飼料廠化驗室檢測手冊

1、飼料廠化驗室操作手冊飼料中的水分測定1 原理：試樣在105±2烘箱內(nèi)，在常壓下烘干，直至恒重，逸失的重量為總水分。2測定步驟：潔凈的稱樣皿，在 105c ±2C烘箱中烘1h,取出，在干燥器中冷卻 30min,稱準至0.0002g,再烘干30 min ,同樣冷卻，稱重，直至兩次的重 量之差小于0.0005g 為恒重。用已恒重的稱樣皿稱取2份平行試樣，每份2-5g （含水量0.1g以上， 樣品厚度4mm-下）。準確至0.0002g,不蓋稱樣皿蓋，在105c ±2C烘箱 中烘3h （以溫度達到105c開始計時），取出，蓋好稱樣皿蓋，在干燥器中 冷卻30min,稱重。在同

2、樣烘干1h , 冷卻，稱重，直至兩次稱重的重量差小于0.002g.烘干前的質(zhì)量烘干后的質(zhì)量水分= X100烘干前的質(zhì)量粗蛋白的測定1. 原理：凱氏定氮法測定試樣中的含氮量，即在催化劑的作用下用硫酸破壞有機物，使含氮物轉(zhuǎn)化成硫酸銨，加入強堿進行蒸餾，用硼酸吸收后，再用鹽酸滴定，測出含氮量，將結(jié)果乘以換算系數(shù)6.25，算出粗蛋白的含量。2. 測定步驟： . 消煮 ： 稱取樣品0.5g， 準確放入凱氏燒瓶中，加入 6.4g 催化劑， 15ml硫酸，將凱氏燒瓶置于電爐上加熱，開始小火，待樣品焦化，泡沫消失后，再加強火力( 360-410)， 直至呈透明的藍綠色，然后再繼續(xù)加熱，至少 2h. . 定容

3、：消煮后冷卻，加20ml 水至凱氏燒瓶中，搖勻，待消煮試樣完全冷卻后轉(zhuǎn)移至100ml 容量瓶中，用蒸餾水沖洗數(shù)次，并一起轉(zhuǎn)入到容量瓶中，至刻度，搖勻，做為試樣分解液。 . 蒸餾 : . 準備 ： 將蒸餾裝置準備妥當以后，先用蒸餾水洗滌，移取分解液10ml，氫氧化鈉(40% 10ml,加入少量水，塞好入口玻璃塞，且在入口處加水密封，防止露氣，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，在將裝有20ml 硼酸和 2 滴甲基紅指示劑的錐形瓶放在冷凝管的末端。 . 滴定 ：將蒸餾后的吸收液立即用鹽酸標準溶液滴定，溶液由藍綠色變成灰紅色為終點。(體積一空白)X濃度X 0.014X6.25粗蛋白= X 100試樣質(zhì)量0.01

4、4 -與1.00ml鹽酸標準溶液【c(Hcl)=1.000/ mol L-1相當?shù)囊钥吮硎镜牡馁|(zhì)量6.25 氮換算成蛋白質(zhì)的平均系數(shù)3. 試劑配制：1 .混合催化劑：4g硫酸銅+60g無水硫酸鈉2 .氫氧化鈉：40g氫氧化鈉+100ml水3. 硼酸： 1g 硼酸 +50ml 水4. 混合指示劑：甲基紅0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠0.5%乙醇溶液，兩溶液等體積混合，在陰涼處保存 3個月5. 鹽酸標準溶液配制：鹽酸（ml）c(Hcl)/ mol L-11900.5450.194 .鹽酸標定方法：取在270300C溫度下干燥至恒重的基準無水碳酸鈉約 0.015g ,精 密稱重，加水50ml使溶解，加

