第七章 含量測定-uv

1、1第七章第七章 中藥制劑的含量測定技術(shù)中藥制劑的含量測定技術(shù)第七章第七章 中藥制劑的含量測定技術(shù)中藥制劑的含量測定技術(shù)【學(xué)習(xí)目標(biāo)學(xué)習(xí)目標(biāo)】v 知識目標(biāo)知識目標(biāo) 掌握紫外掌握紫外- -可見分光光度法、薄層掃描法、高效液相色譜法可見分光光度法、薄層掃描法、高效液相色譜法、氣相色譜法測定中藥制劑含量的原理和方法、氣相色譜法測定中藥制劑含量的原理和方法 熟悉紫外熟悉紫外- -可見分光光度計(jì)、薄層掃描儀、液相色譜儀、氣可見分光光度計(jì)、薄層掃描儀、液相色譜儀、氣相色譜儀的工作原理、使用方法及操作注意事項(xiàng)相色譜儀的工作原理、使用方法及操作注意事項(xiàng) 了解容量分析法和揮發(fā)油測定法的原理和方法了解容量分析法和揮發(fā)

2、油測定法的原理和方法v 技能目標(biāo)技能目標(biāo) 熟練掌握紫外熟練掌握紫外- -可見分光光度法、薄層掃描法、高效液相色可見分光光度法、薄層掃描法、高效液相色譜法、氣相色譜法的測定中藥制劑含量的基本操作和技能譜法、氣相色譜法的測定中藥制劑含量的基本操作和技能 學(xué)會正確查閱學(xué)會正確查閱中國藥典中國藥典，學(xué)會正確選取儀器、試藥，學(xué)會正確選取儀器、試藥，學(xué)會配制試液，學(xué)會計(jì)量器具和檢驗(yàn)儀器的操作，規(guī)范操學(xué)會配制試液，學(xué)會計(jì)量器具和檢驗(yàn)儀器的操作，規(guī)范操作，并學(xué)會正確計(jì)算、處理各種數(shù)據(jù)、判定檢測結(jié)果作，并學(xué)會正確計(jì)算、處理各種數(shù)據(jù)、判定檢測結(jié)果2第七章第七章 中藥制劑的含量測定技術(shù)中藥制劑的含量測定技術(shù)講授內(nèi)容

3、講授內(nèi)容v紫外紫外- -可見分光光度法可見分光光度法 簡述簡述 方法方法 應(yīng)用實(shí)例應(yīng)用實(shí)例v薄層掃描法薄層掃描法 簡述簡述 方法方法 應(yīng)用實(shí)例應(yīng)用實(shí)例v高效液相色譜法高效液相色譜法 簡述簡述 方法方法 應(yīng)用實(shí)例應(yīng)用實(shí)例v氣相色譜法氣相色譜法 簡述簡述 方法方法 應(yīng)用實(shí)例應(yīng)用實(shí)例川貝枇杷糖漿川貝枇杷糖漿v容量分析法容量分析法 北豆根片中總生物堿的測定北豆根片中總生物堿的測定 克痢痧膠囊中雄黃的測定克痢痧膠囊中雄黃的測定 萬氏牛黃清心丸中朱砂的測定萬氏牛黃清心丸中朱砂的測定v其他分析法其他分析法 揮發(fā)油測定法揮發(fā)油測定法 氮測定法氮測定法第七章第七章 中藥制劑的含量測定技術(shù)中藥制劑的含量測定技術(shù)中

4、國藥典中國藥典一部含量測定方法匯總表一部含量測定方法匯總表4類別類別分析方法分析方法品種數(shù)品種數(shù)項(xiàng)目數(shù)項(xiàng)目數(shù)新增項(xiàng)新增項(xiàng)儀器分析法儀器分析法高效液相色譜法高效液相色譜法850956709氣相色譜法氣相色譜法505224薄層掃描法薄層掃描法292912紫外紫外-可見分光光度法可見分光光度法17178原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法221化學(xué)分析法化學(xué)分析法滴定分析滴定分析27279氮測定法氮測定法11119揮發(fā)油測定法揮發(fā)油測定法441重量法重量法330鞣質(zhì)測定法鞣質(zhì)測定法111第七章第七章 中藥制劑的含量測定技術(shù)中藥制劑的含量測定技術(shù)v原理：原理：被測物質(zhì)、紫外或可見光區(qū)被測物質(zhì)、紫外或可

