純化水r2a培養(yǎng)基適用性驗證

1、編號： FAL-YZ-005.1R2A 培養(yǎng)基適用性驗證報告編制 /日期審核 /日期評審會簽姓名部門職務評審意見日期批準 /日期科技發(fā)展有限公司目錄序號內容頁號1目的32范圍33依據(jù)34職責權限35驗證方法35.2驗證內容和結果385.3驗證結論96附件10-12R2A培養(yǎng)基適用性驗證報告1.目的因2015版藥典純化水檢驗用培養(yǎng)基變更 , 依1105 非無菌產(chǎn)品 微生物限度檢查方法 , 通過此次實驗對所更換的 R2A瓊脂培養(yǎng)基進行適用性檢查，以證明該方法及所采用的培養(yǎng)基適用于純化水微生物限度檢查日常檢測。2.范圍適用于本公司純化水的微生物限度檢查。3依據(jù)中華人民共和國藥典（2015年版）4.

2、職責權限姓名部門分工職責組長：組織確認或驗證工作，批準方案和報告負責編制方案、實施、總結報告及微生物檢測負責設備樣品提供 ,配合實施方案的工作負責微生物檢測5. 驗證方法5.1R2A培養(yǎng)基的適用性檢查培養(yǎng)基應進行培養(yǎng)基的適用性檢查。菌種 試驗用菌株的傳代次數(shù)不得超過5 代, 試驗用菌種應采用適宜的菌種保藏技術進行保存，以保證試驗菌株的生物學特性。菌液制備銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的微生物培養(yǎng)基質控品, 使用前注入1.1ml 稀釋液充分溶解后 , 在漩渦混合器上振蕩混勻, 制成 1ml( 相當于 10第3頁共12頁100cfu/0.1ml)菌懸液。適用性檢查取銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌各1010

3、0cfu ，分別注入無菌平皿中，立即傾注 R2A瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2 個平皿，混勻，凝固，置 3035培養(yǎng)不少于 5天，計數(shù)；結果判定被檢定的固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值在 0.5 2范圍內，且菌落形態(tài)大小應與對照培養(yǎng)基上的菌落一致。判該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。實驗前的準備5.1.6.1儀器設備設備名稱設備編號設備 狀態(tài)壓力蒸汽滅菌器10-11-53未檢定 己檢定在有效期內激光塵埃粒子計數(shù)器Y09-3016未檢定 己檢定在有效期內溫濕度計JWS-A3未檢定 己檢定在有效期內微壓差表B10093624未檢定 己檢定在有效期內微壓差表B10090070未

4、檢定 己檢定在有效期內細菌培養(yǎng)箱SPX-100B-Z未檢定 己檢定在有效期內霉菌培養(yǎng)箱MLX-150-1未檢定 己檢定在有效期內確認人 :日期 :5.1.6.2操作環(huán)境微生物限度檢查應在環(huán)境潔凈度 10000級下的局部潔凈度 100 級的單向流空氣區(qū)域內進行。檢驗全過程必須嚴格遵守無菌操作，防止再污染。單向流空氣區(qū)域、工作臺面及環(huán)境應定期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法的現(xiàn)行國家標準進行潔凈度驗證。器具無菌培養(yǎng)皿：（直徑 90mm） 1ml 注射器第4頁共12頁5.2 計數(shù)方法的驗證當建立純化水微生物限度檢查法時，應進行細菌、霉菌及酵母菌計數(shù)方法的驗證，以確認所采用的方

5、法適合于該產(chǎn)品的細菌、霉菌及酵母菌數(shù)的測定。若產(chǎn)品的組分或原檢驗條件發(fā)生改變可能影響檢驗結果時，計數(shù)方法應重新驗證。驗證時，按供試液的制備和細菌、霉菌及酵母菌計數(shù)所規(guī)定的方法及下列要求進行。對各試驗菌的回收率應逐一進行驗證。菌種及菌液制備同計數(shù)培養(yǎng)基的適用性檢查驗證方法驗證試驗至少應進行 3 次獨立的平行試驗，并分別計算各試驗菌每次試驗的回收率。（1）試驗組薄膜過濾法計數(shù)時，取1ml純化水，過濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入10100cfu 試驗菌，過濾，濾膜置于R2A瓊脂培養(yǎng)基上。（ 2）菌液組 將相當于 10100cfu/ml 菌懸液置于 100ml PH7.0無菌氯化鈉 - 蛋白胨緩沖