5、甲基紅澳甲酚綠混合指示劑 2滴，用鹽酸 滴定至溶液由綠色轉(zhuǎn)變?yōu)榛壹t色，在煮沸2分鐘，冷卻至室溫，繼續(xù)滴定至溶液變?yōu)榛壹t色。空白測定：稱蔗糖0.5g，代替試樣，進行空白滴定，消耗 0.1 mol L-1鹽酸標準溶 液的體積不得超過0.2ml,消耗0.02 mol L-1鹽酸標準溶 體積不得超過0.3ml.無水硫酸鈉的質(zhì)量濃度=（ 體積-空白）X 0.052995 .蒸儲步驟檢測：精確稱取硫酸鏤0.2g ,代替試樣進行消化蒸儲，測得硫酸鏤含量21.19% 士 0.2%,可知消煮過程和試劑配制是否正常。飼料中純蛋白測定1. 原理：硫酸銅在堿性溶液中，可將蛋白質(zhì)沉淀，且不溶于熱水，過濾和洗滌后， 可將

6、純蛋白質(zhì)含氮物分離，再用凱氏定氮法測定沉淀中的蛋白質(zhì)含量。2. 試劑：（ 1）硫酸銅溶液：10g 硫酸銅溶于100ml 水中。（2）氫氧化鈉溶液：將2.5g氫氧化鈉溶于100ml水中。（ 3）氯化鋇溶液：1g 氯化鋇溶于100ml 水中。（4） 2 mol L-1鹽酸溶液。3. 測定步驟：準確稱取1g 左右試樣，置于200ml 燒杯中，加50ml 水，加熱至沸，加入 20ml 硫酸銅溶液，20ml 氫氧化鈉溶液，用玻璃棒充分攪拌，放置1h以上，用傾斜過濾（定性濾紙），然后用60-80熱水洗衣滌沉淀5-6 次，用氯化鋇溶液5 滴和鹽酸溶液1 滴檢查濾液，直至不生成白色硫酸鋇沉淀為止。將沉淀和濾紙

7、放在65c烘箱干燥2h,然后全部轉(zhuǎn)移到凱氏燒瓶中。消化后進行定氮測定。4. 結(jié)果計算同粗蛋白測定一樣。快速測鹽分（飼料級）1. 鹽分含量測定原理：溶液澄清，在酸性條件下，加入過量硝酸銀溶液使樣品溶液中的氯化物形成氯化銀沉淀，除去沉淀后，用硫氰酸銨回滴過量硝酸銀，根據(jù)消耗硫酸氰銨的量，計算出氯化物的含量。2. 試劑配制：Angs稱取硝酸銀3.4g,用少量水溶解，定容至1L,儲于棕色瓶中3. 標定：稱取在550c下恒溫1h的基準氯化鈉0.02g，加50ml水，力口 5%§酸鉀指示劑1ml,用待標定的硝酸銀標準溶液滴定至石專紅色為終點。20X 0.02C = 體積4. 測定步驟：稱取樣品2

8、g 左右， 加 200ml 蒸餾水攪拌，靜止20min， 吸取上清液20ml放入錐形瓶，加50ml蒸儲水，加1ml銘酸鉀（10%,用Angs滴定成桔紅 色。濃度X體積X 200X0.05845CL = X100樣品質(zhì)量X 20測食鹽中CL的含量稱 0.02g 樣品，放入錐形瓶中，加50ml 蒸餾水，加1ml 鉻酸鉀（10%） ，用Angs滴定成桔紅色。濃度x體積x 0.05845CL =乂 100樣品質(zhì)量粗灰分、鈣、磷連續(xù)測定（飼料級）1. 原理：試樣在550灼燒后所得殘渣，用質(zhì)量百分率表示。殘渣只要是氧化物、鹽類等礦物質(zhì)，也包括混入飼料中的沙石、土等，故稱粗灰分。2. 步驟：將干凈的塔埸方入

9、高溫爐，在 550±20C下灼燒30min。取出，在空氣 中冷卻約1min,放入干燥器冷卻30min,稱其重量，在已恒重的土甘垠j中 稱取2-5g試料，準確至0.0002g。在電爐上小心碳化至無煙，在放入高 溫爐，于550士 20c下灼燒3h。取出，在空氣中冷卻約1min,放入干燥 器中冷卻30min,稱取重量。灰化后的質(zhì)量粗灰分=x 100%灰化前的質(zhì)量鈣：在盛有灰分的坩堝中加入10ml（ 1： 3）鹽酸, 加 3 滴硝酸，小心煮沸，隨即濾入100ml 的容量瓶中，用蒸餾水洗滌坩堝和漏斗上的濾紙，定容至100ml,搖勻，取10ml分解液放入錐形瓶，加入 50ml水，1%煮沸冷卻后的

