細(xì)胞培養(yǎng)2PPT學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)119071907年年 Ross Harrison Ross Harrison （美國(guó)）（美國(guó)）將蛙胚神經(jīng)管區(qū)的一片組織移植到蛙的淋巴液凝塊中，將蛙胚神經(jīng)管區(qū)的一片組織移植到蛙的淋巴液凝塊中，這些組織在體外不但存活若干周，而且居然從細(xì)胞這些組織在體外不但存活若干周，而且居然從細(xì)胞中長(zhǎng)出了軸突（神經(jīng)細(xì)胞）。中長(zhǎng)出了軸突（神經(jīng)細(xì)胞）。意義：公認(rèn)的組織培養(yǎng)開始標(biāo)志；意義：公認(rèn)的組織培養(yǎng)開始標(biāo)志；解決了軸突發(fā)生的爭(zhēng)論；解決了軸突發(fā)生的爭(zhēng)論；培養(yǎng)方法將培養(yǎng)物放在蓋玻片上并培養(yǎng)方法將培養(yǎng)物放在蓋玻片上并倒置于凹玻片腔中培養(yǎng)。倒置于凹玻片腔中培養(yǎng)。第1頁(yè)/共45頁(yè) 1923 Alexis Carrel

2、 (surgeon)Aseptic techniquesCarrel Flask1912-1946Culture Chicken Embryo FibroblastPlasma+tissue homogenate在沒有抗生素的條件下，使雞胚心臟細(xì)胞維持生存在沒有抗生素的條件下，使雞胚心臟細(xì)胞維持生存34年，先后傳代年，先后傳代3400次。次。第2頁(yè)/共45頁(yè)19341934年年 荷蘭溫特荷蘭溫特 發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)素，并證實(shí)了對(duì)植物細(xì)胞發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)素，并證實(shí)了對(duì)植物細(xì)胞 培養(yǎng)的作用培養(yǎng)的作用19371937年年 高特里特高特里特, ,諾比考特諾比考特( (法法) ) 幾乎同時(shí)離體培養(yǎng)幾乎同時(shí)離體培養(yǎng) 了胡蘿

3、卜組織，并使細(xì)胞增殖了胡蘿卜組織，并使細(xì)胞增殖19401940年年 Earle Earle 建立了可無(wú)限傳代的建立了可無(wú)限傳代的C3HC3H小鼠的結(jié)締組小鼠的結(jié)締組 織細(xì)胞系織細(xì)胞系L L系（曾在體外經(jīng)甲基膽蒽系（曾在體外經(jīng)甲基膽蒽 轉(zhuǎn)化）。轉(zhuǎn)化）。19511951年年 Gay Gay 建立了人第一個(gè)細(xì)胞系人體宮頸癌建立了人第一個(gè)細(xì)胞系人體宮頸癌 HelaHela細(xì)胞系（原報(bào)道為鱗癌，細(xì)胞系（原報(bào)道為鱗癌，19711971年更年更 正為腺癌）。正為腺癌）。第3頁(yè)/共45頁(yè)5第4頁(yè)/共45頁(yè)6無(wú)機(jī)分子：水（結(jié)合水，游離水）無(wú)機(jī)分子：水（結(jié)合水，游離水） 無(wú)機(jī)離子（無(wú)機(jī)離子（NaNa+ +,K,K

4、+ +,Ca,Ca2+2+,Mg,Mg2+2+) )第5頁(yè)/共45頁(yè)7第6頁(yè)/共45頁(yè)8微絲微絲(microfilament,MF)中等纖維中等纖維(intermediate filament,IF)微管微管(microtubule,MT)第7頁(yè)/共45頁(yè)9第8頁(yè)/共45頁(yè)培養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)特征培養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)特征1.貼壁型細(xì)胞貼壁型細(xì)胞2.懸浮型細(xì)胞懸浮型細(xì)胞上皮細(xì)胞型上皮細(xì)胞型成纖維細(xì)胞型成纖維細(xì)胞型游走細(xì)胞型游走細(xì)胞型多形性細(xì)胞多形性細(xì)胞第9頁(yè)/共45頁(yè)112.接觸抑制接觸抑制3.密度抑制密度抑制第10頁(yè)/共45頁(yè)12第11頁(yè)/共45頁(yè)13第12頁(yè)/共45頁(yè)14三個(gè)生長(zhǎng)階段：三個(gè)生長(zhǎng)階段：

