雞馬立克病疫苗研究進(jìn)展

1、雞馬立克病疫苗研究進(jìn)展摘要：雞馬立克?。∕D）是雞的一種淋巴組織增生性疾病。該病的致病因子為馬立克病病毒（MDV），屬于皰疹病毒屬。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）已將MD歸為動(dòng)物B類傳染性疾病。Marek在1907首次報(bào)道MD，當(dāng)時(shí)主要發(fā)生在成年雞只，發(fā)病率和死亡率都很低。隨后報(bào)道中顯示該病表現(xiàn)出神經(jīng)性癥狀，具有傳染性。1922年，該病在美國(guó)大面積蔓延，從過去很低的死亡率上升到20，剖檢中發(fā)現(xiàn)內(nèi)臟組織中具有淋巴腫瘤。1950年末，呈現(xiàn)出大面積爆發(fā)，在低日齡雞群中最先發(fā)病，死亡率達(dá)到30或更高，伴有神經(jīng)損傷。1965年分離出區(qū)別于“基礎(chǔ)MD株(nMDV)”的“強(qiáng)MD株(vMDV)”，該毒株成為60年

2、代最嚴(yán)重的毒株形式。1970年隨著該病疫苗使用，首次得以控制。該病是第一個(gè)能用疫苗預(yù)防的腫瘤性疾病，因此受到了醫(yī)學(xué)界、獸醫(yī)學(xué)界、病毒學(xué)界的廣泛關(guān)注。到目前為止,還沒有有效的方法來(lái)治療MD患雞，仍通過疫苗預(yù)防控制該病的發(fā)生，所以對(duì) MD疫苗的研究一直是國(guó)內(nèi)外眾多學(xué)者研究的熱點(diǎn)。本文對(duì)馬立克病的疫苗進(jìn)展進(jìn)行了綜述。 關(guān)鍵詞：雞馬立克病毒；疫苗進(jìn)展一、MDV的基本生物學(xué)特性1 概述雞馬立克氏病(Marek's disease，MD)是由馬立克氏病毒(Marek's disease Virus，MDV)引起的一種淋巴組織增生性疾病。主要特征是周圍神經(jīng)、內(nèi)臟器官(性腺、肝、脾、肺、腎、腺

3、胃、腸道等)、虹膜、肌肉及皮膚內(nèi)發(fā)生淋巴樣細(xì)胞浸潤(rùn)，并發(fā)展成為淋巴瘤。MDV是一種細(xì)胞結(jié)合性病毒，分為三個(gè)血清型：型為致瘤的MDV；型為不致瘤的MDV；型為HVT。病毒核衣殼呈六角形，85100nm；帶囊膜的病毒子直徑為150160nm，羽囊上皮細(xì)胞中的帶囊膜病毒子大小為273400nm。MDV基因組為166184kb的線狀雙股DNA，是一種典型的皰疹病毒，以往歸于皰疹病毒亞科，近年來(lái)通過基因組排列和基因分析，MDV-、型的基因組酶切圖譜均已建立，基因組的結(jié)構(gòu)排列與簡(jiǎn)單皰疹病毒相同。在長(zhǎng)獨(dú)特區(qū)和短獨(dú)特區(qū)的兩側(cè)均有倒置重復(fù)序列，故將其歸于致瘤的皰疹病毒亞科。2 蛋白組分 MDV基因組中已得到鑒定

4、的編碼特異性多肽的基因有46個(gè)，可分為3大類，即致瘤相關(guān)基因：132-bpr、meq和pp38；糖蛋白基因：gB、gC、gE、gH、gI、gK、gL、gP82以及其他基因。在這些基因中，有3個(gè)基因即132-bpr、pp38、meq被認(rèn)為可能與致瘤相關(guān)。其中meq與132-bpr兩個(gè)基因是MDV-所特有，已證實(shí)132-bpr的拷貝數(shù)與毒株的致弱程度或在細(xì)胞上傳代的次數(shù)有關(guān)，pp38則被證實(shí)可抑制機(jī)體的免疫應(yīng)答。meq (Marek's EcoQ)在轉(zhuǎn)化細(xì)胞中表達(dá)，編碼含有339個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，其N末端為堿性區(qū)亮氨酸鏈(bZIP)結(jié)構(gòu)，C端富含脯氨酸重復(fù)，具有與腫瘤蛋白fosjun家族相

