土壤中分解尿素尿素的細菌的分離與計數(shù)ppt課件

1、微生物的培育與運用微生物的培育與運用一、課標題的一、課標題的 研討培育基對微生物的選擇作用，研討培育基對微生物的選擇作用，進展微生物數(shù)量的測定。進展微生物數(shù)量的測定。 二、課題重點與難點二、課題重點與難點 重點：重點： 對土樣的選取和選擇培育基的配制。對土樣的選取和選擇培育基的配制。難點：難點： 對分解尿素的細菌的計數(shù)。對分解尿素的細菌的計數(shù)。三、研討思緒三、研討思緒 微生物的選擇培育，是指利用培微生物的選擇培育，是指利用培育基的組成使適宜生長的特定微生育基的組成使適宜生長的特定微生物得到較快繁衍的技術(shù)，也稱為微物得到較快繁衍的技術(shù)，也稱為微生物的生物的“選擇培育。選擇培育。 一挑選菌株一挑選

2、菌株 在本課題提供的選擇培育基的配方中，在本課題提供的選擇培育基的配方中，尿素是培育基中的獨一氮源，因此，原那尿素是培育基中的獨一氮源，因此，原那么上只需可以利用尿素的微生物才可以生么上只需可以利用尿素的微生物才可以生長。但實踐上，微生物的培育是一個非常長。但實踐上，微生物的培育是一個非常復(fù)雜的問題，有些微生物可以利用其他微復(fù)雜的問題，有些微生物可以利用其他微生物的代謝產(chǎn)物生長繁衍，因此可以在選生物的代謝產(chǎn)物生長繁衍，因此可以在選擇培育基上生長的微生物不一定是所需求擇培育基上生長的微生物不一定是所需求的微生物，還需求進一步的驗證。的微生物，還需求進一步的驗證。二統(tǒng)計菌落數(shù)目二統(tǒng)計菌落數(shù)目 統(tǒng)計

3、菌落數(shù)目的實際根據(jù)是：統(tǒng)計菌落數(shù)目的實際根據(jù)是：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培育基外表生當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培育基外表生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。因此，恰當(dāng)?shù)南♂尪仁莿倮亟y(tǒng)計菌落數(shù)菌。因此，恰當(dāng)?shù)南♂尪仁莿倮亟y(tǒng)計菌落數(shù)目的關(guān)鍵。為了保證結(jié)果準確，通常將幾個稀目的關(guān)鍵。為了保證結(jié)果準確，通常將幾個稀釋度下的菌液都涂布在平板上，培育后再選擇釋度下的菌液都涂布在平板上，培育后再選擇菌落數(shù)在菌落數(shù)在30300的平板進展計數(shù)。的平板進展計數(shù)。 1. 1.想一想，如何從平板上的菌落數(shù)推測出想一想，如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)？每

4、克樣品中的菌落數(shù)？答：統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，答：統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計最好能統(tǒng)計3 3個平板，計算出平板菌落數(shù)的平個平板，計算出平板菌落數(shù)的平均值，然后按課本旁欄的公式進展計算。均值，然后按課本旁欄的公式進展計算。A A同窗的結(jié)果與其他同窗不同，能夠同窗的結(jié)果與其他同窗不同，能夠的解釋有兩種。的解釋有兩種。一是由于土樣不同；一是由于土樣不同；二是由于培育基污染或操作失誤。二是由于培育基污染或操作失誤。 三設(shè)置對照三設(shè)置對照終究是哪個緣由，可以經(jīng)過實驗來證明。終究是哪個緣由，可以經(jīng)過實驗來證明。另一種方案：另一種方案：將將A A同窗配制的培育基在不加土樣的情況同窗配

