細(xì)胞因子及其受體檢測(cè)-下篇臨床免疫學(xué)及檢驗(yàn)

1、下篇臨床免疫學(xué)及檢驗(yàn)第二十五章 細(xì)胞因子及其受體檢測(cè)chapter 25 assays for cytokine and cytokine receptor第一部分 教學(xué)內(nèi)容和要求一、目的要求掌握：細(xì)胞因子的匸物學(xué)和免疫沖各種檢測(cè)方法的原理及評(píng)價(jià)；熟悉：生物寧和免疫學(xué)方法檢測(cè)細(xì)胞因 子的技術(shù)耍點(diǎn)及方法評(píng)價(jià)；了解：細(xì)胞因子的分子牛物學(xué)檢測(cè)方法、細(xì)胞因子受體及可溶性受體的檢測(cè)技 術(shù)。二、教學(xué)內(nèi)容1. 生物學(xué)檢測(cè)法：細(xì)胞增殖法，靶細(xì)胞殺傷或抑制法，細(xì)胞病變抑制法，趨化活性測(cè)定法，生物學(xué)檢測(cè)法 的評(píng)價(jià)。2. 免疫學(xué)檢測(cè)法：雙抗體夾心elisa,放射免疫分析，酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)，細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的檢測(cè)，免

2、疫學(xué)檢測(cè)法的評(píng)價(jià)。3. 分子生物學(xué)檢測(cè)：細(xì)胞i大i子的dna檢測(cè)，細(xì)胞因子mrna表達(dá)的測(cè)定，分子生物學(xué)檢測(cè)法的評(píng)價(jià)。4. 細(xì)胞因子受體檢測(cè)技術(shù)：膜結(jié)合受體的測(cè)定，可溶性受體的測(cè)定。第二部分測(cè)試題一、選擇題（一）單項(xiàng)選擇題（a型題）1 .能夠川細(xì)胞増殖法檢測(cè)的細(xì)胞因了是a. csf b. tnf c. ifn2. 生物學(xué)檢測(cè)法最重要的優(yōu)點(diǎn)是a.高特異性b.高靈敏性3. 免疫化學(xué)測(cè)定法最重要的優(yōu)點(diǎn)a.高特異性b.高靈敏性dil6e.il-8c.操作簡(jiǎn)單d.活性單位測(cè)定c.含量測(cè)定d.活性單位測(cè)定e.實(shí)驗(yàn)成木低e.實(shí)驗(yàn)成木低4.能夠川細(xì)胞病變抑制法檢測(cè)的細(xì)胞i人1了a. csfb tnfc.ifn

3、dil6e. il-85.檢測(cè)il2的依賴細(xì)胞株是:a. b9b 7td1c.ctlld. l929e. wish6.檢測(cè)tnf的靶細(xì)胞株a. b9b 7td1c.ctlld l929e. wish7. 檢測(cè)人干擾素的指示細(xì)胞株a. b9 b. 7td1 c. ctll d. l929 e. wish8. mtt比色法的測(cè)定波氏為a. 570nm b 450nm c 490nm d 670nmm e 630nm9. 可測(cè)定單個(gè)細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的方法a. elisa b. ria c.凝集反應(yīng)d. elispot e.免疫比濁10. 可同時(shí)測(cè)定兩種細(xì)胞因子的方法是a. elisa b. ria

4、c.生物學(xué)檢測(cè)法d. elispot e. pcr11. 細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的檢測(cè)主要用于測(cè)定的細(xì)胞是a. tcb. thc. b細(xì)胞d. nk細(xì)胞e.巨噬細(xì)胞（二）多項(xiàng)選擇題（x型題）1. 生物學(xué)法檢測(cè)細(xì)胞因子的特點(diǎn)具冇a.高特異性b.髙靈敬性 c.操作簡(jiǎn)單d.活性單位測(cè)定e.實(shí)驗(yàn)成本低2. 免疫化學(xué)法檢測(cè)細(xì)胞因子的特點(diǎn)包括a.高特異性b.髙靈敬性 c.操作簡(jiǎn)單d.活性單位測(cè)定e.含量測(cè)定3. 能夠用細(xì)胞増殖法檢測(cè)的細(xì)胞因子冇a. il-2 b. tnf c. ifn d. il-6 e. il-84. 用于檢測(cè)細(xì)胞増殖程度的方法a.直接計(jì)數(shù) b. elispot c. 3h-tdr摻入法d.

