柴郁溫膽湯及其拆方對抑郁大鼠血清ACTHCOR及海馬cAMP的影響

1、DOC格式論文，方便您的復(fù)制修改刪減柴郁溫膽湯及其拆方對抑郁大鼠血清ACTH、COR及海馬cAMP的影響(作者：單位：郵編：)作者：周志華 周海虹 陸汎 韓詠竹 胡紀(jì)源 王訓(xùn)【摘要】探討柴郁溫膽湯及其拆方對抑郁大鼠血清ACTH、COR和海馬cAMP的影響。方法健康雄性SD大鼠84只，隨機分為 正常組、模型組、柴郁溫膽湯組、化痰組、調(diào)氣血組、養(yǎng)心脾組、馬 普替林組。參照Katz刺激方法制備慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激(CUMS) 抑郁模型。采用放射免疫法測血清 ACTH、COR和大鼠海馬cAMP 含量。結(jié)果與正常組相比，模型組大鼠血清 ACTH和COR水平 明顯升高、海馬cAMP含量明顯降低。同模型組

2、相比，柴郁溫膽湯 組及調(diào)氣血組能明顯降低 ACTH濃度(P0.05 );柴郁溫膽湯組、化痰 組和調(diào)氣血組均能顯著降低 COR濃度(P0.01);柴郁溫膽湯組、化痰 組和馬普替林組均能夠顯著提升大鼠海馬 cAMP的含量(P0.01)。結(jié) 論慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激可以導(dǎo)致大鼠血清 ACTH和COR水平 升高；海馬cAMP含量下降，柴郁溫膽湯可以逆轉(zhuǎn)這種改變，其中 以調(diào)氣血和化痰藥作用為主，其機制可能與其參與調(diào)節(jié)HPA軸功能 和細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)有關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】柴郁溫膽湯；組分；抑郁癥；HPA軸；ACTH ； COR ；CAMPUniversityAbstract: Objective To explo

3、re the effects of the traditional Chinese drugs Chaiyuwendantang (CYWDT) and its component on the plasm levels of ACTH, COR and cAMP in hippocampus of depressed mode. Methods Eighty-four male rats were divided into seven groups: control group, depressed model group, group of CYWDT, group of HuaTan,

4、group of TiaoQiXue, group of YangXinPi, group of maprotiline equally and made up models in chronic un predictable mild stress (CUMS). The plasm levels of ACTH, COR and the level of cAMP in hippocampus were detected by radioimmunoassay. Results We found that theplasm levels of ACTH, COR were sig nifi

5、ca ntly in crease and cAMP in hippocampus was sig ni fica ntly decreasd in depressi on model of rat. CY WDT and TiaoQiXue could sig ni fica ntly decreased the level of ACTH(P v 0.05); CYWDT, HuaTan and TiaoQiXue could significantly decreased the level of COR(P v 0.01). CYWDT, HuaTa n and TiaoQiXue c

6、ould sig ni fica ntly in crease the level of cAMP in hippocampus. Conclusion Chronic unpredictable mildstress can in crease the plasm levels of ACTH, COR and the level of cAMP in hippocampus of depressi on rats. CYWDT could reverse all the changes. The mechanism maybe relatd to regulate hypothalamic

7、 pituitary adrenal axis and signal transmission in cell.Key words: Chaiyuwendantang; component;depression; hypothalamic _ pituitary _adre nal axis; adre no corticotropic horm one; cortisol; cyclic ade nosine mon ophosphate抑郁癥（depression）是最常見的心境障礙，嚴(yán)重威脅人類的身心 健康。我們在前期研究中證實柴郁溫膽湯對腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)代謝紊 亂具有良好的調(diào)節(jié)作用，且

8、可明顯增加大鼠海馬部位 PKA表達1 。 本實驗擬觀察柴郁溫膽湯及其拆方對抑郁大鼠血清ACTH、COR和海馬CAMP的影響。并與四環(huán)類抗抑郁藥馬普替林相對照，現(xiàn)報告 如下。1材料與方法1.1材料（1）實驗動物:健康Sprague _|Dawley（SD）雄性大鼠84只，體重（180 20 ） g，由南京醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供（許可證號：SCXK（蘇）20020031）。所有大鼠均用普通飼料喂養(yǎng)兩周后開始造模。 實驗藥品：柴郁溫膽湯組（柴胡、郁金、半夏、陳皮、竹茹、枳實、 人參、茯苓、炙甘草）濃度為 1.84g生藥量/ml。化痰組（半夏、陳 皮、竹茹）濃度為0.64g生藥量/ml。調(diào)氣血組（柴

9、胡、郁金、枳實） 濃度為0.6g生藥量/ml。養(yǎng)心脾組（人參、茯苓、炙甘草、大棗）濃 度為0.5g生藥量/ml。以上藥物的煎制和濃縮均手工操作，所用煎藥 器具為陶瓷制品以保證藥物在煎制過程中的穩(wěn)定性。濃縮后的藥物中 每種單味藥的濃度在整方和拆方中均相同，以保證各組實驗結(jié)果的可 比性。鹽酸馬普替林（北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字H19991047）用去離子雙蒸水配制成1mg/ml藥物混懸液。（3）主要實 驗試劑和儀器 促腎上腺皮質(zhì)激素 （adre nocorticotropic hormo neACTH）放射免疫分析試劑盒（北京北方生物技術(shù)研究所）、皮質(zhì)醇 （cortisol COR）放射免