5、見光區(qū)v優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn) 靈敏度高靈敏度高 準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度 儀器設(shè)備簡單儀器設(shè)備簡單 操作簡便操作簡便v缺點(diǎn)缺點(diǎn) 不具分離功能不具分離功能總成分的測定總成分的測定v定量分析的依據(jù)定量分析的依據(jù) 朗伯朗伯- -比爾定律比爾定律v 方法方法 對照品比較法對照品比較法 吸收系數(shù)法吸收系數(shù)法 比色法比色法5紫外紫外-可見分光光度法可見分光光度法1lg （）AKcLT第七章第七章 中藥制劑的含量測定技術(shù)中藥制劑的含量測定技術(shù)紫外紫外-可見分光光度法可見分光光度法v含量計(jì)算含量計(jì)算 對照品比較法對照品比較法 吸收系數(shù)法吸收系數(shù)法6供供對對ACCA供供1%11%cmACEL第七章第七章 中藥制劑的含量測定技術(shù)中藥制劑

6、的含量測定技術(shù)紫外紫外-可見分光光度法可見分光光度法v吸光度測量的條件選擇吸光度測量的條件選擇 測定波長的選擇：測定波長的選擇： maxmax 吸光度吸光度A A讀數(shù)范圍：讀數(shù)范圍：0.30.30.70.77調(diào)節(jié)光路調(diào)節(jié)光路樣樣參參光學(xué)性質(zhì)和厚度相同光學(xué)性質(zhì)和厚度相同樣品池樣品池樣品溶液樣品溶液，參比池參比池空白溶液空白溶液樣品池樣品池參比池參比池配制樣品的溶劑配制樣品的溶劑空白溶液空白溶液A AT TA A= = =% %1001000 0第七章第七章 中藥制劑的含量測定技術(shù)中藥制劑的含量測定技術(shù)v含量測定方法：對照品比較法含量測定方法：對照品比較法 供試品溶液和對照品溶液各供試品溶液和對照

7、品溶液各2 2份份 平行操作平行操作 每份結(jié)果對平均值的每份結(jié)果對平均值的偏差偏差應(yīng)在應(yīng)在0.5%0.5%以內(nèi)以內(nèi) 對照品溶液中所含被測成分的量應(yīng)為供試品溶對照品溶液中所含被測成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測成分規(guī)定量的液中被測成分規(guī)定量的100%100%10%10% 所用所用溶劑溶劑應(yīng)完全一致應(yīng)完全一致 止咳寶片（嗎啡）、燈盞細(xì)辛注射劑（總咖啡止咳寶片（嗎啡）、燈盞細(xì)辛注射劑（總咖啡酸酯）、泌石通膠囊（多糖）、黃楊寧片（環(huán)酸酯）、泌石通膠囊（多糖）、黃楊寧片（環(huán)維黃楊星維黃楊星D D）8紫外紫外-可見分光光度法可見分光光度法第七章第七章 中藥制劑的含量測定技術(shù)中藥制劑的含量測定技術(shù)紫外紫外-可見

8、分光光度法可見分光光度法v含量測定方法：含量測定方法：對照品比較法對照品比較法 例題：黃楊寧片中黃楊寧的含量測定例題：黃楊寧片中黃楊寧的含量測定 本品為黃楊寧經(jīng)加工制成的片劑。每片含環(huán)維黃楊本品為黃楊寧經(jīng)加工制成的片劑。每片含環(huán)維黃楊星星D 0.5mgD 0.5mg或或1mg1mg 可用對照品比較法測其含量?？捎脤φ掌繁容^法測其含量。 環(huán)維黃楊星環(huán)維黃楊星D D9第七章第七章 中藥制劑的含量測定技術(shù)中藥制劑的含量測定技術(shù)紫外紫外-可見分光光度法可見分光光度法B + H+BH+HInH+In-(BH+In-)(BH+In-)水相有機(jī)相10v含量測定方法：對照品比較法含量測定方法：對照品比較法 例

9、題：黃楊寧片中黃楊寧的含量測定例題：黃楊寧片中黃楊寧的含量測定 測定原理：酸性染料比色法測定原理：酸性染料比色法第七章第七章 中藥制劑的含量測定技術(shù)中藥制劑的含量測定技術(shù)紫外紫外-可見分光光度法可見分光光度法-黃楊寧片黃楊寧片v 【含量測定】【含量測定】對照品溶液的制備對照品溶液的制備 取環(huán)維黃楊星取環(huán)維黃楊星D D對照品對照品25mg25mg，精密稱定，置，精密稱定，置250ml250ml量瓶中，加甲醇量瓶中，加甲醇70ml70ml使溶解，用使溶解，用0.05mol/L0.05mol/L磷酸二氫鈉緩沖液稀釋至刻磷酸二氫鈉緩沖液稀釋至刻度，搖勻，精密量取度，搖勻，精密量取10ml10ml，置，

