血型鑒定及交叉配血ppt課件

1、實(shí)驗(yàn)十一：血型鑒定及交叉配血實(shí)驗(yàn)十一：血型鑒定及交叉配血1;.實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)內(nèi)容n一、紅細(xì)胞懸液的制備n二、ABO血型鑒定（試管法）和Rh血型鑒定n三、交叉配血（鹽水介質(zhì)和聚凝胺介質(zhì)）2;.臨床中：待測待測制成紅細(xì)胞懸液，制成紅細(xì)胞懸液，待測待測3;.一、紅細(xì)胞懸液制備一、紅細(xì)胞懸液制備n常用濃度：1%、2%、5%、10%。n方法：抗凝血 移去上層血漿待測 洗滌：剩余的紅細(xì)胞中加5ML NS，混勻，洗滌 ，棄上清，此步驟重復(fù)3次，最后一次上清應(yīng)清亮并全部棄去。 配制懸液。（根據(jù)要求濃度）如：5%：洗滌后壓積紅細(xì)胞1滴+19滴NS，混勻3000r/min5min3000r/min5min4;.二、

2、ABO血型鑒定：n（一）、正定型n（二）、反定型 5;.二、ABO血型鑒定（鹽水介質(zhì)）：n一、正定型一、正定型原理：用特異性血型抗體檢測被檢RBC,在鹽水介質(zhì)中發(fā)生肉眼可見的凝集，從而測定被檢RBC膜上有無與特異性血型抗體相對應(yīng)的抗原，進(jìn)一步判定血型。6;.二、ABO血型鑒定：n一、正定型一、正定型方法：方法：1、試管法：加標(biāo)準(zhǔn)血清加標(biāo)準(zhǔn)血清1滴滴（-A -B ）加紅細(xì)胞懸液加紅細(xì)胞懸液1滴（滴（5%）混勻，離心混勻，離心 觀察結(jié)果觀察結(jié)果1000r/min1min-A-B7;.二、ABO血型鑒定：n正定型正定型判定結(jié)果：判定結(jié)果：試管法：輕輕搖動(dòng)（或捻動(dòng)）試管，使沉于管底的RBC浮起，觀察有

3、無凝集或溶血，如上層清亮，管底有RBC凝塊，輕彈管底，凝塊無散開，為凝集（）；如上層清亮，管底有RBC沉積，邊緣整齊，輕彈管底，RBC浮起或成為均勻的RBC懸液，則為不凝集（一）；若不確定，可將反應(yīng)物倒在載玻片上，顯微鏡下觀察。注意：若上層為清亮的櫻紅色，考慮是否溶血8;.二、ABO血型鑒定：n二、反定型：原理：用標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞檢測被檢血清（血漿）,在鹽水介質(zhì)中發(fā)生肉眼可見的凝集，從而測定被檢血清（血漿）中有無與標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞相對應(yīng)的抗體，進(jìn)一步判定血型。9;.二、ABO血型鑒定：n二、反定型二、反定型方法：方法：1、試管法：加待測血清加待測血清2滴滴加標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸加標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液液1滴滴混勻，離心混

4、勻，離心 觀察結(jié)果（方法同正定型）觀察結(jié)果（方法同正定型）1000r/min1min-A-B10;.11;.二、ABO血型鑒定：n結(jié)果判定：結(jié)果判定：抗A抗B結(jié)果ABABOA(RBC)B(RBC)結(jié)果BAOAB正定型正定型反定型反定型12;.二、ABO血型鑒定n凝集強(qiáng)度的判斷見實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)表格n注意：1、正反定型一致才能確定結(jié)果； 2、所用器材必須清潔干凈，避免溶血，專型專用； 3、控制離心速度和時(shí)間，防止假陽性和假陰性； 4、抗原抗體比例要適當(dāng)； 5、溶血時(shí)，注意結(jié)果的判定； 6、正反定型結(jié)果不一致時(shí)，不可輕易判定，需查明原因，可能有技術(shù)問題也可能有標(biāo)本問題。13;. Rh（D）血型鑒定n原理：