5、mtt 比色法 e. bas-elisa5 .能夠用于檢測(cè)細(xì)胞毒反應(yīng)程度的方法有a.結(jié)晶紫染色法b. mtt比色法 c. bas-elisad. elispot e. 51 cr 釋放法6. 測(cè)定細(xì)胞因子含量常用的技術(shù)有a. elisa b. ria c.凝集反應(yīng)d. elispot e.免疫比濁7. 在mtt比色法屮，用于溶解反應(yīng)產(chǎn)物的溶劑有a. dmso b. peg c. sds d. nbt e.酸化異內(nèi)醇8. 檢測(cè)膜型細(xì)胞因了受體的方法是a.熒光抗體技術(shù)b. elisa c.斑點(diǎn)-elisad.流式細(xì)胞術(shù)e. ria9. 檢測(cè)細(xì)胞因子的主要方法包括a.用elisa檢測(cè)細(xì)胞因了及其受體

6、b.用依賴性細(xì)胞株檢測(cè)相應(yīng)細(xì)胞因子c.用分子雜交技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞因了 mrna的表達(dá) d.用pcr技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞因子e. 用生物活性檢測(cè)法檢測(cè)細(xì)胞因了活性水平10. 檢測(cè)可溶性細(xì)胞因了受體的方法冇：a.熒光抗體技術(shù) b. elisa c.斑點(diǎn)-elisad.流式細(xì)胞術(shù)e. r1a11. el前細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的檢測(cè)方法有a. ria b.免疫熒光染色技術(shù)c.流式細(xì)胞術(shù) d. elisa e.細(xì)胞病變抑制法二、填空題1. 測(cè)定細(xì)胞因子的方法可分為、和，其中檢測(cè)細(xì)胞因了的生物活性，其結(jié)果以表示。2. 免疫學(xué)檢測(cè)法檢測(cè)細(xì)胞因子的，其結(jié)果以表示。3. 細(xì)胞生物活性測(cè)定包括、和等方法。4. 檢測(cè)il-2的生物活

7、性采用法，檢測(cè)干擾素的活性采用法，檢測(cè)腫瘤壞死因了活性采用法。5. 檢測(cè)細(xì)胞增殖程度常采用的試驗(yàn)方法有和。6. 在mtt比色法中，代謝產(chǎn)物為紫色結(jié)晶顆粒，該產(chǎn)物經(jīng)或溶解顯色，測(cè)定波長(zhǎng)為nm, 參考波長(zhǎng)為nm。7. 用于測(cè)定il-2的細(xì)胞株為,用于測(cè)定tnf的細(xì)胞株為或。8. 用于測(cè)定人干擾素的細(xì)胞株為,攻擊病璉為。9. 測(cè)定il-8生物活性的方法是。10. 用免疫化學(xué)法測(cè)定細(xì)胞因子含量常采用的方法有、和。三、名詞解釋1. 依賴細(xì)胞株（dependence cell strain）2. 細(xì)胞因子活性單位（cytokine activity unit）四、問答題1. 細(xì)胞因子檢測(cè)的臨床意義及其注意

8、的問題。2. 生物學(xué)測(cè)定法測(cè)定細(xì)胞因子原理及其優(yōu)缺點(diǎn)。3. 生物學(xué)測(cè)定法測(cè)定細(xì)胞因了的技術(shù)類型及其應(yīng)用。4. 免疫化學(xué)法測(cè)定細(xì)胞因了原理及其優(yōu)缺點(diǎn)。第三部分參考答案與題解一、選擇題（一）單項(xiàng)選擇題（a型題）1. d 2. d 3. a 4. c 5. c 6. d 7. e 8. a 9. d 10. d 11. b（二）多項(xiàng)選擇題（x型題）1. bde 2. ace 3. ad 4. acd 5. abe 6. abd 7. ae 8. ad9. abcde 10. bce 11. bc二、填空題1. 生物學(xué)測(cè)定法、免疫化學(xué)測(cè)定法、分子生物學(xué)測(cè)定法、生物學(xué)測(cè)定法、活性單位/毫升（u/ml）。

9、2. 蛋白含暈、皮克/毫升（pg/ml）或納克/毫升（ng/ml）o3. 細(xì)胞増殖法、靶細(xì)胞殺傷法、細(xì)胞病變抑制法、趨化活性測(cè)定法。4. 細(xì)胞増殖法、細(xì)胞病變抑制法、靶細(xì)胞殺傷法。5. 3h-tdr摻入法、mtt比色法。6. 酸化界內(nèi)醇、二甲基亞佩、570 nm、630 nm。7. ctll、l929、weh1164.138. wish、vs vo9. boyden小室法。10. 雙抗體夾心elisa、放射免疫分析、酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)（elispot）。三、名詞解釋1. 依賴細(xì)胞株：是指人們?yōu)闄z測(cè)某一種細(xì)胞因了而篩選的，該細(xì)胞株的分裂増殖只依賴于某一種細(xì)胞 因子的存在，并在一定濃度范圍內(nèi)與細(xì)胞増

