《DNA的粗提取與鑒定》課件(新人教版選修1)

1、當(dāng)氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為當(dāng)氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為 2 mol2 molL L時(shí)，時(shí)，DNADNA的溶解度最的溶解度最大，濃度為大，濃度為 0 014 mol14 molL L時(shí)，時(shí)，DNADNA的溶解度最低。利用這一的溶解度最低。利用這一原理，可以使原理，可以使DNADNA在鹽溶液中在鹽溶液中溶解或析出溶解或析出如何通過控制如何通過控制NaClNaCl溶液的濃度使溶液的濃度使DNADNA在在鹽溶液中溶解或析出？鹽溶液中溶解或析出？3 3、合適的材料：、合適的材料：原因：一是雞血細(xì)胞核的DNA含量豐富，材料易得；二是雞血細(xì)胞極易吸水漲破。2 2、植物細(xì)胞、植物細(xì)胞植物細(xì)胞需要先植物細(xì)胞需要先用一

2、定的用一定的洗滌劑和洗滌劑和食鹽溶解細(xì)胞膜食鹽溶解細(xì)胞膜 實(shí) 例 ： 提 取 洋 蔥實(shí) 例 ： 提 取 洋 蔥DNADNA時(shí)，在切碎的洋時(shí)，在切碎的洋蔥中加入一定的洗滌蔥中加入一定的洗滌劑和食鹽，進(jìn)行充分劑和食鹽，進(jìn)行充分的攪拌和研磨，過濾的攪拌和研磨，過濾后收集研磨液后收集研磨液討論：如果研磨不充分，會(huì)對(duì)討論：如果研磨不充分，會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響？具體做法：具體做法：10mL雞血雞血20mL蒸餾水蒸餾水同同方向攪拌方向攪拌3層尼龍布過濾層尼龍布過濾濾液濾液方案一方案一、在濾液中加入、在濾液中加入NaClNaCl，使，使NaClNaCl溶液濃度溶液濃度為為2mol

3、/L2mol/L，過濾除去，過濾除去不溶的雜質(zhì)不溶的雜質(zhì)，再加入，再加入蒸餾蒸餾水水，調(diào)節(jié)，調(diào)節(jié)NaClNaCl溶液濃度為溶液濃度為0.14mol/L0.14mol/L，析出，析出DNADNA，過濾除去，過濾除去溶液中的雜質(zhì)溶液中的雜質(zhì)，再用，再用2mol/L2mol/L的的NaClNaCl溶液溶解溶液溶解DNADNA。 方案二、直接在濾液中加入嫩肉粉，反應(yīng)方案二、直接在濾液中加入嫩肉粉，反應(yīng)10101515分鐘。分鐘。方案三、將濾液放在方案三、將濾液放在606075750 0C C的恒溫水浴箱中保溫的恒溫水浴箱中保溫10101515分鐘。分鐘。為了純化提取的為了純化提取的DNADNA需要將濾

4、液作進(jìn)一步處理需要將濾液作進(jìn)一步處理討論：此步驟獲得的濾液中可能含有討論：此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細(xì)胞成分？哪些細(xì)胞成分？具體做法具體做法: :方案一：方案一：30mL濾液濾液35gNaCl同方向攪拌同方向攪拌，DNA溶解溶解加入加入蒸餾水蒸餾水DNA析出析出過濾得到過過濾得到過濾物濾物放到放到2mol/LNaCl溶液中溶解溶液中溶解DNA-NaCl溶解液溶解液方案二：方案二：30mL濾液嫩肉粉（木瓜蛋白酶）濾液嫩肉粉（木瓜蛋白酶）靜置靜置1015分鐘分鐘DNA濾液濾液方案三：方案三：30mL濾液濾液6075處理處理過濾獲得過濾獲得DNA濾液濾液在沸水中加熱的目的：加快顏色反應(yīng)的速率在沸

