蛋白質(zhì)的性質(zhì)試驗二

1、蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗（二）蛋白質(zhì)的等電點測定和沉淀反應(yīng)一、蛋白質(zhì)等電點的測定1目的（1）了解蛋白質(zhì)的兩性解離性質(zhì)。（2）學(xué)習(xí)測定蛋白質(zhì)等電點的一種方法。2原理蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)。在蛋白質(zhì)溶液中存在下列平衡：蛋白質(zhì)分子的解離狀態(tài)和解離程度受溶液的酸堿度影響。當(dāng)溶液的pH達(dá)到一定數(shù)值時，蛋白質(zhì)顆粒上正負(fù)電荷的數(shù)目相等， 在電場中，蛋白質(zhì)既不向陰極移動， 也不向陽極移動，此時溶液的pH值稱為此種蛋白質(zhì)的等電點。不同蛋白質(zhì)各有其 特異的等電點。在等電點時，蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)都有變化，可利用此種性質(zhì)的變化 測定各種蛋白質(zhì)的等電點。最常用的方法是測其溶解度最低時的溶液pH值。本實驗借觀察在不同pH溶液中的溶解度

2、以測定酪蛋白的等電點。用醋酸與醋 酸鈉（醋酸鈉混合在酪蛋白溶液中）配制成各種不同pH值的緩沖液。向諸緩沖溶液中加入酪蛋白后，沉淀出現(xiàn)最多的緩沖液的 pH值即為酪蛋白的等電點。3器材4試劑1） 0.4酪蛋白醋酸鈉溶液 200mL取 0.4g 酪蛋白，加少量水在乳缽中仔細(xì)地研磨，將所得的蛋白質(zhì)懸膠液移入200 mL錐形瓶內(nèi)，用少量4050 C的 溫水洗滌乳缽，將洗滌液也移入錐形瓶內(nèi)。 加入10 mLlmol/L醋酸鈉溶液。把錐形瓶放到50°C水浴中，并小心地旋轉(zhuǎn)錐形瓶, 直到酪蛋白完全溶解為止。將錐形瓶內(nèi)的溶液全部移至 100 mL 容量瓶內(nèi)，加水至 刻度，塞緊玻塞，混勻。5操作1）取同

3、樣規(guī)格的試管 4支，按下表順序分別精確地加入各試劑，然后混勻(2)向以上試管中各加酪蛋白的醋酸鈉溶液 1mL加一管，搖勻一管。此時1、2、3、4管的pH依次為5.9、5.3、4.7、3.5。觀察其混濁度。靜置10分鐘后，再 觀察其混濁度。最混濁的一管的pH即為酪蛋白的等電點。、蛋白質(zhì)的沉淀及變性1 目的(1) 加深對蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定因素的認(rèn)識。(2) 了解沉淀蛋白質(zhì)的幾種方法及其實用意義。(3) 了解蛋白質(zhì)變性與沉淀的關(guān)系。2原理在水溶液中的蛋白質(zhì)分子由于表面生成水化層和雙電層而成為穩(wěn)定的親水膠 體顆粒，在一定的理化因素影響下，蛋白質(zhì)顆?？梢蚴ル姾珊兔撍恋怼５鞍踪|(zhì)的沉淀反應(yīng)可分為兩類。

4、(1) 可逆的沉淀反應(yīng) 此時蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)尚未發(fā)生顯著變化，除去引起沉 淀的因素后， 蛋白質(zhì)的沉淀仍能溶解于原來的溶劑中， 并保持其天然性質(zhì)而不變性。 如大多數(shù)蛋白質(zhì)的鹽析作用或在低溫下用乙醇(或丙酮)短時間作用于蛋白質(zhì)。提 純蛋白質(zhì)時，常利用此類反應(yīng)。(2) 不可逆沉淀反應(yīng) 此時蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生重大改變，蛋白質(zhì)常變性 而沉淀，不再溶于原來溶劑中。加熱引起的蛋白質(zhì)沉淀與凝固，蛋白質(zhì)與重金屬離 子或某些有機酸的反應(yīng)都屬于此類。蛋白質(zhì)變性后， 有時由于維持溶液穩(wěn)定的條件仍然存在 (如電荷) ，并不析出 因此變性蛋白質(zhì)并不一定都表現(xiàn)為沉淀，而沉淀的蛋白質(zhì)也未必都已變性。3試劑與材料（1）蛋白

5、質(zhì)溶液 500mL5%卵清蛋白溶液或雞蛋清的水溶液（新鮮雞蛋清：水 =1 : 9）4操作（1）蛋白質(zhì)的鹽析 無機鹽（硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等）的濃溶液能析出蛋 白質(zhì)。鹽的濃度不同，析出的蛋白質(zhì)也不同。如球蛋白可在半飽和硫酸銨溶液中析出，而清蛋白則在飽和硫酸銨溶液中才能 析出。由鹽析獲得的蛋白質(zhì)沉淀，當(dāng)降低其鹽類濃度時，又能再溶解，故蛋白質(zhì)的鹽 析作用是可逆過程。加5%卵清蛋白溶液5 mL于試管中，再加等量的飽和硫酸銨溶液，混勻后靜置 數(shù)分鐘則析出球蛋白的沉淀。倒出少量混濁沉淀，加少量水，觀察是否溶解，為什 么？將管內(nèi)容物過濾，向濾液中添加硫酸銨粉末到不再溶解為止，此時析出的沉淀 為清蛋白。取出

6、部分清蛋白，加少量蒸餾水，觀察沉淀的再溶解。（2）重金屬離子沉淀蛋白質(zhì) 重金屬離子與蛋白質(zhì)結(jié)合成不溶于水的復(fù)合物。取1支試管，加入蛋白質(zhì)溶液2 mL,再加3%硝酸銀溶液12滴，振蕩試管, 有沉淀產(chǎn)生。放置片刻，傾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？為 什么？（3）某些有機酸沉淀蛋白質(zhì) 取1支試管，加入蛋白質(zhì)溶液2 mL，再加入1mL 5%三氯乙酸溶液，振蕩試管，觀察沉淀的生成。放置片刻，傾出上清液，向沉淀 中加入少量水，觀察沉淀是否溶解。（4）有機溶劑沉淀蛋白質(zhì) 取1支試管，加入2 mL蛋白質(zhì)溶液，再加入2 mL95% 乙醇?；靹?，觀察沉淀的生成。5）乙醇引起的變性與沉淀 取3支試管，編號。依下 表順序加入試劑：振搖混勻后，觀察各管有何變化。放置片刻，向各管內(nèi)加水8 mL然后在第2、 3號管中各加一滴甲基紅，再分別用 O.lmol /L醋酸溶液及0.05 mol / L碳酸鈉溶 液中和之。觀察各管顏色的變化和沉淀的生成。 每管再加O.lmol /L鹽酸溶液數(shù)滴， 觀察沉淀的再溶解。解釋各管發(fā)生的全部現(xiàn)象。思考題 何謂蛋白質(zhì)的等電點和沉淀反應(yīng)？有何實用意義？ 實驗