無菌檢查用培養(yǎng)基適用性驗證報告

1、無菌檢查用培養(yǎng)基適用性驗證報告審核批準表O方案經(jīng)下列部門審核和批準后生效項目職責姓名簽字日期起草質(zhì)保部質(zhì)保部審核質(zhì)保部長批準質(zhì)量副總1. 驗證目的：為證明硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯、改良馬丁培養(yǎng)基適合于細菌, 真菌的無菌檢查，總結(jié)本驗證報告。2. 參照標準：中國藥典2010版二部附錄XI H無菌檢查法。3. 驗證項目：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯、改良馬丁培養(yǎng)基適用性檢查。4. 驗證小組姓名部門職責質(zhì)保部負責對驗證進行總結(jié)和評價批準方案及報告質(zhì)保部負責制定確認方案及報告的編制質(zhì)保部負責確認過程的相關檢測，確保檢驗結(jié)論正確可靠質(zhì)保部負責確認過程的相關檢測，確保檢驗結(jié)論正確可靠4.試驗材料：

2、4.1.品名:規(guī)格:被驗證培養(yǎng)基：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基批號：生產(chǎn)廠家:品名:營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基規(guī)格:批號：生產(chǎn)廠家:品名:改良馬丁培養(yǎng)基規(guī)格:批號：生產(chǎn)廠家:4.2.儀器設備：4.2.1.壓力蒸汽火菌器： 型號：編號：4.2.2.雙人凈化工作臺：型號：編號：4.2.3.電熱鼓風干燥箱： 型號：編號：4.2.4.生化培養(yǎng)箱（2328C）:型號：編號：4.2.5.恒溫培養(yǎng)箱（3035C）型號：編號：4.3.稀釋劑:0.9%無菌氯化鈉溶液4.4.驗證用培養(yǎng)基：名稱生產(chǎn)廠家批號營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基4.5.驗證用菌株:驗證菌株代次鋰傘甘 培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時間(小時)金黃色葡萄球菌CMCQB)

3、26 00330 35 C18 24銅綠假單胞菌CMCC(B) 10 10430 35 C18 24枯草芽抱桿菌CMCC(B) 63 50130 35 C18 24生抱梭菌CMCC(B)6494130 35 C18 24白色念珠菌CMC(F) 98 00123 28 C24 48黑曲霉菌CMCC(F)9800323 28 C57天5. 菌液制備：5.1. 取經(jīng)培養(yǎng)1824小時的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌的營養(yǎng)肉 湯新鮮培養(yǎng)物1ml加入到9ml 0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋至小于100cfu / ml的 菌懸液備用。5.2. 取經(jīng)培養(yǎng)2448小時的白色念珠菌的改良馬丁培養(yǎng)

4、物 1ml加入到9ml 0.9%無菌氯 化鈉溶液中，10倍稀釋至小于100cfu / ml的菌懸液備用。6. 菌液計數(shù)：(每種菌液接種2個平皿)分別取上述制備的金黃色葡萄糖球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌各1ml加入培養(yǎng)皿， 每種菌液平行做2皿，注入不超過45°C營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基1520ml，置3035°C培養(yǎng)箱 培養(yǎng)二天，取上項制備的白色念珠菌菌液 1ml加入培養(yǎng)皿，平行做2皿，注入不超過 45C的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基約1520ml，置2328C培養(yǎng)箱培養(yǎng)三天。7. 無菌培養(yǎng)基的無菌性檢查7.1培 養(yǎng)基 的配制硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的配制：取硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基29.25g，加

5、1L蒸餾水，加熱煮沸使其完全溶解，搖勻分裝到試管中，每只試管裝量12ml，121C滅菌15mi n。營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基的配制：取營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基18g,加1L蒸餾水，加熱攪拌使其完全溶解，搖勻分裝到試管中，每只試管裝量12ml, 121 °C滅菌15mi n。改良馬丁培養(yǎng)基的配制：取改良馬丁培養(yǎng)基28.5g，加1L蒸餾水，加熱攪拌使其完全溶解，搖勻分裝到到試管中，每只試管裝量9ml，121C滅菌15mi n。7.2培養(yǎng)基的培養(yǎng)硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基 5支，置于3035C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)14天; 改良馬丁培養(yǎng)基5支，置于2328C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)14天C，逐日觀察情況。表1培 養(yǎng)基

6、 的無菌性檢查表培養(yǎng)基名稱管數(shù)培養(yǎng)時間（天）備注1234567891011121314硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基12345營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基12345改良馬丁培養(yǎng)基12345結(jié)論注：“+”為生長，“-”為不生長7.培養(yǎng)基靈敏度檢查7.1.硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基等靈敏度檢查至少應進行3次獨立的平行試驗。7.2培 養(yǎng)基 的配制硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的配制：取硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基29.25g，加1L蒸餾水，加熱煮沸使其完全溶解，搖勻分裝到試管中，每只試管裝量12ml, 121 °C滅菌15mi n。營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基的配制：取硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基18g，加1L蒸餾水，加熱攪拌使其完全溶解，搖勻分裝到試管中，