10、殖程度呈正相關(guān)。若培養(yǎng)基中缺乏這種細(xì)胞因子，依賴株則不 能存活。2. 細(xì)胞因了活性單位：細(xì)胞因了使相應(yīng)細(xì)胞達(dá)到最人程度增殖的50%時(shí)所需細(xì)胞因了的含量稱為細(xì) 胞因子的一個(gè)活性單位。四、問答題1. 細(xì)胞因子是機(jī)體內(nèi)十分巫要的免疫分子。在棊礎(chǔ)免疫學(xué)研究中，檢測(cè)細(xì)胞因子水平用于探討細(xì)胞 因子水平與免疫細(xì)胞表熨、分化、增殖以及功能的相互關(guān)系及細(xì)胞因子與某些生理病理過程的相互關(guān)系。 在臨床醫(yī)學(xué)的研究中，當(dāng)發(fā)生某些疾病時(shí)，體內(nèi)細(xì)胞因子及受體表達(dá)可發(fā)生界常，這些異常與機(jī)體免疫功 能界?；虬l(fā)生病理損傷有關(guān)。兇此，檢測(cè)患者細(xì)胞因子及其受體表達(dá)水平有助丁對(duì)臨床某些疾病的診斷、 治療和預(yù)后的判斷。另一方面，細(xì)胞因子

11、基因工程產(chǎn)品的問世，促進(jìn)了重組細(xì)胞因子的臨床應(yīng)用，這也要 求對(duì)患者體內(nèi)相應(yīng)細(xì)胞因子水平進(jìn)行判斷?？倆,檢測(cè)細(xì)胞因子及其受體具冇重要的應(yīng)用價(jià)值。由于細(xì)胞因子多以自分泌和旁分泌的方式發(fā)揮作用，很少進(jìn)入到血液循壞。因此對(duì)丁資白水平的檢測(cè) 來說，檢測(cè)局部體液屮細(xì)胞因子較測(cè)定血清或血漿屮細(xì)胞因子更具有實(shí)際意義。另一方面，山于細(xì)胞因子 網(wǎng)絡(luò)的特性，細(xì)胞因了之間是相互關(guān)聯(lián)的，故單獨(dú)檢測(cè)一種細(xì)胞因了及其受體并不能提供更多信息，常需 耍多種細(xì)胞因子的聯(lián)合檢測(cè)。2. 細(xì)胞因了生物學(xué)檢測(cè)法是根據(jù)某些細(xì)胞因子特定的生物學(xué)功能設(shè)訃的，因此該方法是測(cè)定細(xì)胞因 子生物活性水平的方袪。其原理是應(yīng)用一定的拆示系統(tǒng)（如細(xì)胞）與己

12、知活性的細(xì)胞因了標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)標(biāo) 木相互作用，最終以指示系統(tǒng)的變化（如細(xì)胞増殖、死亡或分泌蛋白等）來顯示細(xì)胞因了的功能，將待檢 標(biāo)木與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比較最終得知待檢標(biāo)木的細(xì)胞因子水平。生物學(xué)檢測(cè)方法測(cè)定的是細(xì)胞因子的生物學(xué)活性，能真實(shí)反映細(xì)胞因子在體內(nèi)發(fā)生作用的情況，并仕 具有較高的靈敏度，不需商品化試劑盒，成木低適介基礎(chǔ)研究工作。但是，山于不同細(xì)胞因子間的生物學(xué) 作用貝有重疊性，導(dǎo)致該方法的特異性不強(qiáng)。應(yīng)用依賴性較強(qiáng)的細(xì)胞株或使用中和性單克隆抗體封閉干擾 物質(zhì)的作用，可提高實(shí)驗(yàn)方法的特異性。此外，生物學(xué)方法操作繁瑣，需進(jìn)彳亍細(xì)胞培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)，影 響因索較多，重復(fù)性差。3. 根據(jù)指示系統(tǒng)的農(nóng)現(xiàn)不同，生物學(xué)檢測(cè)的方法可分為細(xì)胞增殖法、靶細(xì)胞殺傷或抑制法、細(xì)胞病 變抑制法、集落形成測(cè)定法、趨化作用測(cè)定法和誘導(dǎo)產(chǎn)物測(cè)定法等。細(xì)胞增殖法是域常用的細(xì)胞因子生物 學(xué)活性測(cè)定方法，可用-f il-2. 1l-6等多種白細(xì)胞介索的測(cè)定。靶細(xì)胞殺傷法用于腫瘤壞死因子的測(cè)定， 細(xì)胞病變抑制法用于干擾素測(cè)定，集落形成測(cè)定法用于集落刺激因子測(cè)定，趨化作用測(cè)定法川于趨化因子 測(cè)定。4. 免疫學(xué)檢測(cè)法是建立在抗原抗體反應(yīng)基礎(chǔ)上的免疫化學(xué)分析技術(shù)。細(xì)胞因子的化學(xué)本質(zhì)是哥白質(zhì) 或多肽，因此很容易制備相