10、 淀粉溶液10ml,乙二胺1ml,三乙醇胺2 ml ,孔雀石綠1滴，20海氧化鈉 10 ml,鹽酸羥胺少許，鈣指示劑少許，然后用 EDTA商定至藍色。EDTA體積X濃度Ca=x100樣品質(zhì)量 試劑配制 ：鹽酸：1： 31ml 鹽酸溶于3ml 蒸餾水中氫氧化鈉：20% 20g的氫氧化鈉溶于100ml的蒸儲水中三乙醇胺：1 ： 1 1ml 三乙醇胺溶于1ml 蒸餾水中乙二胺：1 ： 1 1ml 乙二胺溶于1ml 蒸餾水中孔雀石綠：0.001g 孔雀石綠溶于1ml 蒸餾水中，既0.1g 孔雀石綠溶于100g蒸儲水中鈣黃指示劑：0.1g 鈣黃綠素，0.13g 甲基百里香酚藍，5g 氯化鉀研細混勻，儲于

11、磨砂口瓶中備用。（鈣紅指示劑：1g鈣一羥酸指示劑與99g氯化鈉）EDTA 0.02 mol L-1稱取8g乙二胺四乙酸二鈉，放入燒杯中，力口 200ml蒸餾水，加熱溶解，冷卻后轉(zhuǎn)入1000ml 容量瓶中，用蒸餾水稀稀釋至刻度。標定：鈣標準溶液0.001g mol - L-1準確稱取在105110C下烘干3h,干燥至恒重的基準碳酸鈣 2.497g,溶于 40ml（ 1： 3）鹽酸中（沿燒杯壁慢慢加入），加熱除去Co2, 冷卻，轉(zhuǎn)移到1000ml 容量瓶中，稀釋到刻度，標定方法同測定方法同樣。0.01 X20 （分解液吸取值）EDTA濃度=EDTA的體積磷：取上述分解液1ml,放入50ml的容量瓶

12、中，加10ml鈕鋁酸鏤顯色劑， 定容至50ml,搖勻，放至20分鐘。用10毫米比色池，在420nm波長下， 用分光光度計測定試樣分解液的吸光度波長所對應(yīng)得含磷量磷含量 = 質(zhì)量X 100 X分解液移取量試劑配制：釩鉬酸銨顯色劑：稱取偏釩酸銨1.25g， 先加入量水，使其差不多溶解，加硝酸250ml,另取鋁酸鏤25g加蒸儲水400ml溶解，冷卻后將此溶液倒入上述溶液中，加水定容至1000ml。避光保存，入生成沉淀則不能使用。磷標準溶液：將磷酸二氫鉀在105烘箱中干燥1 小時，在干燥器中冷卻后稱取0.2195g,定量轉(zhuǎn)入1000ml容量瓶中，加硝酸3ml,用水稀釋至刻度，搖勻，即50 微克/ 毫升

13、的磷標準溶液。標準曲線繪制：準確吸取0ml.1ml.2ml.5ml.10ml.15ml 于 50ml 容量瓶中，各加入釩鋁酸鏤顯色劑10ml,用蒸儲水稀釋至刻度，搖勻，靜止 10分鐘以上，以0 溶液為參比，用10毫米比色池，在420nm波長下，用分光光度計測定各溶 液的吸光度。以磷含量為橫坐標，以吸光度為縱坐標，繪制標準曲線圖。飼料中粗脂肪的測定1. 原理： 用裝有乙醚的索氏脂肪提取器，提取試樣中的脂肪，稱脂肪包的重量，提取的脂肪中除脂肪外還有有機酸，磷脂，脂溶性維生素，葉綠素等，因而測定結(jié)果稱為粗脂肪或乙醚提取物。2. 測定步驟：稱試樣 1 5g（ 準確至0.0002g） ， 于濾紙筒中，或