5、IgM型抗D標(biāo)準(zhǔn)血清與被檢者RBC表面D抗原在室溫條件下鹽水介質(zhì)中產(chǎn)生特異性反應(yīng)，根據(jù)是否出現(xiàn)凝集判斷是否有D抗原的存在。14;. Rh（D）血型鑒定加抗加抗D血清血清1滴滴加紅細(xì)胞懸液加紅細(xì)胞懸液1滴（滴（5%）輕輕搖動(dòng)玻片混勻，輕輕搖動(dòng)玻片混勻，2min內(nèi)判斷結(jié)果，有內(nèi)判斷結(jié)果，有凝集（），無凝集需凝集（），無凝集需按照說明書進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)按照說明書進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)確認(rèn)是否為陰性確認(rèn)是否為陰性15;. Rh（D）血型鑒定n注意事項(xiàng)：1、按照試劑說明書操作2、先加血清，后加RBC懸液，可通過視覺判斷以免出現(xiàn)漏加抗D試劑導(dǎo)致的假陰性結(jié)果3、觀察結(jié)果時(shí)，應(yīng)輕輕捻動(dòng)試管，若用力搖動(dòng)，可認(rèn)為破壞弱凝集，誤判為

6、（一）性。 16;.三、交叉配血三、交叉配血n概念：供血者的血漿、紅細(xì)胞與受血者的紅細(xì)胞、血漿混合，觀察有無凝集反應(yīng)。n方法：鹽水介質(zhì)法、聚凝胺介質(zhì)法、微柱凝膠法、抗人球蛋白法、酶介質(zhì)法。17;.交叉配血：n 主側(cè)：受血者血漿+供血者紅細(xì)胞 Ps：patient serum Dc：donor celln 次側(cè)：供血者血漿+受血者紅細(xì)胞 Ds：donor serum Pc：patient cell18;.受血者受血者獻(xiàn)血者獻(xiàn)血者PsPcDsDc主側(cè)主側(cè)次側(cè)次側(cè)3%-5% 1%19;.一、鹽水介質(zhì)法一、鹽水介質(zhì)法n原理原理：ABO血型天然IgM類抗體與對應(yīng)的RBC抗原特異性結(jié)合時(shí)，在鹽水介質(zhì)中出現(xiàn)

7、肉眼可見的凝集。通過判斷是否凝集，判斷是否有血型不合的情況20;.（一）鹽水介質(zhì)法（一）鹽水介質(zhì)法n操作：操作：1、取兩只小試管，標(biāo)明主和次側(cè)2、主側(cè)：受血者血漿2滴，獻(xiàn)血者紅細(xì)胞1滴 次側(cè)：獻(xiàn)血者血漿2滴，受血者紅細(xì)胞1滴3、混勻，離心，1000r/min,離心1min4、觀察結(jié)果：輕輕搖動(dòng)（或捻動(dòng)）試管，使沉于管底的RBC浮起，觀察有無凝集或溶血，如上層清亮，管底有RBC凝塊，輕彈管底，凝塊無散開，為凝集（）；如上層清亮，管底有RBC沉積，邊緣整齊，輕彈管底，RBC浮起或成為均勻的RBC懸液，則為不凝集（一）；若不確定，可將反應(yīng)物倒在載玻片上，顯微鏡下觀察。21;.（二）聚凝胺介質(zhì)法（二）

8、聚凝胺介質(zhì)法n原理：原理：聚凝胺聚凝胺是一種高價(jià)陽離子多聚物，在液體中可產(chǎn)生負(fù)電荷，中和紅細(xì)胞表面的是一種高價(jià)陽離子多聚物，在液體中可產(chǎn)生負(fù)電荷，中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，減輕細(xì)胞間排斥力，縮短紅細(xì)胞距離，在離心力作用下，可使紅細(xì)胞發(fā)生發(fā)負(fù)電荷，減輕細(xì)胞間排斥力，縮短紅細(xì)胞距離，在離心力作用下，可使紅細(xì)胞發(fā)生發(fā)生可逆性、非特異性凝集。生可逆性、非特異性凝集。低離子液低離子液可降低可增強(qiáng)抗原、抗體間的吸引力，促進(jìn)血型可降低可增強(qiáng)抗原、抗體間的吸引力，促進(jìn)血型抗體與紅細(xì)胞膜上相應(yīng)抗原結(jié)合。離心后加入抗體與紅細(xì)胞膜上相應(yīng)抗原結(jié)合。離心后加入再懸液（枸櫞酸鈉），再懸液（枸櫞酸鈉），可中和聚凝胺的可中和聚凝胺的正電荷，正常紅