5、似的結(jié)構(gòu)。因此，被認(rèn)為是一種細(xì)胞核內(nèi)的致瘤基因及轉(zhuǎn)錄激活因子。MDV gB糖蛋白是MDV重要保護(hù)性抗原，是由3種分子量不同的糖蛋白(100ku、60 ku、49 ku)組成的復(fù)合物，是一種非分泌性抗原，僅存在于細(xì)胞表面和胞漿內(nèi)。用部分純化的B抗原免疫雞后，能誘導(dǎo)中和抗體的產(chǎn)生，抵抗強(qiáng)毒的攻擊。因而在新型基因工程疫苗研究中，不管是在痘病毒載體系統(tǒng)中還是在桿狀病毒載體系統(tǒng)中，都表達(dá)了該蛋白。丁巧玲等同將糖蛋白gB在重組雞痘病毒中進(jìn)行表達(dá)。雞痘病毒(PFV)是目前所知的最大的動(dòng)物病毒，基因組長(zhǎng)約300kb，對(duì)外源基因的容量很大。并且FPV不感染哺乳動(dòng)物，因而避免重組病毒水平傳播給人帶來(lái)危險(xiǎn)。3 MD

6、免疫特點(diǎn)MDV的致病機(jī)理是：MD的腫瘤細(xì)胞表面有T細(xì)胞標(biāo)志。在雞體內(nèi)MDV對(duì)淋巴細(xì)胞是流產(chǎn)性(abortive)非生產(chǎn)性感染，可使細(xì)胞轉(zhuǎn)化而發(fā)生T細(xì)胞性白血病或淋巴瘤。MDV只是在毛囊上皮細(xì)胞里呈生產(chǎn)性感染，產(chǎn)生大量的感染性病毒顆粒。這種MDV病毒注射給敏感的雞即可誘發(fā)Marek病。MDV是細(xì)胞結(jié)合性的，其與腫瘤細(xì)胞和除毛囊細(xì)胞以外的所有器官的組織細(xì)胞結(jié)合；只有毛囊細(xì)胞方可向環(huán)境中釋放成熟的感染性病毒粒子。正因?yàn)檫@樣使得該病能夠在空氣中水平傳播。不會(huì)或很少發(fā)生垂直傳播。非致病性火雞皰疹病毒在火雞中普遍存在，并在空氣中廣泛傳播。當(dāng)雞接種這種病毒后，即使后來(lái)感染MD病毒也不會(huì)發(fā)病?；痣u皰疹病毒疫苗

7、對(duì)雞來(lái)說(shuō)是一種異源疫苗，它對(duì)雞的保護(hù)，并不是真正的免疫，而是一種干擾現(xiàn)象，也就是說(shuō)該疫苗能夠防止發(fā)病(防治腫瘤的產(chǎn)生)但不能防止感染。當(dāng)1日齡雛雞在未感染強(qiáng)毒前接種HVT疫苗，就能誘發(fā)阻止腫瘤形成的抗體，從而阻止MD的發(fā)病與死亡。4 馬立克氏病發(fā)病特點(diǎn) 水平傳播是該病廣為散播的原因，因此在集約化雞場(chǎng)，該病流行更為嚴(yán)重，近年來(lái)馬立克氏病病毒的毒力呈現(xiàn)不斷增強(qiáng)的趨勢(shì)。至今，MDV已發(fā)牛3次毒力飄變:(1)20世紀(jì)50年代由溫和毒株產(chǎn)生強(qiáng)毒株；(2)70年代末由強(qiáng)毒株產(chǎn)生超強(qiáng)毒株;(3)90年代初由超強(qiáng)毒株產(chǎn)生超超強(qiáng)毒株。抗MDV免疫失敗在世界各地屢有發(fā)生，在我國(guó)也存在著類似情況，并有日趨嚴(yán)重之勢(shì)。

