副溶血弧菌耐藥現(xiàn)狀及耐藥機(jī)制

1、副溶血弧菌耐藥現(xiàn)狀及耐藥機(jī)制 2.2.1.3生物膜系統(tǒng) 生物膜是細(xì)菌附著在固體表面生長(zhǎng)，并形成由菌體及其分泌的基質(zhì)包裹在一起的膜狀復(fù)合物。生物膜形成后，細(xì)菌對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性、耐藥性及反抗宿主免疫細(xì)胞的吞噬作用明顯增加。細(xì)菌生物膜耐藥機(jī)制并未完全闡明。大部分觀點(diǎn)認(rèn)為：一方面，細(xì)菌形成的生物膜可以構(gòu)成一個(gè)外部屏障，限制或減緩抗生素的滲入;另一方面，細(xì)菌在生物膜狀態(tài)下，類整合酶基因表達(dá)上調(diào),突變率提高，這種相互接觸更為緊密的環(huán)境導(dǎo)致菌體間質(zhì)粒的接合、轉(zhuǎn)導(dǎo)等頻率也隨之增高，這為菌體間耐藥基因的擴(kuò)散供應(yīng)了有利條件。 致病性副溶血弧菌能形成生物膜，從而與載體進(jìn)行特異性的結(jié)合。生物膜的形成與菌濃度、溫度、Na

2、Cl濃度、pH值等因素親密相關(guān)，Ca2+能促進(jìn)副溶血弧菌形成生物膜。有研究發(fā)覺(jué)，耐藥較高的弧菌形成生物膜的能力也相對(duì)較強(qiáng),但關(guān)于副溶血弧菌生物膜與耐藥性之間的關(guān)系還有待進(jìn)一步研究。 2.2.2靶位基因突變 細(xì)菌與抗生素結(jié)合的靶位基因突變，導(dǎo)致抗生素不能產(chǎn)生作用，這是細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的重要原因。目前對(duì)該機(jī)制研究最多的是喹諾酮類藥物的靶位基因突變。細(xì)菌對(duì)喹諾酮類藥物的耐藥主要是由于編碼DNA旋轉(zhuǎn)酶或拓?fù)洚悩?gòu)酶的基因突變所致.DNA旋轉(zhuǎn)酶由GyrA和GyrB亞基組成，分別由gyrA和gyrB基因編碼，拓?fù)洚悩?gòu)酶由ParC和ParE亞基組成，分別由parC和parE基因編碼。細(xì)菌對(duì)喹諾酮類藥物的耐藥主要

3、與gyrA和parC基因突變有關(guān).大部分喹諾酮類耐藥突變發(fā)生于gyrA基因序列上67-106位氨基酸殘基之間，稱為喹諾酮耐藥打算區(qū)（QuinoloneResistance-DeterminingRegion,QRDR）. 研究表明，大部分對(duì)環(huán)丙沙星等喹諾酮類藥物耐藥的副溶血弧菌，其gyrA基因83位氨基酸由絲氨酸突變?yōu)楫惲涟彼?；?duì)于耐藥水平高的菌株，其parC基因也會(huì)發(fā)生點(diǎn)突變，第85位氨基酸由絲氨酸突變?yōu)楸奖彼? 2.2.3耐藥酶 細(xì)菌可以通過(guò)產(chǎn)生鈍化酶或滅活酶來(lái)破壞或滅活抗生素的活性。細(xì)菌產(chǎn)生的耐藥酶主要有-內(nèi)酰胺酶、氨基糖苷類鈍化酶、氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶和大環(huán)內(nèi)酯類-林克霉素類-鏈陽(yáng)菌素類

4、鈍化酶。 現(xiàn)有研究發(fā)覺(jué)，副溶血弧菌對(duì)？?jī)?nèi)酰胺類（氨芐西林、頭孢菌素）、氨基糖苷類（卡那霉素）及氯霉素類（氯霉素）抗生素的耐藥主要通過(guò)-內(nèi)酰胺酶、氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶及氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶等耐藥酶類介導(dǎo).目前對(duì)副溶血弧菌該機(jī)制研究最多的是其產(chǎn)生的-內(nèi)酰胺酶。-內(nèi)酰胺酶能夠特異性地打開(kāi)分子結(jié)構(gòu)中的-內(nèi)酰胺環(huán)，使-內(nèi)酰胺類抗生素失去抗菌活性。研究表明，在副溶血弧菌中存在組氨酸激酶/應(yīng)答調(diào)整蛋白-VbrK/VbrR,可以掌握-內(nèi)酰胺酶的表達(dá)，介導(dǎo)副溶血弧菌對(duì)-內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥.RuichaoLi等發(fā)覺(jué)攜帶有編碼-內(nèi)酰胺酶基因（blaTEM-1、blaPER-1、blaCMY-2、blaVEB-2等）的可