14、用濾紙包好，放入105烘箱中， 烘干120min， 濾紙筒應(yīng)高于提取器虹吸管的高度，濾紙包長度應(yīng)以可全部浸泡于乙醚中為準，將濾紙筒或包放入抽提管，在抽提瓶中加無水乙醍60-100ml,在60-75 C的水浴上加熱，使乙醍回流，控制乙醍回流次數(shù)約每小時 10 次，共回流約50 次（油脂高的約70 次）或檢查抽提管流出的乙醚揮發(fā)后不留下油跡為抽提終點。 （約 3 個小時）取出試樣，仍用原提取器回收乙醚，直至抽提瓶全部回收完，取下抽提瓶，將回收的乙醚倒入乙醚瓶中保存。取出濾紙包，仍放回原稱樣皿，開蓋在105±2烘箱中烘干2h， （剛放烘箱時將烘箱門打開，使濾紙包中的乙醚揮發(fā)完以后在合上門，

15、否者會有危險），取出，放入干燥器中冷卻，稱重，在烘干 30min,冷卻稱重，直至兩次誤差小于0.001g 為止。烘干后試樣的重量提取脂肪后試樣的重量粗月旨肪=乂 100烘干前試樣的重量大豆脲酶活性的測定（滴定法）1. 選用范圍：本法適用于大豆制品品及其副產(chǎn)品中脲酶活性的測定，可確認大豆的溫熱處理程度和抗胰蛋白酶等抗營養(yǎng)因子的水平。2. 定義：尿素酶活性指：在30士 0.5 C和pH7的條件下，每分鐘每克大豆制品分 解尿素所釋放的氨態(tài)氮的毫克數(shù)。3. 原理：將粉碎的大豆制品與中性尿素緩沖溶液混合，在 30c保持30min,尿酶 催化尿素水解產(chǎn)生氨的反應(yīng)。用過里鹽酸中和產(chǎn)生的氨，再用氫氧化鈉標準

16、溶液回滴。4. 試劑 ： 尿素緩沖溶液：準確稱取3.4g 經(jīng) 110烘干的磷酸二氫鉀和4.45g磷酸氫二鈉，用蒸儲水溶解后定容至1000ml,再將30g尿素溶解在此緩沖液中，可保持一個月。 0.1 mol L-1鹽酸溶液：用量筒量取 8.4ml濃鹽酸（GB 622）,注入 1000ml 容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度。 0.1mol L-1氫氧化鈉（GB629）標準溶液：按GB601的規(guī)定配制。 （5ml NaOH飽和溶液定容至1L）5. 測定步驟：準確稱取已粉碎的試樣約0.2g （精確至0.0001g）,置于刻管中（如活性很高，只稱0.05g） 。加入 10ml 尿素緩沖溶液，立即蓋好試管并劇

17、烈搖動，馬上置于（30士 0.5 C）恒溫水浴中，準確計時保持 30min。取下后立 即加入10ml 0.1mol L-1鹽酸溶液，并迅速冷卻至20C,將試管中內(nèi)容物 無損地移入50ml燒杯中，用5ml蒸儲水沖洗試管2次，立即用0.1mol，L-i 的氫氧化鈉標準溶液滴定至pH 4.7, 記錄氫氧化鈉標準溶液的消耗量。同時做空白試驗。尿素苯酚磺試劑法（脲酶活性）1. 原理：在尿素苯酚磺指示劑存在的條件下，以尿素轉(zhuǎn)變成氨的多少及顯色度檢測大豆餅中的脲酶的活性。2. 試劑與溶液：（1） 0.2mol L-1氫氧化鈉溶液：量取澄清的飽和氫氧化鈉溶液11.2ml,置于 1000ml 容量瓶中，用新沸過

18、的冷水稀釋至刻度，混勻即可。0.1 mol L-1硫酸溶液：量取5.6ml濃硫酸，注入已加了少量蒸儲水的1000ml 容量瓶中，冷卻稀釋至刻度。 尿素一苯酚磺指示劑：取1.2g苯酚紅溶于30ml 0.2 mol L-1氫氧化鈉 溶液中，用蒸儲水稀釋至300ml，加入90g尿素，溶解后再用水稀釋至2000ml, 加70ml 0.1 mol L-1硫酸溶液，稀釋至3000ml。配好的溶液應(yīng)呈琥珀色， 若溶液轉(zhuǎn)變呈桔紅色時，用再適量滴加 0.1 mol L-1硫酸溶液，調(diào)成琥珀色。 試劑最好現(xiàn)配現(xiàn)用。3. 測定步驟：取粉碎的大豆粕少許，在表面皿上均勻的鋪成薄層，用吸管吸取尿素苯酚磺指示劑，浸濕表面皿