7、每只試管裝量12ml, 121C滅菌15mi n。改良馬丁培養(yǎng)基的配制：取改良馬丁培養(yǎng)基 28.5g，加1L蒸餾水，加熱攪拌使其完全 溶解，搖勻分裝到到試管中，每只試管裝量 9ml，121C滅菌15mi n。73培養(yǎng)基接種取每管裝量為12ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基9支，分別接種小于100cfu/ml的金黃色 葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽抱桿菌、生抱梭菌各 2支，另1支不接種作為空白對 照，培養(yǎng)3天；取每管裝量為9ml的改良馬丁培養(yǎng)基5支，分別接種小于100cfu/ml的 白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接種作為空白對照，培養(yǎng)5天。逐日觀察結(jié)果。7.4.結(jié)果判斷空白對照管應無菌生長，若加菌的

8、培養(yǎng)基管生長良好，判該培養(yǎng)基的靈敏度檢查符合規(guī)表2培養(yǎng)基靈敏度檢查表菌種類型培養(yǎng)基裝量（ml）培養(yǎng)基管數(shù)（支）硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（天）備注123金黃色葡萄球菌121121枯草芽抱桿菌121121銅綠假單胞菌121121生抱梭菌121121空白對照121菌種類型培養(yǎng)基裝量（ml）培養(yǎng)基管數(shù)（支）營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（天）備注123金黃色匍萄球菌121121枯草芽抱桿菌121121銅綠假單胞菌121121生孢梭菌121121空白對照121菌種類型培養(yǎng)基裝量（ml）培養(yǎng)基管數(shù)（支）改良馬丁培養(yǎng)基（天）備注12345白色念珠菌9191黑曲霉9191空白對照91結(jié)論注：“ + ”為生長，“-”為不生長8驗證

9、周期：同種培養(yǎng)基的不同批號，不同生產(chǎn)廠家均應進行適用性驗證。9結(jié)論：無菌檢查用培養(yǎng)基適用性驗證報告書驗證項目無菌檢查用培養(yǎng)基適用性驗證驗證目的無困檢查用培養(yǎng)基適合于細困，真困的培養(yǎng)2014年 月日至2014年 月 日，驗證小組根據(jù)批準的“驗證方案”對無菌檢查用培養(yǎng)基進行無菌檢查和靈敏度驗證，驗證方案在實施過程中未做修改；根據(jù)中 華人民共和國藥典2010年版（二部）附錄無菌檢查法培養(yǎng)基的適用性檢查，結(jié)果。驗證人員會簽：部門職責人員會簽質(zhì)保部負責對驗證進行總結(jié)和評價批準方案及報告質(zhì)保部負責制定確認方案及報告的編制質(zhì)保部負責確認過程的相關檢測，確保檢驗結(jié)論正確可靠質(zhì)保部負責確認過程的相關檢測，確保檢

10、驗結(jié)論正確可靠批準人：批準日期：無菌培養(yǎng)基的適用性檢查記錄培養(yǎng)基：1.硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基批號：檢驗日期2.宮養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基批號：檢驗日期3.改良馬丁培養(yǎng)基批號：檢驗日期一、培養(yǎng)基的無菌性檢查培養(yǎng)溫度:硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基C改良馬丁培養(yǎng)基C培養(yǎng)基名稱管數(shù)培養(yǎng)時間(天)備注1234567891011121314硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基12345宮養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基12345改良馬丁123培養(yǎng)基45結(jié)論注：“ + ”為生長，“-”為不生長二、培養(yǎng)基的靈敏度檢查1.菌液制備：(1)金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003第代0.9%無菌NaCI溶液至含菌量CFU/ml(2)枯草芽抱桿菌CMCC(B)63501第代

11、0.9%無菌NaCI溶液至含菌量CFU/ml(3)銅綠假單胞菌CMCC(B) 10104第代0.9%無菌NaCI溶液至含菌量CFU/ml(4)生抱梭菌CMCC(B)64941第代0.9%無菌NaCI溶液至含菌量CFU/ml(5)白色念珠菌CMCC(F)98001第代0.9%無菌NaCI溶液至含菌量CFU/ml(6)黑曲霉CMCC(F)98003第代0.9%無菌NaCI溶液至含菌量CFU/ml2.檢查結(jié)果細菌培養(yǎng)溫度C 3天霉菌及酵母菌培養(yǎng)溫度C 5天菌種類型培養(yǎng)基裝量（ml）培養(yǎng)基管數(shù)（支）硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（天）備注123金黃色葡萄球菌121121枯草芽孢桿菌121121銅綠假單胞菌121121生孢梭菌121121空白對照121菌種類型培養(yǎng)基裝量（ml）培養(yǎng)基管數(shù)（支）宮養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（天）備注123金黃色匍萄球菌121121枯草芽孢桿菌1