甲型H1N1流感病毒樣品采集運(yùn)送及檢驗(yàn)技術(shù)

1、甲型H1N1流感病毒樣品采集、 運(yùn)送及檢驗(yàn)技術(shù) 2009.7 一、標(biāo)本的采集種類和要求 1 、推薦采集的呼吸道標(biāo)本種類 疾病發(fā)病后應(yīng)盡快采集如下標(biāo)本：鼻拭子、咽拭子、鼻腔 吸取物、鼻腔沖洗液。氣管插管的病人也應(yīng)收集氣管吸取物。 標(biāo)本應(yīng)置于無菌病毒采樣液，并立即用冰塊或冰排保存或置 于4 （冰箱），并馬上送至實(shí)驗(yàn)室。（臨床樣品采集人 員及實(shí)驗(yàn)室檢測人員的感染控制指導(dǎo)請見相關(guān)文件。） 采 樣同時(shí)填寫疑似人感染甲型H1N1感染病例標(biāo)本采樣單。（附 表1） w1 ）鼻腔抽吸液的采集方法）鼻腔抽吸液的采集方法 抽吸器一端的管子連接在抽吸泵上，另一端的管子從外鼻孔 完全插入鼻腔，啟動(dòng)抽吸泵采集鼻腔液在抽吸

2、器中。 2 2 ）鼻腔擦拭液的采集方法）鼻腔擦拭液的采集方法 將滅菌棉棒完全插入鼻腔中，摩擦鼻甲數(shù)次，采集粘膜表皮。 3 3 ）咽喉擦拭液的采集方法）咽喉擦拭液的采集方法 將滅菌棉棒從口腔完全插入咽喉中，以咽后壁、上顎扁桃的 發(fā)紅部位為中心，摩擦數(shù)次，采集粘膜表皮。 采集時(shí)，要采集時(shí)，要 注意不要觸碰到唾液。（采樣視頻網(wǎng)址注意不要觸碰到唾液。（采樣視頻網(wǎng)址 httphttp:/ 1266336791.html1266336791.html w2、拭子的選擇 標(biāo)本應(yīng)使用頭部為合成纖維的拭子（例如， 聚酯纖維），用鋁或塑料做柄。不推薦棉拭 子和木柄。標(biāo)本采集管應(yīng)包含3毫升病毒采樣 液（含有蛋白質(zhì)穩(wěn)

3、定劑，阻止細(xì)菌和真菌生 長的抗生素，緩沖液） 3、臨床標(biāo)本儲(chǔ)存要求、臨床標(biāo)本儲(chǔ)存要求 保存在保存在4（不能超過（不能超過4天）或者天）或者-70或或- 70以下。有條件的實(shí)驗(yàn)室均應(yīng)保存在以下。有條件的實(shí)驗(yàn)室均應(yīng)保存在-70 或或-70以下。不應(yīng)保存在以下。不應(yīng)保存在-20。 4、標(biāo)本的分裝處理、標(biāo)本的分裝處理 標(biāo)本送至實(shí)驗(yàn)室后，立即進(jìn)行處理，避免反標(biāo)本送至實(shí)驗(yàn)室后，立即進(jìn)行處理，避免反 復(fù)凍融。將原始標(biāo)本分為三份，一份用于核復(fù)凍融。將原始標(biāo)本分為三份，一份用于核 酸檢測，一份用于病毒分離，一份保存待復(fù)酸檢測，一份用于病毒分離，一份保存待復(fù) 核。（實(shí)際操作：采集鼻拭子核。（實(shí)際操作：采集鼻拭子2

4、份，咽拭子份，咽拭子2 份放在同一病毒采樣液中，其目的為了增加份放在同一病毒采樣液中，其目的為了增加 陽性檢出率）陽性檢出率） 5、標(biāo)本的運(yùn)輸、標(biāo)本的運(yùn)輸 疑似人感染甲型疑似人感染甲型H1N1感染病例列為感染病例列為 A類，類， 用用UN2814包裝運(yùn)輸。填寫疑似人感染甲型包裝運(yùn)輸。填寫疑似人感染甲型 H1N1感染病例標(biāo)本送檢單（附表感染病例標(biāo)本送檢單（附表2）。）。 w二、核酸檢測二、核酸檢測 w基于基于PCR原理的核酸檢測方法是一種快速有效的診斷方法，在突發(fā)傳染原理的核酸檢測方法是一種快速有效的診斷方法，在突發(fā)傳染 病應(yīng)急工作中發(fā)揮了巨大作用。病應(yīng)急工作中發(fā)揮了巨大作用。 w1、基于、基于

