大腸桿菌生理生化鑒定

1、大腸桿菌生理生化鑒定路線：氧化酶 （-） f本丙氨酸脫氨酶 （-） H2S （-） r DNA酶（-）乳糖（+ ） r檸檬酸鹽（-） D-阿東醇（-）賴氨酸脫短酶（+） r纖維二糖（-）1、氧化酶巴氏桿菌1、原理：氧化酶亦即細(xì)胞色素氧化酶，為細(xì)胞色素呼吸酶系統(tǒng)的終末呼吸酶，氧化酶先使細(xì)胞色素C氧化，然后此氧化型細(xì)胞色素C再使對苯二胺氧化，產(chǎn)生顏色反應(yīng)。2、試劑鹽酸二甲基對苯撐二胺（或四甲基對苯撐二胺）1%水溶液于茶色瓶中在冰箱中貯存。3、方法在干凈培養(yǎng)皿里放一張濾紙，滴上二甲基對苯撐二胺的1%水溶液，僅使濾紙濕潤即可，不可過濕，用金絲接種環(huán) （不可用鐐銘絲）取1824 h的菌苔，涂沫在濕潤的濾

2、紙上，在 10 s內(nèi)涂抹的菌苔現(xiàn)紅色者為陽性，（四甲基對苯撐二胺為藍(lán)色）1060 s現(xiàn)紅色者為延退反應(yīng)，60 s以上現(xiàn)紅色者不計，按陰性處理。4、注意事項：a. 鹽酸二甲基對苯撐二胺溶液容易氧化，溶液應(yīng)裝在棕色瓶中，并在冰箱內(nèi)保存，如溶液變 為紅褐色，即不宜使用。b. 鐵、鐐銘絲等金屬可催化二甲基對苯撐二胺呈紅色反應(yīng)，若用它來挑取菌苔，會出現(xiàn)假陽 性，故必須用白金絲或玻璃棒（或牙簽）來挑取菌苔。c. 在濾紙上滴加試劑，以剛剛打濕濾紙為宜，如濾紙過濕，會防礙空氣與菌苔接觸，從而延 長了反應(yīng)時間，造成假陰性。2、苯丙氨酸脫氨酶變形桿菌1、原理：某些細(xì)菌（如變形桿菌）具有苯丙氨酸脫氨酶， 能將苯丙氨

3、酸氧化脫氨， 形成苯丙酮酸， 苯丙酮酸遇到三氯化鐵呈藍(lán)綠色。本試驗用于腸肝菌科和某些芽抱桿菌屬的鑒定。、L口死圣酵母膏3gNaCl5gNa2HPO41gDL-苯丙氨酸2g（或L-苯丙氨酸）1g蒸儲水1000 mlpH為7.0,分裝試管，121 C蒸氣滅菌10min，擺成長斜面。3、試劑10%(W/V)的 FeCl3 溶液4、方法適當(dāng)濃度接種，37C培養(yǎng)4h或824h測定。將試劑45滴滴到生長菌的斜面上，當(dāng)斜面上和冷凝水中產(chǎn)生綠色時為陽性反應(yīng)，即表明己形成了苯丙酮酸，不變則為陰性。3、H2S(TSI)變形桿菌雞白痢沙門氏1、原理:有些細(xì)菌可分解培養(yǎng)基中含硫氨基酸或含硫化合物，而產(chǎn)生硫化氫氣體，硫

4、化氫遇鉛鹽或低鐵鹽可生成黑色沉淀物。2、培養(yǎng)基:牛肉膏7.5g蛋白月東10gNaCl5g明膠100120g (或瓊脂 15g)10%FeCl2 (培養(yǎng)基滅菌后無菌加入 )5 ml蒸儲水1000 mlpH 7.0 , 112 C滅菌 20min在明膠培養(yǎng)基尚未凝固時，加入新制備的過濾滅菌的FeCl2,用無菌試管分裝，培 養(yǎng)基高度約為45 cm,立即置冷水冷卻凝固。3、方法用穿刺法接種，30C培養(yǎng)，1、3、7天，觀察，變黑者為陽性，不變?yōu)殛幮浴?、注意事項此方法適用于腸桿菌科細(xì)菌鑒定在實驗過程中可用硫酸亞鐵代替氯化亞鐵可同時測定明膠液化，20 C培養(yǎng)4、DNA酶金黃色葡萄球菌1、少口擰舉酪骯水解物

