODS C-CN ODS C1818 C C8 8 -Ben -Ben（2 2）mobile p

21、hase/flow ratemobile phase/flow rate（3 3）column temperature column temperature （4 4）detection wavelengthdetection wavelength（5 5）workstation sample preparationworkstation sample preparation四、含量測定四、含量測定-容量法和儀器分析法容量法和儀器分析法精選ppt實驗注意事項實驗注意事項（1 1）色譜峰要達到較好的分離基線分離）色譜峰要達到較好的分離基線分離(base separation)(base sepa

22、ration)（2 2）需要標準品對照，用外標法定量）需要標準品對照，用外標法定量（3 3）可同時測定多個組分的含量）可同時測定多個組分的含量（4 4）需要排除制劑中輔料等雜質對測定的干擾）需要排除制劑中輔料等雜質對測定的干擾精選ppt（二）生物樣本中（二）生物樣本中- -內(nèi)酰胺類抗生素的分析內(nèi)酰胺類抗生素的分析血漿血漿尿樣尿樣唾液唾液膽汁膽汁生物樣生物樣本本色譜柱色譜柱：Hypersil ODS C18 (200 mm4.6 mm, I.D. 5m)樣品制備樣品制備：取血漿取血漿200L，加入內(nèi)標，加入內(nèi)標5L，再加入，再加入HCLO4，窩旋提取窩旋提取Internal standard I

23、S精選ppt精選ppt第三節(jié)第三節(jié) 氨基糖苷類抗生素氨基糖苷類抗生素精選ppt第三節(jié)第三節(jié) 氨基糖苷類抗生素氨基糖苷類抗生素苷苷苷苷元元糖糖縮縮合合 + +氨基糖苷氨基糖苷苷元苷元氨基糖氨基糖縮合縮合 + +鏈霉素鏈霉素 雙氫鏈霉素雙氫鏈霉素新霉素新霉素 卡那霉素卡那霉素慶大霉素慶大霉素 巴龍霉素巴龍霉素精選ppt鏈霉素鏈霉素鏈霉胍鏈霉胍 + 鏈霉糖鏈霉糖 + N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺 苷元苷元糖糖鏈霉雙糖胺鏈霉雙糖胺精選ppt鏈霉素：鏈霉素：鏈霉胍鏈霉胍鏈霉糖鏈霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺OOOOHOOHOHCH3CHOOHCH2OHOHOHHNCH3HNHNCCNHNH

24、2NHH2N精選ppt巴龍霉素巴龍霉素D-D-葡萄糖胺葡萄糖胺+ +脫氧鏈霉胺脫氧鏈霉胺+D-+D-核糖核糖+ +巴龍霉糖巴龍霉糖巴龍胺巴龍胺苷元苷元巴龍二糖胺巴龍二糖胺 糖糖 精選ppt慶大霉素慶大霉素 糖糖 苷元苷元絳紅糖胺絳紅糖胺 + 脫氧鏈霉胺脫氧鏈霉胺 + 加洛糖胺加洛糖胺 糖糖 精選pptROC R1R2HNNH2OOHH2NNH2OOOHNHCH3OHCH3絳紅糖胺絳紅糖胺紫素胺紫素胺2-脫氧鏈霉胺脫氧鏈霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺精選ppt慶大霉素慶大霉素C復合物復合物 慶大霉素慶大霉素C1 R=H R1、R2=CH3 慶大霉素慶大霉

25、素C2 R=R2=H R1=CH3 慶大霉素慶大霉素C1a R、R1、R2=H 慶大霉素慶大霉素C2a R=CH3 R1= R2=H 慶大霉素慶大霉素C2b R=R1=H R2=CH3精選ppt一、一、結構與性質結構與性質多與硫酸成鹽多與硫酸成鹽鏈霉素鏈霉素 3 3個個慶大霉素慶大霉素 5 5個個堿性中心堿性中心堿性堿性（一）（一）水溶性水溶性溶解性溶解性（二）（二）精選ppt鏈霉素鏈霉素 pH57.5慶大霉素慶大霉素 pH212 穩(wěn)定穩(wěn)定穩(wěn)定性穩(wěn)定性（四）（四）UV（三）（三）精選pptNH CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHCH3坂口反應