6、液過濾 。（ 3）供試品對照組 取1ml純化水供試液置于 100ml PH7.0無菌氯化鈉 - 蛋白胨緩沖液，過濾 ，按菌落計數(shù)方法測定供試品本底菌數(shù)。結果判斷在3 次獨立的平行試驗中，試驗組菌落數(shù)減去供試品對照組菌落的值與菌液對照組菌落數(shù)的比值應在0.5 2范圍內。試驗樣品純化水稀釋液和試劑：PH7.0 無菌氯化鈉 - 蛋白胨緩沖液器具無菌培養(yǎng)皿：（直徑 90mm） 一次性注射器第5頁共12頁5.2.4.4驗證用微生物名稱及其編號菌株名稱編號銅綠假單胞菌CMCC(B) 10 104枯草芽孢桿菌CMCC（B）63 5015.2.4.5培養(yǎng)基名稱生產(chǎn)商培養(yǎng)基批號有效期瓊脂培養(yǎng)基 S（R2A瓊脂）

7、青島尼賽欣合生物技術有限公司2015100920181008驗證試驗操作試驗菌的制備和稀釋銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的微生物培養(yǎng)基質控品, 使用前注入 1.1ml 稀釋液充分溶解后 , 在漩渦混合器上振蕩混勻 , 制成 1ml( 相當于 10100cfu/0.1ml) 菌懸液 . 再用 PH7.0 無菌氯化鈉 - 蛋白胨緩沖液 將其稀釋制成 10100cfu/ml 的菌懸液。將試驗分為 3 組A 樣品試驗組取純化水 1ml，置于裝有 PH7.0 無菌氯化鈉 - 蛋白胨緩沖液100ml 的三角燒瓶中或均質袋中， 充分振搖 1 分鐘。每張濾膜抽濾 100ml 的供試液, 用 PH7.0 無菌氯化鈉

8、 - 蛋白胨緩沖液 100ml 沖洗濾膜 , 最后加入 10100cfu試驗菌 ,每株試驗菌平行制備2 個平皿 , 按膜過濾法測定其菌數(shù)。B 菌液組將 10-100cfu/ml菌懸液置于裝有100ml PH7.0 無菌氯化鈉 - 蛋白胨緩沖液的三角燒瓶中或均質袋中，充分振搖1 分鐘。每張濾膜抽濾100ml 的供試液通過一張濾膜 , 平行制備兩個 . 以測定所加的菌數(shù)。C供試品對照組取純化水 1ml，置于裝有 PH7.0 無菌氯化鈉 - 蛋白胨緩沖第6頁共12頁液 100ml 的三角燒瓶中或均質袋中，充分振搖1 分鐘。每張濾膜抽濾100ml 的供試液 , 用 PH7.0 無菌氯化鈉 - 蛋白胨緩

9、沖液 100ml 沖洗濾膜，平行制備2 個平皿, 按膜過濾法計數(shù)測定供試品的本底菌數(shù)。培養(yǎng)枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌在3035下培養(yǎng)不少于5 天，將點計菌落數(shù)。并將結果記錄于附件。第7頁共12頁試驗結果試驗組的菌的回收率菌落計數(shù)（ cfu/ 皿）回收接入菌種試驗組供試品對照組菌液組率銅綠假單胞菌平均值枯草芽孢桿菌平均值表中：回收率 =（試驗組的平均菌落數(shù)供試品對照組的平均菌落數(shù)的值）÷菌液組的平均菌落數(shù)× 100%。檢測人 :復核人 :復核日期 :第8頁共12頁5.3 驗證結論計數(shù)性培養(yǎng)基適用性檢查結論:試驗組菌落數(shù)減去供試品對照組菌落的值與菌液對照組菌落數(shù)的比值應在0.5

10、 2范圍內，且菌落形態(tài)大小應與對照培養(yǎng)基上的菌落一致。判定R2A瓊脂培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。可用于本公司純化水微生物限度檢查實驗。校正因子 ( 修正系數(shù) )校正因子 =1/ 回收率第9頁共12頁批號 :產(chǎn)品試驗組的微生物生長檢查記錄：菌種名稱產(chǎn)品試驗組計數(shù)結果（ cfu/皿）平均值銅綠假單胞菌枯草芽孢桿菌菌液組的微生物生長檢查記錄菌種名稱菌液組計數(shù)結果（ cfu/ 皿）平均值銅綠假單胞菌枯草芽孢桿菌供試品對照組的微生物生長檢查記錄供試品供試品對照組計數(shù)結果（cfu/皿）平均值12測試人 /測試日期：復核人 /復核日期：第10頁共12頁批號 :產(chǎn)品試驗組的微生物生長檢查記錄：菌種名稱產(chǎn)品試驗組計數(shù)結果（ cfu/皿）平均值銅綠假單胞菌枯草芽孢桿菌菌液組的微生物生長檢查記錄菌種名稱菌液組計數(shù)結果（ cfu/ 皿）平均值銅綠假單胞菌枯草芽孢桿菌供試品對照組的微生物生長檢查記錄供試品供試品對照組計數(shù)結果（cfu/皿）平均值12測試人 /測試日期：復核人 /復核日期：第11頁共12頁批號 :產(chǎn)品試驗