5、制的培育基在不加土樣的情況下進展培育，作為空白對照，以證明培育基能下進展培育，作為空白對照，以證明培育基能否遭到污染。經(jīng)過這個事例可以看出，實驗結(jié)否遭到污染。經(jīng)過這個事例可以看出，實驗結(jié)果要有壓服力，對照的設(shè)置是必不可少的。果要有壓服力，對照的設(shè)置是必不可少的。實驗方案有兩種實驗方案有兩種一種方案：一種方案：可以由其他同窗用與可以由其他同窗用與A A同窗一樣的土樣同窗一樣的土樣進展實驗，假設(shè)結(jié)果與進展實驗，假設(shè)結(jié)果與A A同窗一致，那么證同窗一致，那么證明明A A無誤；假設(shè)結(jié)果不同，那么證明無誤；假設(shè)結(jié)果不同，那么證明A A同窗存同窗存在操作失誤或培育基的配制有問題。在操作失誤或培育基的配制有

6、問題。四、實驗案例四、實驗案例 實驗的詳細操作步驟如下實驗的詳細操作步驟如下: : 1. 1.土壤取樣土壤取樣 從肥沃、潮濕的土壤中取樣。先鏟去從肥沃、潮濕的土壤中取樣。先鏟去表層土表層土3 cm3 cm左右，再取樣，將樣品裝入事左右，再取樣，將樣品裝入事先預(yù)備好的信封中。先預(yù)備好的信封中。土壤中某樣品細菌的分別與計數(shù)土壤中某樣品細菌的分別與計數(shù) 預(yù)備牛肉膏蛋白胨培育基和選擇培育基將菌預(yù)備牛肉膏蛋白胨培育基和選擇培育基將菌液稀釋一樣的倍數(shù)，在牛肉膏蛋白胨培育基上生液稀釋一樣的倍數(shù)，在牛肉膏蛋白胨培育基上生長的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培育基上的數(shù)目，長的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培育基上的數(shù)目，因此，

7、牛肉膏蛋白胨培育基可以作為對照，用來因此，牛肉膏蛋白胨培育基可以作為對照，用來判別選擇培育基能否起到了選擇作用。由于初次判別選擇培育基能否起到了選擇作用。由于初次實驗，對于稀釋的范圍沒有把握，因此選擇了一實驗，對于稀釋的范圍沒有把握，因此選擇了一個較為廣泛的范圍：稀釋倍數(shù)為個較為廣泛的范圍：稀釋倍數(shù)為103103107107。每個。每個稀釋度下需求稀釋度下需求3 3個選擇培育基，個選擇培育基，1 1個牛肉膏蛋白胨個牛肉膏蛋白胨培育基，因此共需求培育基，因此共需求1515個選擇培育基，個選擇培育基，5 5個牛肉個牛肉膏蛋白胨培育基。此外，還需求預(yù)備膏蛋白胨培育基。此外，還需求預(yù)備8 8個滅菌的試

8、個滅菌的試管和管和1 1個滅菌的移液管。個滅菌的移液管。 2. 2.制備培育基制備培育基 將將10 g10 g土樣參與盛有土樣參與盛有90 mL90 mL無菌生理鹽水的無菌生理鹽水的錐形瓶中錐形瓶體積為錐形瓶中錐形瓶體積為250 mL250 mL，充分搖勻，充分搖勻，汲取上清液汲取上清液1 mL1 mL，轉(zhuǎn)移至盛有，轉(zhuǎn)移至盛有9 mL9 mL的生理鹽水的生理鹽水的無菌大試管中，依次等比稀釋至的無菌大試管中，依次等比稀釋至107107稀釋度，并稀釋度，并按照由按照由107107103103稀釋度的順序分別汲取稀釋度的順序分別汲取0.1 mL0.1 mL進展平板涂布操作。按照濃度從低到高的順序涂進