5、 原代培養(yǎng)期原代培養(yǎng)期從體內(nèi)取出組織接種培養(yǎng)到第一次傳代的從體內(nèi)取出組織接種培養(yǎng)到第一次傳代的 階段，一般維持階段，一般維持14周。周。 傳代期傳代期 衰退期衰退期第13頁(yè)/共45頁(yè)15第14頁(yè)/共45頁(yè)16第15頁(yè)/共45頁(yè)17第16頁(yè)/共45頁(yè)18 正常細(xì)胞會(huì)因?yàn)榧?xì)胞接觸而發(fā)生相正常細(xì)胞會(huì)因?yàn)榧?xì)胞接觸而發(fā)生相互抑制分裂和限制運(yùn)動(dòng)的現(xiàn)象。互抑制分裂和限制運(yùn)動(dòng)的現(xiàn)象。對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期最具活力時(shí)期（細(xì)胞分裂旺盛，分最具活力時(shí)期（細(xì)胞分裂旺盛，分 裂相增多。）裂相增多。） 細(xì)胞分裂指數(shù)細(xì)胞分裂指數(shù)(mitotic index(mitotic index，MI)MI) MI MI( (分裂相個(gè)數(shù)

6、分裂相個(gè)數(shù)10001000個(gè)細(xì)胞個(gè)細(xì)胞) )100100 第17頁(yè)/共45頁(yè)19 新分裂細(xì)胞數(shù)新分裂細(xì)胞數(shù)= =死亡細(xì)胞數(shù)死亡細(xì)胞數(shù) （穩(wěn)定期）（穩(wěn)定期）注：細(xì)胞代謝活動(dòng)仍在進(jìn)行中注：細(xì)胞代謝活動(dòng)仍在進(jìn)行中第18頁(yè)/共45頁(yè)20第19頁(yè)/共45頁(yè)21第20頁(yè)/共45頁(yè)22第21頁(yè)/共45頁(yè)23第22頁(yè)/共45頁(yè)24v成分：成分： 無(wú)機(jī)鹽無(wú)機(jī)鹽 葡萄糖葡萄糖 v作用：作用： 維持滲透壓，調(diào)節(jié)維持滲透壓，調(diào)節(jié)pHpH， 供給能量和無(wú)機(jī)離子供給能量和無(wú)機(jī)離子第23頁(yè)/共45頁(yè)25第24頁(yè)/共45頁(yè)26第25頁(yè)/共45頁(yè)27第26頁(yè)/共45頁(yè)28終濃度：終濃度：0.1% 0.5% 常以常以DMEM/F

7、12培養(yǎng)液配制培養(yǎng)液配制過(guò)濾除菌過(guò)濾除菌-20 保存保存第27頁(yè)/共45頁(yè)29第28頁(yè)/共45頁(yè)30第29頁(yè)/共45頁(yè)31第30頁(yè)/共45頁(yè)32促生長(zhǎng)因子及激素促生長(zhǎng)因子及激素 pH滲透壓滲透壓第31頁(yè)/共45頁(yè)33第32頁(yè)/共45頁(yè)34第33頁(yè)/共45頁(yè)35第34頁(yè)/共45頁(yè)36第35頁(yè)/共45頁(yè)37v 取材過(guò)程有可能帶入支原體、病毒，對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞取材過(guò)程有可能帶入支原體、病毒，對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞 產(chǎn)生潛在影響，可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或?qū)嶒?yàn)產(chǎn)生潛在影響，可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或?qū)嶒?yàn) 結(jié)果的不結(jié)果的不 可靠性可靠性v 每批血清之間都有差別，其成分不能保持一致每批血清之間都有差別，其成分不能保持一致v 血清中含有一些物質(zhì)對(duì)細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生毒性作用血清中含有一些物質(zhì)對(duì)細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生毒性作用第36頁(yè)/共45頁(yè)38第37頁(yè)/共45頁(yè)39第38頁(yè)/共45頁(yè)40v19511951年年,EarleEarle,EarleEarle基礎(chǔ)合成培養(yǎng)基基礎(chǔ)合成培養(yǎng)基MEMMEM (minimum essential media) (minimum essential media)第39頁(yè)/共45頁(yè)41第40頁(yè)/共45頁(yè)42第41頁(yè)/共45頁(yè)43HamF12 1