26、坂口反應N-甲基葡萄甲基葡萄糖胺反應糖胺反應麥芽酚反應麥芽酚反應精選ppt二、二、 鑒別鑒別 茚三酮反應茚三酮反應（一）（一）藍藍紫紫色色慶慶大大霉霉素素鏈鏈霉霉素素茚茚三三酮酮羥基胺結構羥基胺結構精選ppt （2）Molisch反應反應 具有五碳糖或六碳糖的氨基糖苷類抗生具有五碳糖或六碳糖的氨基糖苷類抗生素經(jīng)酸水解后，在鹽酸作用下脫水生成素經(jīng)酸水解后，在鹽酸作用下脫水生成糠醛糠醛或或羥甲基糠醛羥甲基糠醛，加入，加入 萘酚萘酚（紅紫色紅紫色）或）或蒽酮蒽酮（藍紫色藍紫色）精選pptOHOH2CCHOOHOH2CCHOHOHOH紅紫色紅紫色精選ppt （3）Elson-Morgan反應反應 水解

27、產(chǎn)生的水解產(chǎn)生的N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺在堿性溶在堿性溶液中與乙酰丙酮合成吡咯衍生物，再與對二液中與乙酰丙酮合成吡咯衍生物，再與對二甲氨基苯甲醛的酸性醇溶液反應，生成櫻桃甲氨基苯甲醛的酸性醇溶液反應，生成櫻桃紅色縮合物。紅色縮合物。OHOH2CCHOOOOH2COH2C藍紫色藍紫色精選ppt （4）麥芽酚反應）麥芽酚反應鏈霉素的特征反應鏈霉素的特征反應 鏈霉素水解得到的鏈霉糖經(jīng)分子重排使環(huán)鏈霉素水解得到的鏈霉糖經(jīng)分子重排使環(huán)擴大形成六元環(huán)，然后消除擴大形成六元環(huán)，然后消除N-甲基葡萄糖胺，甲基葡萄糖胺，再消除鏈霉胍，生成再消除鏈霉胍，生成-甲基甲基-羥基羥基-吡喃酮吡喃酮（麥芽酚），

28、（麥芽酚），該化合物與該化合物與Fe3+在弱酸性溶液中在弱酸性溶液中形成形成紅紫色紅紫色配位化合物。配位化合物。精選pptNH C NH2HOOHOHNHCH2NOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHNHNHCH3H2O NaOHOOOHCH3OOCH3Fe3+H+OFe33+/紫紅紫紅麥芽酚麥芽酚精選ppt（5）坂口反應）坂口反應鏈霉胍的特有反應鏈霉胍的特有反應 向鏈霉素的水解產(chǎn)物鏈霉胍與向鏈霉素的水解產(chǎn)物鏈霉胍與NaBrO2反應反應得產(chǎn)物得產(chǎn)物1；8-羥基喹啉羥基喹啉也和也和NaBrO2反應得產(chǎn)物反應得產(chǎn)物2。產(chǎn)物產(chǎn)物1和產(chǎn)物和產(chǎn)物2再相互作用生成再相互作用生成橙紅色橙紅色化合物。

29、化合物。精選ppt（八）色譜法（八）色譜法（1 1）TLCTLC法：硫酸慶大霉素的鑒別法：硫酸慶大霉素的鑒別 點樣：供試液：展開、涼干、碘蒸氣中顯色點樣：供試液：展開、涼干、碘蒸氣中顯色 對照液對照液 判斷：供試液與對照液所顯斑點的顏色與位判斷：供試液與對照液所顯斑點的顏色與位 置應一致。置應一致。 點樣：供試液點樣：供試液 對照液對照液：硫酸鏈霉素標準品：硫酸鏈霉素標準品 對照液對照液：硫酸鏈霉素標準品：硫酸鏈霉素標準品 + + 硫酸硫酸 新霉素標準品新霉素標準品+ + 硫酸卡那霉素標準品硫酸卡那霉素標準品精選ppt判定法：供試液中主斑點的位置、顏色、大小判定法：供試液中主斑點的位置、顏色、

