血型鑒定方法ppt課件

1、ABO血型鑒定 不規(guī)則抗體篩選n玻片法（正定型）n試管法（正定型,反定型） n鹽水法n聚凝胺法n抗人球法 1;.ABO血型鑒定實驗原理n抗原抗體反應在ABO血型系統(tǒng)中，紅細胞膜上抗原分A和B兩種抗原，而血清抗體分抗A和抗B兩種抗體。A抗原加抗A抗體或B抗原加抗B抗體，則產(chǎn)生凝集現(xiàn)象從而測知受試者紅細胞膜上有無A或/和B抗原判斷血型n抗體在相鄰的紅細胞表面抗原決定簇之間搭橋形成肉眼可見的顆粒狀凝集團塊抗體在相鄰的紅細胞表面抗原決定簇之間搭橋形成肉眼可見的顆粒狀凝集團塊.見見圖圖2;.IgM抗體凝集紅細胞示意圖3;.IgM抗體凝集紅細胞示意圖 IgGM在鹽水介質(zhì)中產(chǎn)生凝集4;.試劑試劑 n抗A、抗

2、B試劑血清n5%的A型、B型及O型試劑紅細胞懸液n受檢者血清n5%的受檢者紅細胞懸液 (從指尖或耳垂取血一滴，加入含1ml生理鹽水的小試管內(nèi)，混勻，即得約5紅細胞懸液。采血時應注意先用75酒精消毒指尖或耳垂。)(取少量受檢者紅細胞（約0.20.5 ml）用生理鹽水洗滌3次，然后加入適量生理鹽水調(diào)配成5%濃度。)5;.四 實驗步驟.swfn 1. 玻片法n（1） 取雙凹玻片一塊，用干凈紗布輕拭使之潔凈，在玻片兩端用記號筆標明A及B，并分別各滴入A及B標準血清一滴。n（2） 用滴管吸取紅細胞懸液，分別各滴一滴于玻片兩端的血清上，注意勿使滴管與血清相接觸。n（3） 竹簽兩頭分別混合，攪勻。用兩根 分

3、別用來混合A型和B型標準 血清和紅細胞懸液n（4）觀察結(jié)果。如有凝集反應可見到呈紅色點狀或小片狀凝集塊浮起。先用肉眼看有無凝集現(xiàn)象，肉眼不易分辨時，則在低倍顯微鏡下觀察，如有凝集反應，可見紅細胞聚集成團。n（5） 判斷血型 根據(jù)被試者紅細胞是否被A，B型標準血清所凝集，判斷其血型。 6;.2.試管法(正定型)n A B nA標準血清 2滴nB標準血清 2滴n受試者的紅細胞懸液 1滴 1滴n混勻后1000rpm離心1min或3000rpm離心15秒。 。n取出觀察結(jié)果。完全凝集的管底部有紅細胞的凝塊，管底細胞邊緣呈花邊狀，輕彈試管凝塊不散；完全不凝的試管，血細胞均勻的沉到管底，邊緣整齊，用手輕彈

4、試管，紅細胞像一縷煙似的立即上升，隨即成為均勻的懸液;輕微凝集的，必須將液體轉(zhuǎn)到載玻片上鏡檢后判定凝集程度。 7;.試管法(反定型)n Ac Bc Oc n受檢者血清 2滴 2滴 2滴 n5%的A型紅細胞懸液 1滴n5%的B型紅細胞懸液 1滴n5%的O型紅細胞懸液 1滴n立即以1000rpm離心1分鐘或3000rpm離心15秒。n輕輕扣動試管底部，觀察結(jié)果-同前8;.血型判定swf正定型正定型反定型反定型 結(jié)果結(jié)果抗抗A A 抗抗B BA A型型RBC BRBC B型型RBC ORBC O型型RBCRBC- -+ + - O + - + - A- + + - - B+ +- - - AB9;.

5、五 注意事項n玻片、試管都要標記！玻片、試管都要標記！， A及B標準血清絕對不能相混,不要依靠用染料顏色標記血清。工作中要形成自己的習慣！n所用玻片、試管實驗前必須清洗干凈，以免出現(xiàn)假凝集現(xiàn)象。n紅細胞懸液滴管頭不能接觸標準血清液面，竹簽一端去混勻一側(cè)就不能去接觸另一側(cè)。n一般先加血清，然后再加紅細胞懸液，便于核實是否漏加血清。n離心時間、速度嚴格要求，以防假陽 性或假陰性結(jié)果。n試驗用血清和試劑紅細胞都應標準化。n要在光亮的背景下觀察凝集,可使用光鏡檢查小的凝集,同時應注意觀察凝集強度，有助于A、B亞型的發(fā)現(xiàn)，觀察后立即記錄觀察結(jié)果。10;.正反定型結(jié)果不一致的常見原因有哪些？n（）人為因素

6、：試劑不標準、失效或污染；操作中加錯樣本或試劑、離心速度不足或過度、細胞與血清比例不當、結(jié)果判斷錯誤等。n（）客觀因素：因某些疾病導致抗原減弱如：白血病，MDS（骨髓增生異常綜合征）患者血型抗原減弱導致誤定血型。受檢者抗體效價低（如嬰幼兒、老年人、大量輸液的患者，血漿蛋白低下等）某些藥物干擾如輸注右旋糖酐后會干擾血型檢定。11;.為什么這次試驗沒有安排玻片法的反定型？n 因為存在于病人或獻血者血清中的抗及抗，個體差異很大，如果效價較弱，在玻片上不足以凝集大量抗原陽性的紅細胞，造成假陰牲的結(jié)果所以采用玻片法玻片法作反定型的結(jié)果常不可靠作反定型的結(jié)果常不可靠。而用試管離心法作反定型，則促進抗原抗體反應，形成肉眼可見的凝塊，使結(jié)果更為可靠 12;.二 實驗原理n 血型就是紅細胞膜上特異抗原的類型。在ABO血型系統(tǒng)中，紅細胞膜上抗原分A和B兩種抗原，而血清抗體分抗A和抗B兩種抗體。血型鑒定是將受試者的紅細胞加入標準A型血清（含有抗