對免疫金標(biāo)法檢測血清結(jié)核抗體的些改良

1、對免疫金標(biāo)法檢測血清結(jié)核抗體的某些改良【關(guān)鍵詞】 肺結(jié)核 Improvement of Immunity Gold Mark Methold Examination Serum Tuberde Antibody Key words:Immunity gold mark method; Serum; Tuberde antibody我們在工作中發(fā)觀，應(yīng)用免疫金標(biāo)滲濾法(以下簡稱金標(biāo)法)快速檢測血清結(jié)核抗體時(shí)，重度黃疸、溶血、乳糜血清等樣本在實(shí)驗(yàn)過程中滲入反應(yīng)膜的速度慢，觀察結(jié)果時(shí)反應(yīng)膜背景偏紅、有的無法判斷結(jié)果。因此，對原實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行改進(jìn)，克服樣本因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。1 材料

2、與方法1.1 材料 肺結(jié)核患者，按中華醫(yī)學(xué)會結(jié)核病分會關(guān)于“肺結(jié)核診斷與治療指南”1確診。選擇重度黃疸血清43例、溶血血清12例，乳糜血清6例，共計(jì)61例血清，-20 保存?zhèn)錂z。1.2 方法1.2.1 原方法 試劑盒由福建籃波生物研究所提供、按說明使用。1.2.2 改良方法(以下稱本法) 改良要點(diǎn)：第一，將15稀釋后的(黃疸血清、溶血、乳糜血清)樣本0.6 ml10 ml經(jīng)G6除菌濾膜(注射器式)，取濾液檢測。第二，待濾液完全滲入濾膜后，加A液1滴2滴洗滌后加金標(biāo)二抗。第三，觀察結(jié)果時(shí)，如果反應(yīng)膜有殘留影響結(jié)果判斷，用棉簽沾A液輕輕擦拭除去殘留物，加A液1滴2滴洗滌后觀察結(jié)果。第四，可用酶免中

3、PBST替代A液使用。2 結(jié)果2.1 本法與原方法在觀察結(jié)果時(shí)金標(biāo)二抗殘留情況比較 我們對61例肺結(jié)核患者的血清樣本(包括重度黃疸血清43例、溶血血清12例、乳糜血清6例)，用本法和原方法進(jìn)行平行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如表1所示。表1：本法與原方法在結(jié)果觀察時(shí)反應(yīng)膜背景比方法（略）本文在應(yīng)用原方法檢測的21例實(shí)驗(yàn)結(jié)果背景偏紅樣本中，有14例為重度黃疸血清，6例為中度溶血血清，1例為重度乳糜血清。在6例無法判斷結(jié)果的樣本，分別為重度黃疸血清5例，重度溶血血清1例。2.2 兩種方法的樣本完全滲入反應(yīng)膜所用時(shí)間的比較 本文對22例重度黃疸血清用生理鹽水15稀釋后直接加入實(shí)驗(yàn)濾膜上，樣本滲入反應(yīng)膜所用的時(shí)間為(8

4、2±24)min；取上述22例15稀釋血清經(jīng)G6除菌過濾后的濾液加入實(shí)驗(yàn)濾膜上，樣本完全滲入反應(yīng)膜所用的時(shí)間為(40±22)min。二者進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，差異非常顯著(P<001)。2.3 本法對61例肺結(jié)核患者血清結(jié)核抗體的檢測結(jié)果 我們應(yīng)用本法對61例血清為重度黃疸、溶血、乳糜血清的肺結(jié)核患者血清結(jié)核抗體進(jìn)行檢測，其結(jié)果為陽性52例，陽性率為85.1，與文獻(xiàn)報(bào)道一致2。3 討論本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，應(yīng)用本法對61例血清為重度黃疸、溶血、乳糜血清的肺結(jié)核患者血清結(jié)核抗體進(jìn)行檢測，觀察結(jié)果時(shí)反應(yīng)膜背景偏紅者為7/61(114)，與原方法(343)相比明顯減少(P&a

5、mp;lt;001)。我們對22例重度黃疸血清15稀釋樣本完全滲入反應(yīng)膜的時(shí)間進(jìn)行比較，原方法為(8.2±34)min；本法為(4.0±22)min，二者差異非常顯著(P<001)。提示本法對15稀釋的重度黃疸、溶血、乳糜血清樣本進(jìn)行過濾，取濾液進(jìn)行測定，減少了樣本中大分子物質(zhì)對實(shí)驗(yàn)的干擾，使樣本滲透入反應(yīng)膜的速度加快，觀察結(jié)果時(shí)反應(yīng)膜背景更為清晰。我們在研究中發(fā)現(xiàn)，部分經(jīng)過G6除菌過濾后的重度黃疸、溶血樣本，在樣本完全滲入反應(yīng)膜后，其膜上仍有部分黃色、紅色殘留物，滴加1滴2滴A液洗滌可除去上述殘留物，再加B液，實(shí)驗(yàn)結(jié)果容易判斷。我們在工作中曾經(jīng)用本法對結(jié)核性胸膜炎患者胸腔積液結(jié)核抗體進(jìn)行檢測3，獲得了滿意的效果。我們用棉簽沾少量A液擦拭殘留在反應(yīng)膜上的金標(biāo)二抗時(shí)發(fā)現(xiàn)，特異性結(jié)合(陽性反應(yīng))金標(biāo)二抗不容易被擦拭；而殘留在反應(yīng)膜上的金標(biāo)二抗容易被擦拭。我們應(yīng)用本法對61例血清為重度黃疸、溶血、乳糜血清的肺結(jié)核患者血清結(jié)核抗體進(jìn)行檢測，其結(jié)果為陽性52例，陽性率851，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。表明本法可以減少或克服黃疸、溶血、乳糜血清對實(shí)驗(yàn)的干擾，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠。參考文獻(xiàn)：1 中華醫(yī)學(xué)會結(jié)核病分會.肺結(jié)核診斷與治療指南S.中華結(jié)核和呼吸雜志，2001，24：70.2 唐少華，鄭延迪.斑點(diǎn)免疫金滲濾法檢測結(jié)核抗體J.上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志