19、上平鋪的大豆粕，放置 5min,觀察顯色結(jié)果。4. 結(jié)果判定：無任何紅點出現(xiàn)時，再放置 25min,若仍無紅點出現(xiàn)時，說明被檢大豆 粕沒有脲酶活性，是過熟的大豆粕。有少數(shù)紅點，或表面有 25%-50%：點出現(xiàn)，表示含有微量月尿酶，大豆粕 可以使用。若大豆粕表面75%-100%被紅點覆蓋，說明脲酶活性很強，粕過生， 不能直接使用。揮發(fā)性鹽基氮（VBN ）測定方法1、原理：利用弱堿性試劑氧化鎂使試樣中堿性含氮物質(zhì)游離而被蒸餾出來，用硼酸吸收，再用標準酸滴定，計算出含氮量。2、 試劑：1 、 0.lmol L 鹽酸標準溶液（無水碳酸鈉標定）：吸取分析純鹽酸8.3mL，用蒸餾水定容至1000mL。2、

20、 0.01mol/L 鹽酸標準溶液：用0.1mol/L 鹽酸標準溶液稀釋獲得。3、2%月酸溶液：分析純硼酸2g溶于100mLzk配成2%§液。4、混合指示劑：甲基紅0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠0.5%乙醇溶液，兩溶液等體積混合，陰涼處保存期三個月以內(nèi)。5、1%R化鎂溶液：化學純氧化鎂1.0g溶于100mLB儲水振接成混懸液。3、測定：1、稱取15g試樣（精確到0.001g）于250mL具塞錐形瓶中，加蒸儲水100mL振蕩搖勻30min后靜置，上清液為樣液。2、取20mL2糖硼酸溶液于150mL錐形瓶中，加混合指示劑2滴，使半微量蒸餾裝置的冷凝管末端浸入此溶液。3 、蒸餾裝置的蒸汽發(fā)生器

21、的水中應(yīng)加甲基紅指示劑數(shù)滴，硫酸數(shù)滴，且保持此溶液為橙紅色，否則補加硫酸。4、準確移取10mL樣液注入蒸儲裝置的反應(yīng)室中，再加入 10mL 1%勺氧 化鎂溶液，用少量蒸餾水沖洗進樣入口，將玻璃塞塞好，且在入口處加水封好， 防止漏氣，蒸餾10min， 使冷凝管末端離開吸收液面，再蒸餾1min，用蒸餾水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液。5 、吸收氨后的吸收液立即用0.01mol/L 鹽酸標準液滴定，溶液由藍綠色變?yōu)榛壹t色為終點，同時進行試劑空白測定。4、測定結(jié)果計算：（鹽酸體積空白）X濃度X 14揮發(fā)性鹽基氮的含量=X 100（質(zhì)量X分解液體液）+分解液總體積2、重復(fù)性：每個試樣取兩個平行樣進行測定

22、，以其算術(shù)平均值為結(jié)果。允許相對偏差為 5%油脂酸價測定取干燥的錐形瓶（帶手套?。?。稱重記錄，加入測樣2-3g,稱重記錄，取 燒杯加入50ml醇醍，5滴酚醐指示劑，Naoh滴定空白體積變成粉紫色，把 滴定的醇醚倒入盛有測樣的錐形瓶中，搖勻， 再滴 5 滴酚酞指示劑，用 Naoh滴定成粉紅色，半分鐘之內(nèi)不變色。計算公式：濃度X （體積一空白）X 56.11 酸價 = 樣品質(zhì)量試劑配制：Naoh標準溶液0.05mol/L配制方法1： 取 2g 氫氧化鈉放入1000ml 容量瓶中，用新沸過的冷水定容至1000ml,搖勻。方法2:取飽和溶液2.8ml,用新沸過的冷水定容至1000ml標定：取在105-