5、大豆蛋白月東15g5gNaClDNA甲苯胺藍(lán)5g2g0.1g瓊脂蒸僻水15g1000 ml除DNA和甲苯胺藍(lán)之外，加熱熔化后調(diào)pH至7.2,加入DNA和甲苯胺藍(lán)，混勻后分裝，121 C滅菌30 min2、方法將培養(yǎng)基倒平板，點接幼齡種于培養(yǎng)皿上，適溫培養(yǎng)2天結(jié)果觀察：在接種部位周圍出現(xiàn)粉紅色暈圈為陽性，沙雷氏菌可作陽性對照5、糖、醇發(fā)酵實驗乳糖、纖維二糖、D-阿東醇1、培養(yǎng)基：蛋白月東水（pH7.6）100ml需要的糖（醇）類1g1.6%漠甲酚紫酒精溶液0.1ml （或0.2%漠麝香草酚藍(lán)酒精溶液1.2ml）制法:1、將所需糖（醇、昔）1克，加入100ml蛋白月東水中，并按比例加入0.5%0.

6、7%瓊脂制成半固體培養(yǎng)基，加熱溶解。2、加入1.6%漠甲酚紫酒精溶液0.1ml （或0.2%漠麝香草酚藍(lán)酒精溶液 1.2ml）,搖勻。3、分裝于試管內(nèi)，10磅高壓滅菌20分鐘，檢驗備用。附：蛋白腺水培養(yǎng)基：蛋白月東1克 氯化鈉0.5克蒸儲水100ml1、將以上成份混合，加熱溶解，校正 pH至7.47.6。2、過濾、分裝試管，每管約 3ml。2、方法：以18-24h幼齡菌種作種子，穿刺接種，每株2支。同時還要有標(biāo)準(zhǔn)株和不按種管作對照。37C培養(yǎng)1、3、5天后觀察，如指示劑變黃，表示產(chǎn)酸，為陽性；不變或變藍(lán)（紫）則為陰性。6、檸檬酸鹽利用試驗枯草芽跑桿菌1、原理：某些細(xì)菌能夠利用檸檬酸鈉作為碳的唯

7、一來源和無機(jī)磷酸鉉作為氨的來源，因此能夠在含有上述成分的合成培養(yǎng)基上生長，并且分解檸檬酸鹽最后生成碳酸鹽，使培養(yǎng)基變 為堿性。在指示劑漠麝香草酚藍(lán)溶液的存在下，培養(yǎng)基由綠色變?yōu)樯钏{(lán)色。2、培養(yǎng)基：Simmons培養(yǎng)基氯化鈉5g0.2g1g硫酸鎂磷酸二氫鉉磷酸氫二鉀1g檸檬酸鈉1g蒸儲水1000ml1 %漠麝香草酚藍(lán)10ml瓊脂20g將除瓊脂和漠麝香草酚藍(lán)溶液處的各成分溶解后，調(diào) pH值為6.87.0,加入瓊脂融化, 再加入漠麝香草酚藍(lán)溶液，分裝試管，經(jīng) 121 C滅菌15 min,制成斜面?zhèn)溆谩?、方法 取待檢菌在培養(yǎng)基上先劃線再穿刺，37C培養(yǎng)觀察24d 結(jié)果判定：陽性者在培養(yǎng)基斜面上生長，并且Simmons培養(yǎng)基由草綠色變?yōu)樗{(lán)色7、賴氨酸脫毯酶I、少口喬舉蛋白月東5g酵母膏浸3g葡萄糖1g蒸儲水1000ml0.2%漠麝香草酚藍(lán)12 ml待測氨基酸5g將以上氨基酸和漠麝香草酚藍(lán)溶液外的各種成分加入蒸儲水中，加熱溶解，調(diào)pH值至6.8,加入0.2%漠麝香草酚藍(lán)溶液和待測氨基酸。氨基酸應(yīng)先溶解于 NaOH溶液中，比例為0.5g L- a-賴氨酸+1.5% NaOH溶液0.5ml,再