10、置100ml100ml量瓶中，用量瓶中，用0.05mol/L0.05mol/L磷酸二氫鈉緩沖液磷酸二氫鈉緩沖液稀釋至刻度，搖勻，即得（每稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml1ml含環(huán)維黃楊星含環(huán)維黃楊星D10gD10g）。）。v 供試品溶液的制備供試品溶液的制備 取本品取本品2020片，精密稱定，研細(xì)，片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)精密稱取適量（約相當(dāng)于環(huán)維黃楊星于環(huán)維黃楊星D0.5mgD0.5mg），置，置50ml50ml量瓶中，加量瓶中，加0.05mol/L0.05mol/L磷酸二氫鈉緩沖液至磷酸二氫鈉緩沖液至近刻度，近刻度，8080水浴恒溫水浴恒溫1.51.5小時(shí)后取出，冷卻至室溫

11、，加小時(shí)后取出，冷卻至室溫，加0.05mol/L0.05mol/L磷酸二氫磷酸二氫鈉緩沖液至刻度，搖勻，離心鈉緩沖液至刻度，搖勻，離心6 6分鐘（每分鐘轉(zhuǎn)速分鐘（每分鐘轉(zhuǎn)速30003000轉(zhuǎn)），取上清液，即轉(zhuǎn)），取上清液，即得。得。v 測定法測定法 精密量取對照品溶液與供試品溶液各精密量取對照品溶液與供試品溶液各5ml5ml，分別置分液漏斗中，各精，分別置分液漏斗中，各精密加入溴麝香草酚藍(lán)溶液（取溴麝香草酚藍(lán)密加入溴麝香草酚藍(lán)溶液（取溴麝香草酚藍(lán)18mg18mg，置，置250ml250ml量瓶中，加甲醇量瓶中，加甲醇5ml5ml使溶解，加使溶解，加0.05mol/L0.05mol/L磷酸二氫鈉

12、緩沖液至刻度，搖勻，即得）磷酸二氫鈉緩沖液至刻度，搖勻，即得）5ml5ml，搖，搖勻，立即分別精密加入三氯甲烷勻，立即分別精密加入三氯甲烷10ml10ml，振搖，振搖2 2分鐘，靜置分鐘，靜置1.51.5小時(shí)，分取三氯小時(shí)，分取三氯甲烷層，置含甲烷層，置含0.5g0.5g無水硫酸鈉的具塞試管中，振搖，靜置，取上清液，照紫無水硫酸鈉的具塞試管中，振搖，靜置，取上清液，照紫外外- -分光光度法（附錄分光光度法（附錄 A A），在），在410nm410nm的波長處分別測定吸光度，計(jì)算，即的波長處分別測定吸光度，計(jì)算，即得。得。11第七章第七章 中藥制劑的含量測定技術(shù)中藥制劑的含量測定技術(shù)v含量測定方

13、法含量測定方法-吸收系數(shù)法吸收系數(shù)法 六味地黃顆粒中牡丹皮的含量測定六味地黃顆粒中牡丹皮的含量測定 取裝量差異項(xiàng)下的本品約取裝量差異項(xiàng)下的本品約2g2g，研細(xì)，精密稱定，用水，研細(xì)，精密稱定，用水蒸汽蒸餾，收集餾出液約蒸汽蒸餾，收集餾出液約450ml450ml，置，置500ml500ml量瓶中，加量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。照分光光度法在水稀釋至刻度，搖勻。照分光光度法在274nm274nm波長處波長處測定吸收度，按丹皮酚（測定吸收度，按丹皮酚（C9H10O3C9H10O3）的吸收系數(shù)為）的吸收系數(shù)為862862計(jì)算，即得。藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定每袋（裝量為計(jì)算，即得。藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定每袋（裝量為5g5g