8、在MDV的3個(gè)血清型中，僅有血清型病毒(MDV-)可致腫瘤，血清型(MDV-)和血清型(MDV-)均無(wú)致瘤性而被用作疫苗來(lái)防治MD。Witter等提出根據(jù)病毒的致病性或致瘤性可將MDV-的眾多毒株分成如下4種致病型，即幾乎無(wú)致病性或致瘸性的溫和型(mMDV)、強(qiáng)毒型(vMDV)、超強(qiáng)毒型(wMDV)和超超強(qiáng)毒型(vv+MDV)。近年來(lái)世界各地越來(lái)越多的w MDV、特別是vv+MDV型毒株的出現(xiàn)，使得傳統(tǒng)的主要依賴疫苗接種來(lái)控制MD的措施受到嚴(yán)重挑戰(zhàn)。究其根源主要有以下幾方面的因素：隨著MD疫苗的廣泛使用，馬立克氏病病毒在雞群的免疫選擇性壓力下，出現(xiàn)了毒力更強(qiáng)的vv+MDV；藥物的濫用，例如有的

9、雞場(chǎng)在MD疫苗中添加抗生素，也是導(dǎo)致MD疫苗免疫失敗的原因之一；若在接種疫苗前感染上MDV或存在天然的母源抗體，免疫效果亦會(huì)受到影響：另外，由于獸醫(yī)衛(wèi)生措施與防疫制度的不盡合理，造成雞舍環(huán)境的MDV污染目趨嚴(yán)重。5 MD的免疫逃逸機(jī)制 雖然感染的雞對(duì)MD有體液免疫和細(xì)胞免疫2種作用，但疫苗對(duì)超超強(qiáng)毒(vv+MDV)的保護(hù)作用仍然有限。最近研究認(rèn)為，vv+MDV有它特殊的免疫逃逸機(jī)制：正常T淋巴細(xì)胞受vv+MDV攻擊后大量變?yōu)榘┳兗?xì)胞，導(dǎo)致淋巴細(xì)胞數(shù)量下降，因而細(xì)胞免疫作用減弱。w+MDV還可以使抑制性免疫細(xì)胞增加，這些細(xì)胞抑制了正常免疫細(xì)胞的數(shù)量和減弱了它們的作用，同時(shí)也抑制了其他免疫效應(yīng)因子

10、的產(chǎn)生。vv+MDV還會(huì)降低B淋巴細(xì)胞分泌抗體的功能，減弱體液免疫的作用。從而造成了機(jī)體免疫力下降，癌變細(xì)胞迅速增殖，很快形成多發(fā)性腫瘤，致患雞死亡。二、馬立克病疫苗研究進(jìn)展1 常規(guī)疫苗的類型 目前全世界使用的疫苗毒株有三種：第一種是人工致弱的1型 MDV，如荷蘭Rispens氏等的CVl988、美國(guó)Witter氏的MD11/75/R2，國(guó)內(nèi)哈爾濱獸醫(yī)研究所的K株(814)等；第二種是自然不致瘤的2型MDV，如美國(guó)的SB1、301B/1和國(guó)內(nèi)的Z4；第三種是3型MDV(HVT)，如全世界廣泛使用的FCl26。HVT與MDV有交叉免疫作用，對(duì)雞和火雞均不致瘤，用它免疫后能抵抗強(qiáng)毒MDV的致瘤作用

11、。FCl26是已知最好的HVT疫苗毒株，其他HVT毒株的免疫效果均比不上它，因此未獲實(shí)際應(yīng)用。11 血清型這類疫苗是用MDV通過細(xì)胞培養(yǎng)連續(xù)傳代而致弱的,疫苗所含病毒是細(xì)胞結(jié)合性的,只有保證細(xì)胞的完整性,疫苗才具有免疫原性。最早的型疫苗是英國(guó)的學(xué)者Churchill等研制出的HPRS-16/att疫苗，隨后荷蘭學(xué)者Rispens等將中等毒力的MDV株經(jīng)鴨胚成纖維細(xì)胞（DEF）傳代后獲得無(wú)毒株，并研制成的CVI988疫苗，廣泛應(yīng)用于荷蘭和其他國(guó)家?！?14”株是我國(guó)哈爾濱獸醫(yī)研究所于20世紀(jì)80年代研制的另一種疫苗，它可用代次廣，抗母源抗體，性能穩(wěn)定且安全。12 血清型該型系一類自然篩選的弱毒疫