5、real-time RT-PCR的方法檢測新的甲型的方法檢測新的甲型H1N1流感病毒（引物和流感病毒（引物和 探針序列為美國探針序列為美國CDC設(shè)計(jì)）：設(shè)計(jì)）： 4月月29日日WHO網(wǎng)站上公布了美國網(wǎng)站上公布了美國CDC設(shè)計(jì)的針對此次甲型設(shè)計(jì)的針對此次甲型H1N1流感病毒的流感病毒的 real-time RT-PCR引物和探針，此實(shí)驗(yàn)用于檢測疑似甲型引物和探針，此實(shí)驗(yàn)用于檢測疑似甲型H1N1流感病例的呼流感病例的呼 吸道樣本吸道樣本, 因此，用此因此，用此real-time RT-PCR的方法，建議首先篩選甲型流感病毒的方法，建議首先篩選甲型流感病毒 并排除季節(jié)性流感病毒和并排除季節(jié)性流感病毒

6、和H5N1禽流感病毒。禽流感病毒。real-time RT-PCR方法參考。方法參考。 w2、基于、基于RT-PCR的方法檢測新的甲型的方法檢測新的甲型H1N1流感病毒（引物序列為國家流感病毒（引物序列為國家 流感中心設(shè)計(jì)）：流感中心設(shè)計(jì)）： w目前國家流感中心設(shè)計(jì)了目前國家流感中心設(shè)計(jì)了RT-PCR方法檢測新的甲型方法檢測新的甲型H1N1流感病毒流感病毒 w三、病毒分離鑒定三、病毒分離鑒定 可采用雞胚和可采用雞胚和/或或MDCK細(xì)胞進(jìn)行流感病毒細(xì)胞進(jìn)行流感病毒 分離。具備相應(yīng)條件的網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室在收到標(biāo)分離。具備相應(yīng)條件的網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室在收到標(biāo) 本后本后24h內(nèi)進(jìn)行病毒接種。內(nèi)進(jìn)行病毒接種。 w四、

7、適用于實(shí)驗(yàn)室工作人員的甲型四、適用于實(shí)驗(yàn)室工作人員的甲型H1N1流感流感 病毒生物安全病毒生物安全 （一）實(shí)驗(yàn)室級別及個(gè)人防護(hù)（一）實(shí)驗(yàn)室級別及個(gè)人防護(hù) 1、對采集自屬于感染甲型、對采集自屬于感染甲型H1N1流感病毒流感病毒 疑似病例的患者的臨床標(biāo)本進(jìn)行的診斷性實(shí)疑似病例的患者的臨床標(biāo)本進(jìn)行的診斷性實(shí) 驗(yàn)工作，在驗(yàn)工作，在BSL-2實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。所有樣本實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。所有樣本 操作均應(yīng)在生物安全柜（操作均應(yīng)在生物安全柜（BSC）內(nèi)進(jìn)行。遵）內(nèi)進(jìn)行。遵 循生物安全三級個(gè)人防護(hù)。循生物安全三級個(gè)人防護(hù)。 2、對采集自屬于感染甲型、對采集自屬于感染甲型H1N1流感病毒流感病毒 疑似病例的患者的臨床標(biāo)

8、本進(jìn)行的病毒分離疑似病例的患者的臨床標(biāo)本進(jìn)行的病毒分離 培養(yǎng)工作，應(yīng)在培養(yǎng)工作，應(yīng)在BSL-3實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行，并遵實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行，并遵 循生物安全三級個(gè)人防護(hù)。循生物安全三級個(gè)人防護(hù)。 w（二）健康監(jiān)測 1、所有人員均應(yīng)自測發(fā)熱及其他癥狀。 2、感染甲型H1N1流感病毒的癥狀包括咳 嗽、喉嚨痛、嘔吐、腹瀉、頭痛、流鼻涕和 肌肉疼痛。如有不適，應(yīng)立即向上級報(bào)告。 3、如有人員在無防護(hù)情況下暴露于甲型 H1N1流感確診病例的臨床標(biāo)本或活病毒，應(yīng) 考慮在暴露后的7天時(shí)間里使用奧司他韋或扎 那米韋進(jìn)行抗病毒藥物預(yù)防。 w五、附表和附件 附表1 疑似人感染甲型H1N1感染病例標(biāo)本采 樣單 附表2 疑似人感染甲型H1N1感染病例標(biāo)本送 檢單 附表1 疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例標(biāo)本采樣單 姓名性別年齡職業(yè) 現(xiàn)住 址 發(fā)病 日期 標(biāo)本 (#)種 類 標(biāo)本 量 （g 或ml) 采集 日期 備注 w 選項(xiàng)：參照傳染病報(bào)告卡。 #選項(xiàng)：A鼻咽拭子、 B鼻咽吸取物、C鼻腔 沖洗液、D鼻腔吸取物、E氣管吸取物、F其 他（如為其他，請?jiān)诒砀裰凶⒚鳎?采集人員： 采集單位（蓋章）： 附表2 疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例標(biāo)本送檢單 姓名性別年齡職業(yè) 現(xiàn)住址發(fā)病 日期 標(biāo)本 (#)種 類 標(biāo)本 量