9、展平板涂布操作。按照濃度從低到高的順序涂布平板，不用改換移液管。布平板，不用改換移液管。 3. 3.微生物的培育與察看微生物的培育與察看 將涂布好的培育皿放在將涂布好的培育皿放在30 30 溫度下培育。溫度下培育。隨著培育時間的延伸，會有不同的菌落產(chǎn)生。隨著培育時間的延伸，會有不同的菌落產(chǎn)生。 比較牛肉膏培育基和選擇培育基中菌落比較牛肉膏培育基和選擇培育基中菌落的數(shù)量、形狀等，并做好記錄。的數(shù)量、形狀等，并做好記錄。 挑選選擇培育基中不同形狀的菌落接入挑選選擇培育基中不同形狀的菌落接入含酚紅培育基的斜面中，察看能否產(chǎn)生如課本含酚紅培育基的斜面中，察看能否產(chǎn)生如課本中圖中圖2-102-10的顏色

10、反響。的顏色反響。為什么分別不同的微生物要采用不同的為什么分別不同的微生物要采用不同的稀釋度？測定土壤中細菌的總量和測定土壤中稀釋度？測定土壤中細菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍一能分解尿素的細菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍一樣嗎？樣嗎？ 答：這是由于土壤中各類微生物的數(shù)量單答：這是由于土壤中各類微生物的數(shù)量單位：株位：株/kg/kg是不同的，例如在干旱土壤中的上是不同的，例如在干旱土壤中的上層樣本中：好氧及兼性厭氧細菌數(shù)約為層樣本中：好氧及兼性厭氧細菌數(shù)約為2 1852 185萬，萬，放線菌數(shù)約為放線菌數(shù)約為477477萬，霉菌數(shù)約為萬，霉菌數(shù)約為23.123.1萬。因此

11、，萬。因此，為獲得不同類型的微生物，就需求按不同的稀釋為獲得不同類型的微生物，就需求按不同的稀釋度進展分別，同時還該當(dāng)有針對性地提供選擇培度進展分別，同時還該當(dāng)有針對性地提供選擇培育的條件。育的條件。 4. 4.細菌的計數(shù)細菌的計數(shù) 當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時，選取菌落數(shù)當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時，選取菌落數(shù)在在3030300300的平板進展計數(shù)。在同一的平板進展計數(shù)。在同一稀釋度下，至少對稀釋度下，至少對3 3個平板進展反復(fù)計個平板進展反復(fù)計數(shù)，然后求出平均值，并根據(jù)平板所數(shù)，然后求出平均值，并根據(jù)平板所對應(yīng)的稀釋度計算出樣品中細菌的數(shù)對應(yīng)的稀釋度計算出樣品中細菌的數(shù)目。目。 關(guān)注菌落的形狀、大小、邊緣、突起、

12、顏色、質(zhì)關(guān)注菌落的形狀、大小、邊緣、突起、顏色、質(zhì)地等等，都是區(qū)分細菌的重要手段。地等等，都是區(qū)分細菌的重要手段。 關(guān)注菌落的形狀、大小、邊緣、突起、顏色、質(zhì)關(guān)注菌落的形狀、大小、邊緣、突起、顏色、質(zhì)地等等，都是區(qū)分細菌的重要手段。地等等，都是區(qū)分細菌的重要手段。 關(guān)注菌落的形狀、大小、邊緣、突起、顏色、質(zhì)關(guān)注菌落的形狀、大小、邊緣、突起、顏色、質(zhì)地等等，都是區(qū)分細菌的重要手段。地等等，都是區(qū)分細菌的重要手段。 關(guān)注菌落的形狀、大小、邊緣、突起、顏色、質(zhì)關(guān)注菌落的形狀、大小、邊緣、突起、顏色、質(zhì)地等等，都是區(qū)分細菌的重要手段。地等等，都是區(qū)分細菌的重要手段。 關(guān)注菌落的形狀、大小、邊緣、突起、

