細菌培養(yǎng)技術

1、細菌培養(yǎng)技術細菌培養(yǎng)技術南華大學預防醫(yī)學與放射衛(wèi)生實驗教學中心南華大學預防醫(yī)學與放射衛(wèi)生實驗教學中心n教學對象：高等醫(yī)學院校衛(wèi)生檢驗專業(yè)學生教學對象：高等醫(yī)學院校衛(wèi)生檢驗專業(yè)學生n實驗課時：實驗課時：4 4學時學時n課程類型：專業(yè)實驗課課程類型：專業(yè)實驗課n課程要求：必修課程要求：必修n每組人數：每組人數：2 2人人實驗目的和要求實驗目的和要求n掌握細菌的培養(yǎng)方法。n掌握平板劃線法、斜面、液體和半固體培養(yǎng)基等各種接種方法。n熟悉接種工具、接種環(huán)境要求和無菌操作要領。n學會觀察平板、斜面、液體、半固體培養(yǎng)基中細菌的生長現(xiàn)象。實驗內容實驗內容n常用細菌培養(yǎng)方法。n細菌的分離培養(yǎng)和接種技術。n細菌生

2、長現(xiàn)象觀察。 一、常用細菌培養(yǎng)方法一、常用細菌培養(yǎng)方法n需氧培養(yǎng)法（一般培養(yǎng)）n適用于需氧菌和兼性厭氧菌培養(yǎng)。n培養(yǎng)溫度：37（采用恒溫培養(yǎng)箱）。n培養(yǎng)時間：1824h。n二氧化碳培養(yǎng)法n適用于奈瑟菌屬和布魯菌屬等苛養(yǎng)菌培養(yǎng)。n可采用燭缸法、二氧化碳培養(yǎng)箱。一、常用細菌培養(yǎng)方法一、常用細菌培養(yǎng)方法n微需氧培養(yǎng)法n適用于空腸彎曲菌、幽門螺桿菌等微需氧菌培養(yǎng)。n可采用抽氣換氣法。n厭氧培養(yǎng)法n適用于專性厭氧菌培養(yǎng)。n厭氧培養(yǎng)箱、厭氧袋、厭氧罐、皰肉培養(yǎng)法、硫乙醇酸鹽法等。二、細菌的分離培養(yǎng)和接種技術二、細菌的分離培養(yǎng)和接種技術(一)接種工具n接種針和接種環(huán)：由三部分組組成，即環(huán)（針）、金屬柄和絕緣

3、柄。接種前后都要過火滅菌。接種針用于穿刺接種細菌，接種環(huán)用于固體、液體培養(yǎng)基的細菌接種。nl型玻璃棒：用于瓊脂平板涂布接種細菌。（二）接種環(huán)境（二）接種環(huán)境n操作需在接種罩、超凈工作臺或無菌室內進行。（三）細菌接種的基本程序（三）細菌接種的基本程序滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)沾取標本沾取標本接種接種滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)殺滅接種環(huán)沾染的細菌，以免污染標本殺滅接種環(huán)沾染的細菌，以免污染標本殺滅接種環(huán)沾染的細菌，以免污染環(huán)境殺滅接種環(huán)沾染的細菌，以免污染環(huán)境細菌接種的基本程序細菌接種的基本程序取菌種試管和待取菌種試管和待接種的斜面試管接種的斜面試管滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)沾取標本沾取標本接種接種接種后滅菌接種環(huán)

4、接種后滅菌接種環(huán)（四）接種方法（四）接種方法1.平板劃線接種法：n目的：使混合的細菌呈單個分散生長，形成單個菌落，以便獲得純菌。n方法：n分區(qū)劃線法：適用于含菌量較多的標本。n連續(xù)劃線法：適用于含菌量較少的標本。分區(qū)劃線法分區(qū)劃線法第一區(qū)劃線第一區(qū)劃線滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)第二區(qū)劃線第二區(qū)劃線滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)第三區(qū)劃線第三區(qū)劃線滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)連續(xù)劃線法連續(xù)劃線法（四）接種方法（四）接種方法2.液體培養(yǎng)基接種法n可觀察細菌在培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象或用作生化反應實驗。 （四）接種方法（四）接種方法3.半固體培養(yǎng)基接種法：n穿刺接種法 ，用于保存菌種或觀察細菌動力。11（四）接種方法（四）接種方

5、法4.斜面接種法：n用于鑒定和保存菌種。 （四）接種方法（四）接種方法5.涂布接種法：n用于測定標本中活菌數和藥敏實驗細菌接種。 （四）接種方法（四）接種方法6.傾注培養(yǎng)法：用于細菌計數。n將上述已接種細菌的培養(yǎng)基置37恒溫培養(yǎng)箱中孵育1824h，觀察細菌的生長現(xiàn)象。三、細菌在培養(yǎng)基上的生長現(xiàn)象三、細菌在培養(yǎng)基上的生長現(xiàn)象1、細菌在、細菌在固體固體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象n菌落n定義：指單個細菌在平板培養(yǎng)基上生長繁殖，形成單一肉眼可見的細菌集團。n菌落特征：大小、形狀、邊緣、顏色、表面、透明度、濕潤度、黏度、溶血性。n菌苔：指多個菌落融合在一起形成的細菌堆積物。菌落與菌苔菌落與菌苔菌落菌落菌苔菌苔2、細菌在、細菌在液體液體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象n混濁n沉淀：多見于鏈狀排列的細菌。n菌膜：多見于厭氧菌。細菌在液體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象細菌在液體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象菌膜菌膜菌沉淀菌沉淀均勻渾濁均勻渾濁對照對照3、細菌在、細菌在半固體半固體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象象n有鞭毛細菌：n在培養(yǎng)基中沿穿刺線并向外擴