12、苗，血清型MDV都是天然非致病性的，廣泛分布于雞群中，這種疫苗毒可通過接觸傳播，感染后第5周產(chǎn)生很強(qiáng)的免疫力。1988年江蘇農(nóng)學(xué)院的黃仕霞等分離出的型Z4弱毒株是國(guó)內(nèi)惟一的型MD疫苗株。這一血清型具有代表性的是SB-1株，制成細(xì)胞結(jié)合性疫苗，單獨(dú)使用就能產(chǎn)生廣泛的保護(hù)力，但對(duì)超強(qiáng)毒株抵抗力不太強(qiáng)，可與HVT疫苗合用，充分抵抗超強(qiáng)毒株。13 血清型 此類疫苗是火雞皰疹病毒(HVT)疫苗,其代表毒株Fc-126是由美國(guó)學(xué)者WritterRL博士從火雞群中分離出來(lái)的一株無(wú)毒力品系，對(duì)雞和火雞均不致病,在雞群內(nèi)不傳播；接種這種疫苗的雞體，細(xì)胞中的HVT能使機(jī)體產(chǎn)生抗體,但不能中和MDV。該疫苗具有干擾

13、作用，它先于MDV侵入雞體細(xì)胞,能誘發(fā)阻止腫瘤形成的抗體，防止腫瘤的形成和發(fā)展。這種疫苗廣泛應(yīng)用，可有效抵抗強(qiáng)毒。既有細(xì)胞結(jié)合性活疫苗，又有易于儲(chǔ)存、運(yùn)輸?shù)膬龈擅?，目前正在使用的疫苗有：HVTFc-126和PB-THV1C4。14 二價(jià)和三價(jià)（多價(jià)）苗自20世紀(jì)80年代開始，由于MDV毒力出現(xiàn)了超強(qiáng)毒，世界某些地區(qū)單價(jià)苗免疫失敗屢屢發(fā)生，因此有些學(xué)者提出多價(jià)苗戰(zhàn)略，先后研制出二價(jià)苗和三價(jià)苗。在美國(guó)主要使用型和型組成的疫苗，即SB-1或301B/12+HVTFc-126，西歐則使用型和型組成的疫苗CVI988+HVTFc-126；我國(guó)使用的二價(jià)苗有814+HVTFc-126、SB-1+HVTFc

14、-126及Z4+HVTFc-126。目前，我國(guó)使用的三價(jià)苗主要由814+SB-1+HVTFc-126組成。這些疫苗的使用雖能阻止發(fā)病，但并不能介導(dǎo)淋巴節(jié)萎縮，也不能阻止強(qiáng)毒的感染、復(fù)制和排毒；存在免疫間期；不能對(duì)所有的強(qiáng)毒株提供完全的保護(hù)；三價(jià)疫苗雖然比相應(yīng)的雙價(jià)疫苗保護(hù)率高，但由于生產(chǎn)成本高、工藝復(fù)雜，所以實(shí)際上并未獲推廣應(yīng)用；利用幾種血清型病毒協(xié)同保護(hù)作用，使MD造成的損失得以降低，但多價(jià)苗只能用液氮保存和運(yùn)輸，成本很高。2 新型疫苗為了解決現(xiàn)行MD疫苗存在的許多問題，人們希望通過分子生物學(xué)、遺傳工程方法獲得新的、更有效的疫苗。近年來(lái)，提出了疫苗的三個(gè)發(fā)展思路：1、通過基因缺失致弱腫瘤MD

15、V株；2、用活病毒載體表達(dá)在免疫上重要的MDV基因；3、核酸疫苗。21 基因缺失苗MDV某些基因的缺失，可使病毒的毒力降低，利用基因工程手段（插入、突變或缺失）失活強(qiáng)毒株的致病性基因使病毒致弱研制基因工程缺失疫苗。這些致病性基因與早期溶細(xì)胞感染或腫瘤形成有關(guān)，而它們的失活與缺失并不會(huì)影響病毒的復(fù)制與增殖。其中缺失Meq基因的毒株是最有前景的，最新的研究也表明：在用超強(qiáng)毒和特超強(qiáng)毒攻擊后，Meq基因缺失株能提供比CVI988更好的保護(hù)，這也是目前報(bào)道的保護(hù)效果最好的MDV候選疫苗株。雖然某些基因缺失可使病毒的毒力降低，但并不能使MDV致瘤性完全喪失，而且基因缺失的同時(shí)使病毒在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制的能力下降