13、顏色、質(zhì)關(guān)注菌落的形狀、大小、邊緣、突起、顏色、質(zhì)地等等，都是區(qū)分細菌的重要手段。地等等，都是區(qū)分細菌的重要手段。 六、課題成果與評價六、課題成果與評價 一培育物中能否有雜菌污染以一培育物中能否有雜菌污染以及選擇培育基能否挑選出菌落及選擇培育基能否挑選出菌落 對照的培育皿在培育過程中沒有菌對照的培育皿在培育過程中沒有菌落生長，闡明培育基沒有被雜菌污染。落生長，闡明培育基沒有被雜菌污染。牛肉膏培育基的菌落數(shù)目明顯大于選擇牛肉膏培育基的菌落數(shù)目明顯大于選擇培育基的數(shù)目，闡明選擇培育基已挑選培育基的數(shù)目，闡明選擇培育基已挑選出一些菌落。出一些菌落。伊紅伊紅美藍培育基是鑒別培育基，可以用來美藍培育基是

14、鑒別培育基，可以用來檢測自來水中的大腸桿菌能否超標，由于的代謝檢測自來水中的大腸桿菌能否超標，由于的代謝產(chǎn)物與伊紅產(chǎn)物與伊紅美藍結(jié)合，使菌落呈深紫色并帶有美藍結(jié)合，使菌落呈深紫色并帶有金屬光澤，使大腸桿菌的菌落顯示出來，并沒有金屬光澤，使大腸桿菌的菌落顯示出來，并沒有促進大腸桿菌的生長和抑制其他微生物的生長。促進大腸桿菌的生長和抑制其他微生物的生長。例如：鑒別大腸桿菌培育基例如：鑒別大腸桿菌培育基大腸桿菌呈大腸桿菌呈 黑色中心黑色中心 , ,有或無金屬光澤有或無金屬光澤大腸桿菌在伊紅美藍瓊脂大腸桿菌在伊紅美藍瓊脂(EMB)(EMB)上典型特征上典型特征 假設(shè)學(xué)生選取的是同一種土樣，統(tǒng)計的結(jié)假設(shè)

15、學(xué)生選取的是同一種土樣，統(tǒng)計的結(jié)果應(yīng)該接近。假設(shè)結(jié)果相差太遠，需求進一步果應(yīng)該接近。假設(shè)結(jié)果相差太遠，需求進一步分析產(chǎn)生差別的緣由。分析產(chǎn)生差別的緣由。二樣品的稀釋操作能否勝利二樣品的稀釋操作能否勝利 假設(shè)得到了假設(shè)得到了2 2個或個或2 2個以上菌落數(shù)目在個以上菌落數(shù)目在3030300300的平板，那么闡明稀釋操作比較勝利，并可的平板，那么闡明稀釋操作比較勝利，并可以進展菌落的計數(shù)。以進展菌落的計數(shù)。 三反復(fù)組的結(jié)果能否一致三反復(fù)組的結(jié)果能否一致本課題知識小結(jié)本課題知識小結(jié): :七、例題解析七、例題解析 例例1 1對細菌群體生長規(guī)律測定的正確的表述是對細菌群體生長規(guī)律測定的正確的表述是A A

16、在液體培育基上進展在液體培育基上進展 B B至少接種一種細菌至少接種一種細菌 C C接種一個細菌接種一個細菌 D D及時補充耗費的營養(yǎng)物及時補充耗費的營養(yǎng)物質(zhì)質(zhì) 解析：細菌群體生長規(guī)律的測定是人們在一定條件下進展的。解析：細菌群體生長規(guī)律的測定是人們在一定條件下進展的。這些條件是：一種細菌、恒定容積的培育基，液體培育基、定這些條件是：一種細菌、恒定容積的培育基，液體培育基、定時測定細菌總數(shù)。在這些條件下，才干測定出細菌的生長規(guī)律。時測定細菌總數(shù)。在這些條件下，才干測定出細菌的生長規(guī)律。測定時只能用一種細菌的子細胞群體的變化規(guī)律表達微生物的測定時只能用一種細菌的子細胞群體的變化規(guī)律表達微生物的生