23、110 C干燥至恒重的基準鄰苯二甲酸氫鉀約 0.2g,精密稱重， 加新沸過的冷水50ml,搖勻，使其溶解，加酚醐指示劑2滴，用本液滴定至 粉紅色。鄰苯二甲酸氫鉀質(zhì)量濃度 = Naoh 體積 X 0.2042中性醇醚：2： 1（ 2ml 乙醇 +1ml 乙醚）1嫩醐乙醇指示劑：1g酚醐+100ml乙醇油脂TBA值的測定方法1. 原理：油脂受到光、熱、空氣中氧等的作用，發(fā)生酸敗。分解出醛、酮之類的化合物。丙二醛就是分解產(chǎn)物的一種，它能與 TBA（硫代巴比妥酸）作用生 成粉紅色化合物，在532nm波長處有吸收高峰，利用此性質(zhì)即能測出丙二醛 含量，從而推導(dǎo)出油脂酸敗的程度。2. 操作步驟：1、標準曲線

24、的繪制準確吸取上述標準溶液0.0、 0.1 、 0.2、 0.3、 0.4、 0.5 、 0.6ml 置于納氏比色管中，加水至總體積為5ml,加入5ml TBA溶液，然后按樣品測定步 驟進行，測得吸光度并繪制標準曲線。2、樣品制備與檢測準確稱取均勻的豆油15g,置于100ml具塞三角瓶內(nèi)，準確加入 25ml 三氯乙酸混合液，振搖半小時（保持油脂融溶狀態(tài)），用四層濾紙過濾，除去油脂。準確移取上述濾液10ml置于25ml比色管內(nèi)，準確加入TBA溶?ft 10ml, 混勻，加塞，置于90c水浴內(nèi)保溫40min,取出，冷卻1h,移入小試管內(nèi)， 離心5min,上清液傾入25ml納氏比色管中，加入5ml氯

25、仿，搖勻，靜置， 分層，吸出上清液于532nm波長處，用1-5cm比色皿比色（同時作空白試驗）。 3. 試劑配制：1、0.02mol/L TBATk溶液：稱取TBA0.288g加熱溶于水中，并稀釋至100ml;2、三氯乙酸混合液：稱取三氯乙酸7.5g及0.1gEDTA用水溶解，稀釋至100ml；3、氯仿（分析純）；4、丙二醛標準溶液：稱取0.315g 1， 1， 3， 3-四乙氧基丙烷，溶解后稀釋至1000ml,此溶液每ml相當于丙二醛100 wg,置于冰箱內(nèi)保存。準確吸取10ml,稀釋至100ml,此溶液每ml相當于丙二醛10 wg,備用。丙二醛濃度X混合液體積X （濾液體積+ TBA水溶液

26、體積）丙二醛 = 油脂質(zhì)量x TBA水溶液體積油脂過氧化值測定方法1. 原理 :油脂氧化過程中產(chǎn)生過氧化物，與碘化鉀作用，生成游離碘，以硫代硫酸鈉溶液滴定，計算過氧化值。2. 試劑和溶液:1 、飽和碘化鉀溶液：稱取14g 碘化鉀，加10ml 水溶解，必要時微熱使其溶解，冷卻后貯于棕色瓶中；2 、三氯甲烷-冰乙酸混合液：量取 40ml三氯甲烷，力口 60ml冰乙酸，混勻；3 、 1%淀粉試劑：將淀粉0.5g 用少許冷水調(diào)成糊狀，倒入50ml 沸水中調(diào)勻，煮沸，臨時用現(xiàn)配；4、0.01mol/L硫代硫酸鈉標準溶液；（26g硫代硫酸鈉/16無水硫代硫酸鈉溶于 1000ml 水中）0.1 mol L-1配制：稱取2.6g硫代硫酸鈉/1.6無水硫代硫酸鈉于1000ml容量瓶中，用適量新沸（煮沸10分鐘）過的水溶解并稀釋至1000ml,搖勻，放置2周 以后備用。硫代硫酸鈉標定方法：取適量基準重鉻酸鉀在120烘箱中烘至恒重（3h） ，然后稱取0.15g，精確至0.0001g,置于碘量瓶中，溶于25ml煮沸并冷卻的蒸儲水中，加 2g碘化鉀及20麻酸7容液20ml,搖