10、疫分析試劑盒（北京華英室溫技術(shù)研究所）、環(huán)磷 酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate cAMP） 放射免疫分析試劑 盒（上海中醫(yī)藥大學(xué)核醫(yī)學(xué)試驗室）。儀器：GC911Y放射免疫計數(shù)器 （科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司）。1.2方法1.2.1動物分組及給藥選取Open_field評分相近的大鼠84只，隨機分為正常組、模 型組、柴郁溫膽湯組、化痰組、調(diào)氣血組、養(yǎng)心脾組、馬普替林組， 每組12只。各治療組在應(yīng)激的第2天開始均按提取液 （濃縮后）1ml/100g灌胃給藥；模型組和正常組給予等量生理鹽水。每天上 午8時給藥1次，持續(xù)至實驗的第23天。1.2.2模型制備正常組

11、每籠飼養(yǎng)6只，正常攝水飲食，不給任何刺激。其余各 組，每只均單籠飼養(yǎng)，并接受21天各種不同的應(yīng)激刺激，參照 Katz 方法2，每天隨機給予一種刺激。使大鼠不能預(yù)料刺激的發(fā)生，以 避免產(chǎn)生適應(yīng)。1.2.3行為學(xué)測定Open_field法測定行為 所用自制敞箱規(guī)格為高 40cm、直徑 80cm的內(nèi)空圓柱桶，周壁為黑色，地面用黑線劃分為面積相等的25 塊。以動物四肢完全進入一個分區(qū)作為一個水平活動(crossing)得分、以雙前肢完全抬離地面至放下作為一次垂直活動 (rearing)得分、以及 觀察大鼠的理毛(修飾)次數(shù)和大便顆粒數(shù)。每只動物僅進行一次測 定，每次觀察3min。1.2.4糖水消耗實驗

12、在實驗第22天所有實驗大鼠均單籠飼養(yǎng)并禁食和禁水，只給 1%蔗糖溶液150ml，計算大鼠24h飲用1%蔗糖溶液量。1.2.5大鼠血清 ACTH和COR測定用10%水合氯醛(0.36ml/100g)給大鼠腹腔注射，麻醉后開腹， 腹主動脈抽取血液5ml，待測ACTH和COR。按試劑盒方法要求分 離血清，采用1251標(biāo)記放免法測定。1.2.6大鼠海馬CAMP含量測定按大鼠腦立體定向圖譜(包新民等編著，人民衛(wèi)生出版社，1991 年)定位，冰上分離大鼠一側(cè)海馬，裝于凍存管并立即投入液氮中， 待固化后稱重，放入-86 C冰箱保存待測。檢測時海馬置于pH4.75的醋酸緩沖液中勻漿，加入無水乙醇沉淀蛋白，離心

13、取上清液。采用 125I標(biāo)記放免法測定cAMP含量。1.3統(tǒng)計學(xué)方法所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(xis)表示。用SPSS11.5統(tǒng)計軟件對兩組間均數(shù)進行兩獨立樣本t檢驗和F檢驗2結(jié)果各組大鼠行為學(xué)變化，見表1。表1柴郁溫膽湯及其組分對大鼠行 為學(xué)評分的影響（略）.與正常組比較 0.05, 0.01;與模型組比 較 知0.05, P0.01 .各組大鼠糖水消耗量變化，見表2。表2柴 郁溫膽湯及其組分對大鼠糖水消耗量的影響（略）。與正常組比較 P0.05, 0.01;與模型組比較知0.05, P0.01 .各組大鼠血清 ACTH和COR及海馬CAMP含量的變化，見表3。表3柴郁溫膽湯 及其組分對大鼠

14、血清 ACTH、COR和海馬CAMP含量的影響（略）.與 正常組比較0.05, 0.01;與模型組比較*P0.05, P0.013討論對于抑郁大鼠的行為學(xué)觀察多采用經(jīng)典的 Open_field 法,目前比較 肯定的觀察指標(biāo)是大鼠的水平運動得分和垂直運動得分。本試驗觀察了大鼠的修飾次數(shù)以及大便顆粒數(shù)。其中水平得分代表動物的活動 度；垂直得分代表動物對新鮮事物的好奇程度和對外界環(huán)境的探究興 趣2。修飾次數(shù)代表了動物對周圍環(huán)境的要求和自身的關(guān)注程度， 大便顆粒數(shù)反應(yīng)了 CUMS抑郁模型大鼠是否有便秘的抑郁癥常見并 發(fā)癥。結(jié)果顯示復(fù)方柴郁溫膽湯能夠顯著提升抑郁模型大鼠的水平得 分、垂直得分、修飾次數(shù)和

15、大便顆粒數(shù)。相對于馬普替林，更是顯示 了少或無馬普替林的抗膽堿能副作用一便秘。本實驗研究觀察到模型組大鼠血清 ACTH和COR濃度較正常組顯 著增高，與上述文獻報道一致，這也進一步證實模型組大鼠存在 HPA 軸功能亢進。柴郁溫膽湯組和調(diào)氣血組能能夠逆轉(zhuǎn) ACTH的升高；柴郁溫膽湯組、化痰組和調(diào)氣血組能逆轉(zhuǎn)大鼠COR水平的增高；馬普替林組能夠同時逆轉(zhuǎn) ACTH和COR的升高。說明柴郁溫膽湯具有 調(diào)節(jié)HPA軸功能紊亂的作用，強度與馬普替林相似，其中起主要作 用的是化痰和調(diào)氣血組分。cAMP是細(xì)胞內(nèi)第二信使，可介導(dǎo)多種細(xì)胞內(nèi)激素、神經(jīng)遞質(zhì)及其 他信號分子的作用。本試驗研究表明，模型組大鼠海馬cAMP含量較正常組明顯降低。柴郁溫膽湯組、化痰組、馬普替林組均能夠逆轉(zhuǎn) 這種改變，提示柴郁溫膽湯參與了細(xì)胞信號通路的調(diào)節(jié)，其中起主要作用的是化痰藥，可能為其抗抑郁機理之一?！緟⒖嘉墨I】:1周海