16、，甚至達(dá)不到目前常規(guī)疫苗的保護(hù)水平，所以這種疫苗作為商品化應(yīng)用，還要做進(jìn)一步研究?；蛉笔б呙绲难芯亢烷_發(fā)從理論上講是很有發(fā)展前途的。但在MDV由于缺乏認(rèn)識(shí)哪一個(gè)基因與毒力或致瘤性有關(guān)以及技術(shù)上的困難阻止了它的發(fā)展。22 基因重組活載體疫苗目前，從國(guó)內(nèi)外的研究資料來(lái)看，利用基因重組工程研制MD疫苗成為一個(gè)熱點(diǎn)并取得一些重要進(jìn)展。1992年，Nazerian等用禽痘病毒(fowlpox Virus，F(xiàn)PV)為載體構(gòu)建了能表達(dá)MDV gB基因的重組體FPVgB。將重組體FPVgB接種至SPF雞群可使之獲得抗強(qiáng)毒株的攻擊，但對(duì)有母源抗體的商品雞保護(hù)力低。另外，利用桿狀病毒或HVT做載體獲取新型的MD

17、V疫苗也是一個(gè)研究熱點(diǎn)，并可能為抵抗更強(qiáng)的MDV毒株提供新的研究方向。23 核酸疫苗核酸疫苗也是將來(lái)MDV疫苗研制的一個(gè)重要方向。研究的原理是將編碼免疫原的基因插入合適的真核表達(dá)質(zhì)粒中，質(zhì)粒在細(xì)菌中復(fù)制，提取并純化質(zhì)粒后，再采用一定方法給動(dòng)物接種。當(dāng)質(zhì)粒在宿主細(xì)胞中表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物可激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答。李建偉等將含MDV gB基因的PIJcl9質(zhì)粒直接注射1日齡的雞體中，80的雞能抵抗強(qiáng)毒的攻擊。TischerBK等將血清I型MDV克隆到BAC20(細(xì)菌人工染色體)上免疫雞，發(fā)現(xiàn)DNA疫苗可以對(duì)雞產(chǎn)生保護(hù)作用，但其免疫保護(hù)力并不比傳統(tǒng)的疫苗高。核酸疫苗存在整合到宿主基因組引起宿主原癌基因活化和

18、腫瘤抑制基因失活的危險(xiǎn)，也存在刺激產(chǎn)生抗DNA 抗體和持續(xù)表達(dá)外源基因可產(chǎn)生的不良后果，同時(shí)肌肉注射產(chǎn)生免疫力需要大量抗原或使用基因槍，成本很高，因此對(duì)家禽疾病控制來(lái)說(shuō)，核酸疫苗的應(yīng)用還需要進(jìn)一步研究?？偨Y(jié)作為養(yǎng)禽業(yè)一種重要疾病，MD持久的威脅始終是預(yù)防獸醫(yī)學(xué)的一個(gè)研究焦點(diǎn)。在長(zhǎng)達(dá)50年的MD疫苗研究應(yīng)用中，取得了諸多成功，MD疫苗作為第一個(gè)應(yīng)用于抗腫瘤方面的疫苗，不僅有力地控制了疫病的發(fā)生，降低養(yǎng)禽業(yè)的損失，而且推動(dòng)了胚胎免疫技術(shù)的發(fā)展。但是在這個(gè)過程中，我們必須意識(shí)到簡(jiǎn)單的依靠疫苗控制疾病的發(fā)展，而未曾從根本上阻止病毒的感染和傳播，只能是一個(gè)暫時(shí)的解決方法，尤其疫苗的使用推動(dòng)了病

19、原毒力的不斷增強(qiáng)，更增加了疫苗研制的難度。因此在研發(fā)疫苗的進(jìn)展中，我們必須要重視病毒毒力的進(jìn)化態(tài)勢(shì)，通過采取更多有效手段，阻止病毒增強(qiáng)，正確把握疫苗的有限功效。參考文獻(xiàn)1. 高巍，秦愛建，金文杰等，中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，2010,32(12)2. Cui X;Lee L F;Reed W M Marek's disease virus encoded vIL8 gene is involved in early cytolytic infection but dispensable for establishment of latency ，2004(09)3. 張立杰，

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