血涂片制備 白細(xì)胞分類計數(shù)

1、實驗二實驗二 血涂片制備染色及白細(xì)胞分類計數(shù)血涂片制備染色及白細(xì)胞分類計數(shù)臨床檢驗基礎(chǔ)實驗臨床檢驗基礎(chǔ)實驗江蘇大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院江蘇大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院臨床檢驗與輸血教研室臨床檢驗與輸血教研室 涂片技術(shù)涂片技術(shù)是制備血液樣品最常用的技術(shù)。將是制備血液樣品最常用的技術(shù)。將血液樣品制成單層細(xì)胞的涂片標(biāo)本，染色后可對血液樣品制成單層細(xì)胞的涂片標(biāo)本，染色后可對血液中各種細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行形態(tài)觀察、細(xì)胞計數(shù)、血液中各種細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行形態(tài)觀察、細(xì)胞計數(shù)、細(xì)胞大小測量等工作。細(xì)胞大小測量等工作。血涂片制備血涂片制備推片載玻片血液一張滿意的血涂片應(yīng)厚薄均勻 頭 體 尾鮮明涂片干燥后用鉛筆在血涂片的頭部寫

2、上姓名和編號李四B 1 2 3方法與步驟方法與步驟推片：擠出第二滴血置于載玻片的右側(cè)推片：擠出第二滴血置于載玻片的右側(cè)再取另一張邊緣光滑的雙凹片，斜置于血滴的前緣，再取另一張邊緣光滑的雙凹片，斜置于血滴的前緣，先向后稍移動輕輕觸及血滴，使血液沿玻片端展開先向后稍移動輕輕觸及血滴，使血液沿玻片端展開成線狀。成線狀。3045兩玻片的角度以兩玻片的角度以30-4530-45為宜，輕輕將雙凹片向為宜，輕輕將雙凹片向前勻速推進(jìn)，即涂成血液薄膜。前勻速推進(jìn)，即涂成血液薄膜。血涂片血涂片不良血涂片不良血涂片實驗用品實驗用品器材器材: 醫(yī)用一次性采血針、酒精棉球、經(jīng)脫脂洗醫(yī)用一次性采血針、酒精棉球、經(jīng)脫脂洗凈

3、的載玻片凈的載玻片 、雙凹片（推片）、雙凹片（推片） 。試劑試劑: Wrights（瑞氏）染液：（瑞氏）染液：Wrights色素粉色素粉末末0.1g，溶于，溶于60 ml甲醇。甲醇。 瑞氏染色原理瑞氏染色原理 瑞氏粉瑞氏粉是由是由伊紅伊紅和和美藍(lán)美藍(lán)混合后組成的一種中性鹽染料。伊紅是混合后組成的一種中性鹽染料。伊紅是一種酸性染料，為伊紅鈉鹽，其有色部分為陰離子；美藍(lán)是一種堿一種酸性染料，為伊紅鈉鹽，其有色部分為陰離子；美藍(lán)是一種堿性染料，為氯化美藍(lán)，有色基團(tuán)為陽離子。如以性染料，為氯化美藍(lán)，有色基團(tuán)為陽離子。如以M+代表美藍(lán)，以代表美藍(lán)，以E-代表伊紅。將適量的代表伊紅。將適量的ME溶解在溶解

4、在甲醇甲醇中，即成為中，即成為瑞氏染液瑞氏染液。 甲醇的作用甲醇的作用可使可使ME溶解，解離為溶解，解離為M+和和E，這兩種有色離，這兩種有色離子可以選擇性地吸附血細(xì)胞內(nèi)的不同成分而著色。子可以選擇性地吸附血細(xì)胞內(nèi)的不同成分而著色。 各種細(xì)胞及細(xì)胞的各種成分由于其化學(xué)性質(zhì)不同，對各種染各種細(xì)胞及細(xì)胞的各種成分由于其化學(xué)性質(zhì)不同，對各種染料的親和力也不一樣，因此，在血片上可以見到不同的著色。料的親和力也不一樣，因此，在血片上可以見到不同的著色。細(xì)細(xì)胞中堿性物質(zhì)與酸性染料伊紅結(jié)合染成紅色胞中堿性物質(zhì)與酸性染料伊紅結(jié)合染成紅色 ；細(xì)胞中的酸性物質(zhì)；細(xì)胞中的酸性物質(zhì)可與染液中的堿性染料美藍(lán)結(jié)合染成藍(lán)色

5、可與染液中的堿性染料美藍(lán)結(jié)合染成藍(lán)色 ；當(dāng)細(xì)胞含酸、堿性物；當(dāng)細(xì)胞含酸、堿性物質(zhì)各半時，它們既與酸性染料作用，又與堿性染料作用，染成淡質(zhì)各半時，它們既與酸性染料作用，又與堿性染料作用，染成淡紫紅色。紫紅色。 瑞氏染色原理瑞氏染色原理血涂片染色血涂片染色勿沖洗再加勿沖洗再加瑞氏染色瑞氏染色液液5-8滴后將滴后將液和液和液充分混勻靜置液充分混勻靜置10分鐘分鐘直接流水沖洗3-5分鐘（切勿先倒掉染液）涂片經(jīng)水洗干燥后用油鏡分類計數(shù)100個白細(xì)胞李四李四123123涂片干燥后加瑞氏染色涂片干燥后加瑞氏染色液液5-8滴滴覆蓋整個血膜覆蓋整個血膜1分鐘分鐘染色 濃染：待涂片在空氣中完全干燥后，滴加數(shù)滴Wr