5、結(jié)合質(zhì)粒介導(dǎo)了副溶血弧菌對(duì)廣譜頭孢菌素的耐藥。 3副溶血弧菌耐藥性檢測(cè) 3.1耐藥表型檢測(cè) 細(xì)菌耐藥表型檢測(cè)的常規(guī)方法為藥敏試驗(yàn)，藥敏試驗(yàn)的方法主要包括紙片擴(kuò)散法、肉湯稀釋法、濃度梯度法和自動(dòng)化檢測(cè)系統(tǒng).藥敏結(jié)果的判定是依據(jù)美國(guó)臨床試驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute,CLSI）弧菌屬的標(biāo)準(zhǔn)M45.紙片擴(kuò)散法不需要特別的儀器，具有抗生素選擇敏捷、成本較低等優(yōu)點(diǎn)，是副溶血弧菌藥敏試驗(yàn)中最常采用的一種方法，由于副溶血弧菌是嗜鹽菌，因此進(jìn)行藥敏試驗(yàn)的比濁液中應(yīng)添加適量的NaCl,一般為0.85%.肉湯稀釋法能夠獲得最小抑菌濃度（Minima

6、lInhibitionConcentration,MIC），商品化的藥敏板具有操作便利、可重復(fù)性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。濃度梯度法是通過(guò)抗生素在瓊脂板上擴(kuò)散成濃度梯度來(lái)定量測(cè)量抗生素敏感性，商品化的方法為E-test法，操作便利，可作為副溶血弧菌耐藥模糊結(jié)果的確認(rèn)。臨床常用于檢測(cè)副溶血弧菌的自動(dòng)化儀器系統(tǒng)主要為Vitek系統(tǒng)和BDPhoenix系統(tǒng)，可以全自動(dòng)地對(duì)耐藥結(jié)果進(jìn)行定性和定量的分析，具有簡(jiǎn)便、快速的優(yōu)點(diǎn)。 3.2耐藥基因檢測(cè) 在藥敏試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，假如能知道細(xì)菌是否攜帶有耐藥基因，能更好地預(yù)估藥物治療的效果，解釋耐藥機(jī)制。常用的細(xì)菌耐藥基因檢測(cè)的方法包括PCR法、DNA探針?lè)?、基因芯片技術(shù)、飛行時(shí)間

7、質(zhì)譜技術(shù)（MALDI-TOFMS）、全基因組測(cè)序等.這些檢測(cè)方法具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏度和特異度高等特點(diǎn)，同時(shí)可以結(jié)合基因克隆和測(cè)序來(lái)分析耐藥基因的結(jié)構(gòu)及突變狀況。 目前，在副溶血弧菌中已經(jīng)檢測(cè)到多種耐藥基因，主要包括：-內(nèi)酰胺類耐藥基因blaTEM、blaCMY、blaPER;氯霉素類耐藥基因catA、catB;氨基糖苷類耐藥基因aphA;四環(huán)素類耐藥基因tetA、tetB、tetC、tetD、tetG、tetM、tetS等.抗生素耐藥基因數(shù)據(jù)庫(kù)（AntibioticResistanceGenesDatabase,ARDB）公布的副溶血弧菌耐藥基因主要有兩類：一類是編碼MATE家族的多藥物外排

8、泵基因，介導(dǎo)環(huán)丙沙星、卡那霉素、諾氟沙星、鏈霉素等藥物的耐藥；另一類是編碼黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶的基因，介導(dǎo)四環(huán)素的耐藥，其機(jī)制尚不清晰。 細(xì)菌耐藥基因與耐藥表型之間存在一定的相關(guān)性，大多數(shù)狀況下，細(xì)菌攜帶某種耐藥基因可以表現(xiàn)出相應(yīng)的耐藥表型。但有些狀況下副溶血弧菌中雖檢出了某種耐藥基因，但是卻對(duì)相應(yīng)的抗生素敏感;而有些狀況下發(fā)覺(jué)副溶血弧菌對(duì)某些抗生素耐藥卻未能檢測(cè)到相應(yīng)的耐藥基因.造成這種不全都的原因比較復(fù)雜，值得進(jìn)一步深入研究。 4小結(jié) 傳統(tǒng)的副溶血弧菌對(duì)大部分抗生素是敏感的，但近些年研究發(fā)覺(jué)，很多國(guó)家和地區(qū)分別的副溶血弧菌都觀看到多耐藥現(xiàn)象。質(zhì)粒等可移動(dòng)遺傳元件介導(dǎo)的耐藥基因的傳播及擴(kuò)散，加速了副溶血弧菌多耐藥菌株的出現(xiàn)，從而增加了抗生素治療失敗的可能性。因此，應(yīng)