5、水中加熱的目的：加快顏色反應(yīng)的速率沸水加熱：說明沸水加熱：說明DNA對(duì)高溫具有較強(qiáng)的耐受性對(duì)高溫具有較強(qiáng)的耐受性1、以血液為實(shí)驗(yàn)材料時(shí)，每、以血液為實(shí)驗(yàn)材料時(shí)，每100ml血液中需要加入血液中需要加入3g檸檬酸鈉檸檬酸鈉，防止，防止血液凝固。血液凝固。2、加入洗滌劑后，動(dòng)作要輕緩、柔、加入洗滌劑后，動(dòng)作要輕緩、柔和，否則容易產(chǎn)生大量的泡沫，不和，否則容易產(chǎn)生大量的泡沫，不利于后續(xù)步驟的操作。加入酒精和利于后續(xù)步驟的操作。加入酒精和玻璃棒攪拌時(shí)，動(dòng)作要輕緩，玻璃棒攪拌時(shí)，動(dòng)作要輕緩，以免以免加劇加劇DNA分子的斷裂，導(dǎo)致分子的斷裂，導(dǎo)致DNA分分子不能形成絮狀沉淀。子不能形成絮狀沉淀。3、二苯胺

6、試劑要、二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用現(xiàn)配現(xiàn)用，否則會(huì)，否則會(huì)影響鑒定的效果。影響鑒定的效果。制備雞血細(xì)胞液制備雞血細(xì)胞液加加檸檬酸鈉檸檬酸鈉，靜置或離心，靜置或離心破碎細(xì)胞，釋放破碎細(xì)胞，釋放DNA 加加蒸餾水蒸餾水，同一方向同一方向攪拌攪拌過濾過濾，除去細(xì)胞壁、細(xì)胞膜等。，除去細(xì)胞壁、細(xì)胞膜等。溶解核內(nèi)溶解核內(nèi)DNA加入加入NaCl至至2mol/L，同一方向同一方向緩慢攪拌緩慢攪拌DNA析出析出加加蒸餾水蒸餾水至至0.14mol/L，過濾過濾，在溶解到，在溶解到2mol/L 溶液中溶液中除去細(xì)胞質(zhì)中的大部分物質(zhì)。除去細(xì)胞質(zhì)中的大部分物質(zhì)。DNA初步純化初步純化與等體積與等體積95冷卻酒精冷卻酒精混合

7、，析出混合，析出白色白色 絲狀物絲狀物除去核蛋白、除去核蛋白、RNA、多糖等。、多糖等。DNA鑒定鑒定 二苯胺，沸水浴，呈現(xiàn)藍(lán)色二苯胺，沸水浴，呈現(xiàn)藍(lán)色2.實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)中NaCl的物質(zhì)的量濃度為的物質(zhì)的量濃度為2 molL和和0.14 molL對(duì)對(duì)DNA有何影響有何影響?1.在在DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)過程中，兩次向燒杯的粗提取實(shí)驗(yàn)過程中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是中加入蒸餾水的作用是( )。A.稀釋血液、沖洗樣品稀釋血液、沖洗樣品B.使血細(xì)胞破裂、降低使血細(xì)胞破裂、降低NaCl濃度使?jié)舛仁笵NA析出析出C.使血細(xì)胞破裂、增大使血細(xì)胞破裂、增大DNA溶解量溶解量 D.使血細(xì)胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的使血細(xì)胞破裂、提取含雜質(zhì)較少的DNA答：答：B答：前者是溶解答：前者是溶解DNA，后者是使，后者是使DNA析出析出3.DNA3.DNA遇二苯胺遇二苯胺( (沸水浴沸水浴) )會(huì)染成會(huì)染成( ) ( ) A. A.磚紅色磚紅色 B.B.橘黃色橘黃色 C.C.紫色紫色 D.D.藍(lán)色藍(lán)色4.提取雞血中的提取雞血中的DNA時(shí)，為什么要除去血液時(shí)，為什么要除去血液