17、長；恒定容積是給微生物提供一定的生存環(huán)境；液體培育基生長；恒定容積是給微生物提供一定的生存環(huán)境；液體培育基才干經(jīng)過樣品推測細菌總數(shù)。假設(shè)接種多種細菌，那么會發(fā)生才干經(jīng)過樣品推測細菌總數(shù)。假設(shè)接種多種細菌，那么會發(fā)生種間斗爭而不能測定一種微生物的生長規(guī)律。在接種時，要保種間斗爭而不能測定一種微生物的生長規(guī)律。在接種時，要保證一定的接種量。證一定的接種量。答案：答案：A A例例2 2在微生物群體生長規(guī)律的測定中，在微生物群體生長規(guī)律的測定中，種內(nèi)斗爭最顯著最猛烈的時期是種內(nèi)斗爭最顯著最猛烈的時期是A A調(diào)整期調(diào)整期 B B對數(shù)期對數(shù)期 C C穩(wěn)定期穩(wěn)定期 D D衰亡期衰亡期解析：種內(nèi)斗爭是一種生態(tài)

18、要素。種內(nèi)斗爭反響了種內(nèi)生解析：種內(nèi)斗爭是一種生態(tài)要素。種內(nèi)斗爭反響了種內(nèi)生物對生存空間和生活資源的爭奪。在生活空間富余，營養(yǎng)充足物對生存空間和生活資源的爭奪。在生活空間富余，營養(yǎng)充足的時候，種內(nèi)斗爭的程度是比較低的。隨著微生物個體數(shù)目的的時候，種內(nèi)斗爭的程度是比較低的。隨著微生物個體數(shù)目的添加，每個個體的生存空間越來越少，營養(yǎng)物質(zhì)也越來越少，添加，每個個體的生存空間越來越少，營養(yǎng)物質(zhì)也越來越少，每個個體對生存空間和資源的爭奪也越來越猛烈，種內(nèi)斗爭就每個個體對生存空間和資源的爭奪也越來越猛烈，種內(nèi)斗爭就越來越猛烈。由此可知，在穩(wěn)定期的種內(nèi)斗爭最猛烈。在衰亡越來越猛烈。由此可知，在穩(wěn)定期的種內(nèi)斗

19、爭最猛烈。在衰亡期，微生物的數(shù)目曾經(jīng)開場減少，期，微生物的數(shù)目曾經(jīng)開場減少，pHpH曾經(jīng)極度不適于微生物的曾經(jīng)極度不適于微生物的生存，次級代謝產(chǎn)物積累到很高的程度，這時的微生物的生存生存，次級代謝產(chǎn)物積累到很高的程度，這時的微生物的生存斗爭主要是與無機環(huán)境的斗爭。斗爭主要是與無機環(huán)境的斗爭。答案：答案：C C例例3 320052005年江蘇抗生素作為治療細菌年江蘇抗生素作為治療細菌感染的藥物，其高效性和宏大的經(jīng)濟價值使抗生素感染的藥物，其高效性和宏大的經(jīng)濟價值使抗生素工業(yè)經(jīng)久不衰。其中青霉素的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)器具有劃時工業(yè)經(jīng)久不衰。其中青霉素的發(fā)現(xiàn)和應(yīng)器具有劃時代的意義。代的意義。青霉素發(fā)酵產(chǎn)生青霉素。青霉菌的新陳代謝類青霉素發(fā)酵產(chǎn)生青霉素。青霉菌的新陳代謝類型是型是 ，青霉素是青霉菌的，青霉素是青霉菌的 代謝產(chǎn)物。代謝產(chǎn)物。在消費和科研中，常選用途于在消費和科研中，常選用途于 期的青霉菌期的青霉菌作為菌種或研討資料，由于此時的青霉菌代謝旺盛，作為菌種或研討資料，