6、ights染液蓋滿血膜為止，染色35 min。 淡染：然后滴加等量緩沖液，使其與染液均勻混合，靜置1015 min。用流水沖去染液，吸水紙吸干，鏡檢。 血涂片的觀察血涂片的觀察低倍鏡觀察低倍鏡觀察1.1.染色情況染色情況( (滿意、偏酸、偏堿）滿意、偏酸、偏堿）2.2.細(xì)胞分布情況細(xì)胞分布情況油鏡下分類計數(shù)：體尾交界處。油鏡下分類計數(shù)：體尾交界處。油鏡分類時應(yīng)按一定走向，不要重復(fù)計數(shù)。（共計油鏡分類時應(yīng)按一定走向，不要重復(fù)計數(shù)。（共計數(shù)數(shù)100100個白細(xì)胞）個白細(xì)胞）李四李四123123體尾交界處體尾交界處理想?yún)^(qū)理想?yún)^(qū)域域 細(xì)胞重疊細(xì)胞重疊 細(xì)胞太稀細(xì)胞太稀理想?yún)^(qū)域理想?yún)^(qū)域各類成熟白細(xì)胞的形

7、態(tài)學(xué)：各類成熟白細(xì)胞的形態(tài)學(xué)： q中性粒細(xì)胞（中性粒細(xì)胞（Ne）：在瑞氏染色血涂片上呈在瑞氏染色血涂片上呈圓形圓形，直徑直徑1013m，胞漿胞漿染粉紅色染粉紅色，核形核形一一葉（桿狀核）至五葉不等，葉（桿狀核）至五葉不等，以三葉者多見以三葉者多見，染成染成深紫紅色深紫紅色，胞漿胞漿中有許多中有許多細(xì)小均勻紫紅色顆粒細(xì)小均勻紫紅色顆粒。q嗜酸性粒細(xì)胞（嗜酸性粒細(xì)胞（EoEo）：）：較中性粒細(xì)胞稍大較中性粒細(xì)胞稍大，胞胞核核多為兩葉，呈眼鏡、八字形多為兩葉，呈眼鏡、八字形，核染色質(zhì)核染色質(zhì)粗糙粗糙染深紫紅色染深紫紅色，胞漿胞漿內(nèi)充滿內(nèi)充滿粗大均勻的嗜酸性顆粗大均勻的嗜酸性顆粒粒，瑞氏染色時呈，瑞氏

8、染色時呈桔紅色桔紅色，有折光性。，有折光性。 q嗜堿性粒細(xì)胞（嗜堿性粒細(xì)胞（Ba）：）：胞漿胞漿中含有大小不等中含有大小不等的的嗜堿性顆粒嗜堿性顆粒，瑞氏染色時呈，瑞氏染色時呈蘭黑色蘭黑色。于光學(xué)顯。于光學(xué)顯微鏡下常見胞漿中有小空泡，乃因嗜堿性顆粒易微鏡下常見胞漿中有小空泡，乃因嗜堿性顆粒易溶于水或因功能活動而脫顆粒所致；溶于水或因功能活動而脫顆粒所致；核核呈呈淡紫紅淡紫紅色?？床磺迳？床磺?，呈桿狀或分葉狀。，呈桿狀或分葉狀。 q淋巴細(xì)胞（淋巴細(xì)胞（Ly）：）：胞體胞體呈圓形，直徑介于呈圓形，直徑介于615m之間，在成人血涂片中以小淋巴細(xì)胞之間，在成人血涂片中以小淋巴細(xì)胞為多見，直徑為多見，直徑69m，核核大呈深紫色致密而濃大呈深紫色致密而濃染染，胞漿胞漿量極少量極少；大淋巴細(xì)胞；大淋巴細(xì)胞胞漿胞漿量較多，呈量較多，呈清澈的淡藍(lán)色清澈的淡藍(lán)色，可見，可見少量嗜苯胺藍(lán)顆粒少量嗜苯胺藍(lán)顆粒，胞核胞核圓或橢圓圓或橢圓，常偏向細(xì)胞一側(cè)常偏向細(xì)胞一側(cè)，染色較深。，染色較深。 q單核細(xì)胞（單核細(xì)胞（Mo）：）：在瑞氏染色涂片上為在瑞氏染色涂片上為1220m，胞體胞體圓形、橢圓形或不規(guī)則形圓形、橢圓形或不規(guī)則形；核形核形多多種多樣，最重要的特點是種多樣，最重要的特點是染色質(zhì)染色質(zhì)較細(xì)致疏松，呈較細(xì)致疏松，呈絲網(wǎng)狀或條縷狀絲網(wǎng)狀或條縷狀，著色較淡著色較淡胞漿胞漿較多，