14、）含牡丹）含牡丹皮按丹皮酚（皮按丹皮酚（ C9H10O3 C9H10O3 ）計(jì)，不得少于）計(jì)，不得少于6.0mg6.0mg。 12紫外紫外-可見分光光度法可見分光光度法含量（含量（mg/g）=A供供1%500.01000平均裝量平均裝量862m供供第七章第七章 中藥制劑的含量測定技術(shù)中藥制劑的含量測定技術(shù)v含量測定方法含量測定方法-標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法 多用于可見分光光度法多用于可見分光光度法 適用于批量樣品的分析適用于批量樣品的分析 曲線可多次使用曲線可多次使用 主要用于總黃酮的含量測定。如主要用于總黃酮的含量測定。如中國藥典中國藥典獨(dú)一味獨(dú)一味膠囊（片）、消咳喘糖漿、諾迪康膠囊、夏枯草口服

15、膠囊（片）、消咳喘糖漿、諾迪康膠囊、夏枯草口服液、垂盆草顆粒和漢桃葉片中的總黃酮的含量測定；液、垂盆草顆粒和漢桃葉片中的總黃酮的含量測定；另新血寶膠囊和復(fù)方皂礬丸中硫酸亞鐵的含量測定也另新血寶膠囊和復(fù)方皂礬丸中硫酸亞鐵的含量測定也用此法用此法13紫外紫外-可見分光光度法可見分光光度法第七章第七章 中藥制劑的含量測定技術(shù)中藥制劑的含量測定技術(shù)v含量測定方法含量測定方法-標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（又稱工作曲線）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（又稱工作曲線）：按各品種項(xiàng)下按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法，配制一系列不同濃度（規(guī)定的方法，配制一系列不同濃度（CiCi）的對照品溶）的對照品溶液（液（5 57 7份），在相

16、同條件下分別測其吸光度（份），在相同條件下分別測其吸光度（AiAi），），以吸光度以吸光度A A為縱坐標(biāo)，濃度為縱坐標(biāo)，濃度C C為橫坐標(biāo)繪制為橫坐標(biāo)繪制A-CA-C曲線，即曲線，即得標(biāo)準(zhǔn)曲線（又稱工作曲線）。得標(biāo)準(zhǔn)曲線（又稱工作曲線）。 測定：測定：按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法，配制供試品溶液，按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法，配制供試品溶液，在相同條件下測定供試品溶液的在相同條件下測定供試品溶液的A A值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出與之對應(yīng)的濃度，即可求出被測成分的濃度。也可出與之對應(yīng)的濃度，即可求出被測成分的濃度。也可將一系列對照品溶液的濃度與相應(yīng)的吸光度進(jìn)行一元將一系列對照品溶液的濃度與相應(yīng)的

17、吸光度進(jìn)行一元線性回歸，求出回歸方程（線性回歸，求出回歸方程（相關(guān)系數(shù)相關(guān)系數(shù)r0.999r0.999），將），將供試品溶液的吸光度代入回歸方程，計(jì)算出被測成分供試品溶液的吸光度代入回歸方程，計(jì)算出被測成分的濃度（的濃度（C C供供）14紫外紫外-可見分光光度法可見分光光度法第七章第七章 中藥制劑的含量測定技術(shù)中藥制劑的含量測定技術(shù)樣品樣品A A值值對照品溶液：一系列不同濃度的對照品溶液對照品溶液：一系列不同濃度的對照品溶液 相同條件下相同條件下A A為縱坐標(biāo)，為縱坐標(biāo)，C C為橫坐標(biāo)為橫坐標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線（工作曲線）標(biāo)準(zhǔn)曲線（工作曲線）樣品的濃度和含量樣品的濃度和含量一系列一系列A A值值紫外紫外

18、-可見分光光度法可見分光光度法-標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法第七章第七章 中藥制劑的含量測定技術(shù)中藥制劑的含量測定技術(shù)消咳喘糖漿中總黃酮的測定消咳喘糖漿中總黃酮的測定v 對照品溶液的制備對照品溶液的制備 取蘆丁對照品適量，精密稱定，加取蘆丁對照品適量，精密稱定，加60%60%乙乙醇制成每醇制成每1ml1ml含蘆丁含蘆丁60g60g的溶液，即得。的溶液，即得。v 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對照品溶液精密量取對照品溶液0.5ml0.5ml、1ml1ml、2ml2ml、3ml3ml、4ml4ml與與5ml5ml，分別置，分別置10ml10ml量瓶中，各加量瓶中，各加0.1mol/L0.1mol/L三氯化鋁溶三氯化鋁溶液液2ml2ml、1mol/L1mol/L醋酸鉀溶液醋酸鉀溶液3ml3ml，