30、大小 應與對照液應與對照液 相同，相同， 對照液對照液應顯示分離清晰的應顯示分離清晰的3 3個斑點個斑點 否則試驗無效。否則試驗無效。（2 2）HPLCHPLC法：硫酸慶大霉素的鑒別法：硫酸慶大霉素的鑒別 比較供試液與對照液各組分的保留比較供試液與對照液各組分的保留時間。時間。精選ppt 特殊雜質的檢查特殊雜質的檢查（1）鏈霉素中鏈霉素）鏈霉素中鏈霉素B的檢查的檢查TLC法法硅膠硅膠G板（板（使用前需活化使用前需活化）、展開劑）、展開劑 甲苯甲苯-冰乙冰乙酸酸-甲醇甲醇（50: 25: 25）、）、0.2二羥萘的乙醇二羥萘的乙醇20硫酸混合液硫酸混合液（2）慶大霉素中組分）慶大霉素中組分C的檢

31、查衍生化后的檢查衍生化后HPLC色譜柱、流動相、檢測波長、衍生化條件的摸索色譜柱、流動相、檢測波長、衍生化條件的摸索 組分組分C的毒副作用和耐藥性與慶大霉素有差異，的毒副作用和耐藥性與慶大霉素有差異，導致產(chǎn)品的效價和臨床療效導致產(chǎn)品的效價和臨床療效精選ppt+ + +4 41010.pH吲哚衍生物吲哚衍生物巰基醋酸巰基醋酸鄰苯二醛鄰苯二醛氨基氨基max = 330nm衍生化原理衍生化原理 1.1.1-烷基硫代烷基硫代-2-烷基烷基異吲哚衍生物異吲哚衍生物RNH2+HSCH2COOHOH-CHOCHONRSCH2COOH精選pptRPHPLC方法方法 2.規(guī)定規(guī)定 C1 2550% C1a 15

32、40% C2a +C2 2050%計算計算 3.%AAAAA%ACCCCiiaa1 10 00 0 + + + + 1 11 1峰面積歸一化法峰面積歸一化法精選ppt四、四、 含量測定含量測定微生物檢定法微生物檢定法 各國藥典主要采用各國藥典主要采用HPLC法法 常用于體內(nèi)藥分常用于體內(nèi)藥分 精選ppt第四部分：四環(huán)素類抗生素第四部分：四環(huán)素類抗生素RRRRHN(CH3)2OHCONH2OOHOOHOHABCD410Trtracyclines TC精選ppt 理化特性理化特性（1）酸堿兩性）酸堿兩性C4（二甲氨基二甲氨基）、）、C10（酚羥基酚羥基）（2）旋光性）旋光性含有手性中心含有手性中心

33、（一般為左旋）（一般為左旋）（3）紫外吸收特性具有）紫外吸收特性具有共軛雙鍵共軛雙鍵體系（吸收波長體系（吸收波長為長波方向）為長波方向）（4）與金屬離子的配位化合物反應）與金屬離子的配位化合物反應酚羥基和烯醇酚羥基和烯醇基基（5）不穩(wěn)定性對各種外界條件，包括氧化劑、酸、）不穩(wěn)定性對各種外界條件，包括氧化劑、酸、堿，易形成堿，易形成差向、脫水和異四環(huán)素差向、脫水和異四環(huán)素，顏色加深，顏色加深精選pptRRRRHN(CH3)2OHCONH2OOHOOHOHABCD410RRRRHN(CH3)2OHCONH2OOHOOHOHABCD410弱酸性環(huán)境弱酸性環(huán)境ETC差向四環(huán)素差向四環(huán)素精選pptRH3

34、CO HR HN (C H3)2O HC O N H2OO HOO HO HABCD410RR HN (C H3)2O HC O N H2OOO HO HO HABCD410C H366強酸性環(huán)境強酸性環(huán)境ATC脫水四環(huán)素脫水四環(huán)素精選pptRH3COHRHN(CH3)2OHCONH2OOHOOHOHABCD410RRHN(CH3)2OHCONH2OOHOOHOHABCD410CH366O堿性環(huán)境堿性環(huán)境EATC異四環(huán)素異四環(huán)素差向脫水四環(huán)素差向脫水四環(huán)素精選ppt二、二、 鑒別試驗鑒別試驗 濃濃H H2 2SOSO4 4反應反應（一）（一）黃色黃色朱紅色朱紅色綠綠藍藍深紫色深紫色鹽酸多西環(huán)素

35、鹽酸多西環(huán)素鹽酸土霉素鹽酸土霉素鹽酸金霉素鹽酸金霉素鹽酸四環(huán)素鹽酸四環(huán)素4 4 SOH鹽酸美他環(huán)素鹽酸美他環(huán)素橙紅色橙紅色精選pptFeCl3反應反應（二）（二）褐色褐色橙褐色橙褐色深褐色深褐色紅棕色紅棕色鹽酸多西環(huán)素鹽酸多西環(huán)素鹽酸土霉素鹽酸土霉素鹽酸金霉素鹽酸金霉素鹽酸四環(huán)素鹽酸四環(huán)素3 3FeCl精選pptTLCTLC法法（三）（三）鹽酸土霉素的鑒別鹽酸土霉素的鑒別 HPLCHPLC法法（五）（五）EDTAEDTA 克服痕量金屬造成的克服痕量金屬造成的 拖尾現(xiàn)象拖尾現(xiàn)象比較保留時間比較保留時間精選ppt三、三、 特殊雜質檢查特殊雜質檢查 4-4-差向四環(huán)素（差向四環(huán)素（ETCETC） 脫

36、水四環(huán)素脫水四環(huán)素（ATCATC） 差向脫水四環(huán)素差向脫水四環(huán)素（EATCEATC） 鹽酸金霉素鹽酸金霉素（CTCCTC） 有關物質有關物質（一）（一）HPLCHPLC法（法（20002000版）版）鹽酸四環(huán)素鹽酸四環(huán)素四環(huán)素有關物質四環(huán)素有關物質TLCTLC圖圖I. 供試液供試液( 5 mg/ml)ETC( 0.2 mg/ml) ATC( 0.025 mg/ml)IV. EATC ( 0.025 mg/ml)CTC ( 0.1 mg/ml)VI. 混合液混合液40.50.52吸收度吸收度（二）（二）nmmax3553556868 、鹽酸四環(huán)素鹽酸四環(huán)素精選ppt雜質吸收度雜質吸收度 取供試品

37、配成每取供試品配成每10mg/ml10mg/ml的溶液至的溶液至4cm4cm的吸收池中，在的吸收池中，在530nm530nm處測定，其吸處測定，其吸收度不得超過收度不得超過0.120.12。應嚴格控制溫度和時間應嚴格控制溫度和時間精選ppt四、四、 含量測定含量測定HPLCHPLC法法 鹽酸四環(huán)素的測定鹽酸四環(huán)素的測定 系統(tǒng)適用性試驗：鹽酸四環(huán)素、有關系統(tǒng)適用性試驗：鹽酸四環(huán)素、有關 物質及物質及ATCATC峰間的峰間的 分離度均應符合要分離度均應符合要 求。求。 定量方法：外標法以峰面積計定量方法：外標法以峰面積計。精選ppt第五節(jié) 抗生素類藥物中高分子 雜質的檢查1.1.高分子雜質高分子雜

38、質 分子量大于藥物本身的雜質總稱。分子量大于藥物本身的雜質總稱。精選ppt 蛋白、多肽、多糖或抗生素蛋白、多肽、多糖或抗生素與蛋白、多肽、多糖的結合物。主要來自與蛋白、多肽、多糖的結合物。主要來自于發(fā)酵工藝，致敏，如青霉噻唑蛋白、青于發(fā)酵工藝，致敏，如青霉噻唑蛋白、青霉噻唑多肽。霉噻唑多肽。 藥物的自身聚合物，來自于藥物的自身聚合物，來自于生產(chǎn)、貯存過程。可引發(fā)過敏。生產(chǎn)、貯存過程?？梢l(fā)過敏。外源性雜質外源性雜質內(nèi)源性雜質內(nèi)源性雜質精選ppt2 2、基本特點、基本特點對青霉素而言對青霉素而言青霉噻唑多肽青霉噻唑多肽外源性的（外源性的（24003500）青霉素聚合物青霉素聚合物內(nèi)源性的（聚合度）內(nèi)源性的（聚合度） 母核參與的聚合反應母核參與的聚合反應N N型聚合反應型聚合反應 側鏈參與的聚合反應側鏈參與的聚合反應L L型聚合反應型聚合反應分類分類精選ppt（1 1）生產(chǎn)過程中的任何蛋白或碎片都可帶入）生產(chǎn)過程中的任何蛋白或碎片都可帶入產(chǎn)品中，易與藥物形成多肽類雜質產(chǎn)品中，易與藥物形成多肽類雜質（2 2）形成的聚合物也可發(fā)生不同程度的降解）形成的聚合物也可發(fā)生不同程度的降解（3 3）異構體之間可以相互聚合）異構體之間可以相互聚合L-L、D-D、