BD FACSCalibur中文操作手冊SimulSet軟件

1、bd facscalibur 中文培訓(xùn)手冊 第九章simulset 軟件學(xué)習(xí)本章后應(yīng)能夠：l 用simulset從流式細(xì)胞儀獲取和分析數(shù)據(jù)l 用simulset進(jìn)行基于文件數(shù)據(jù)的分析l 在simulset中創(chuàng)建多個(gè)參考范圍91 概述 simulset 軟件提供了快速有效的淋巴細(xì)胞亞群分析。雙色leucogate試劑加上simulset的設(shè)門策略來自動(dòng)設(shè)立淋巴細(xì)胞門。simulset 軟件在獲取、分析樣本的同時(shí)生成報(bào)告，也可分析以前獲取的list mode 數(shù)據(jù)文件。 simulset 軟件能：l 自動(dòng)設(shè)立用leucogate試劑標(biāo)記的樣本的淋巴細(xì)胞門l 允許客戶自己手動(dòng)設(shè)立實(shí)時(shí)門（live g

2、ate），而不采用自動(dòng)設(shè)門。live gate限制只獲取門內(nèi)細(xì)胞的數(shù)據(jù)。l 若simulset不能根據(jù)設(shè)門策略來自動(dòng)設(shè)立淋巴細(xì)胞門，允許客戶自己手動(dòng)設(shè)立門。l 軟件自動(dòng)根據(jù)同型對照管設(shè)定熒光象限marker建立背景熒光的界限。l 允許客戶自己手動(dòng)調(diào)節(jié)熒光象限marker，生成新的象限統(tǒng)計(jì)結(jié)果。l 依次獲取、分析相同或不同試劑組合（reagent panel）的病人樣本。l 可顯示、打印和儲存實(shí)驗(yàn)、醫(yī)生及總結(jié)報(bào)告。注意：請參閱simulset users guide（simulset用戶指南），有關(guān)體外診斷方面的軟件限制。92 simulset 圖標(biāo)圖標(biāo) 名稱 任務(wù) sign in 填寫操作者、

3、單位、負(fù)責(zé)人，以啟動(dòng)軟件 set up 設(shè)定實(shí)驗(yàn)的特殊信息 facscomp 獲取前的儀器校準(zhǔn) test prefs 輸入分析的特殊條件 patients 輸入/瀏覽病人信息 acquisition 獲取 analysis 分析 lab report 瀏覽每管結(jié)果并可手動(dòng)設(shè)門和調(diào)節(jié)熒 光象限marker。 phys report 瀏覽醫(yī)生報(bào)告，并可添加評注 summary 運(yùn)行結(jié)束后瀏覽總結(jié)報(bào)告93 simulset 文件flow cytometry standard(fcs)data file (前綴輸入號.試管編號)： simulset軟件可以獲取或讀取fcs2.0標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)文件，數(shù)據(jù)必須為

4、四參數(shù)和256分辨率。除了用 simulset做獲取以外，您也可以用cellquest獲取該標(biāo)本各管的數(shù)據(jù)文件，再用simulset做數(shù)據(jù)分析，但要求使用與simulset一致的測試項(xiàng)目 (panel) 設(shè)置。文件默認(rèn)路徑bd files:simulset files: ddmmyy folder。schedule document file (ddmmyy.sch)：日程記錄文件。記錄測試時(shí)輸入的sign in、set up、test prefs、patient及所有preferences等內(nèi)容。simulset不能自動(dòng)儲存該文件，必須從file 菜單中選擇save。 laboratory

5、report file (前綴輸入號.lab)：實(shí)驗(yàn)室報(bào)告。 為pict文件。標(biāo)本測試完成后，按照您選擇的點(diǎn)圖記錄一個(gè)標(biāo)本測試中各管結(jié)果，并按照試驗(yàn)標(biāo)本順序編號?？梢杂胒ile-open report打開該文件，可以打印，但不可以編輯。文件默認(rèn)路徑bd files:simulset files: ddmmyy folder。 physician report file (前綴輸入號.phy)：醫(yī)生報(bào)告。 為pict文件。標(biāo)本測試完成后，記錄一個(gè)標(biāo)本的試驗(yàn)結(jié)果，并按照試驗(yàn)標(biāo)本順序編號。可以用 file-open report打開該文件，可以打印，但不可以編輯。文件默認(rèn)路徑bd files:sim

6、ulset files: ddmmyy folder。 summary report file (ddmmyy.sum)：總結(jié)報(bào)告。 為text文件。試驗(yàn)結(jié)束后，將一次試驗(yàn)的所有標(biāo)本結(jié)果列表。可以用file-open report打開該文件，可打印，但不可編輯。文件默認(rèn)路徑bd files:simulset files: ddmmyy folder。 94 simulset 文件命名原則 在simulset中數(shù)據(jù)文件、實(shí)驗(yàn)報(bào)告文件、醫(yī)生報(bào)告文件的命名有一定原則。例如：病人姓名：xiejun，為第5個(gè)病人, 獲取時(shí)間為2000/11/25，數(shù)據(jù)為第二管（同型對照），以病人姓名為文件前綴。文件類型

7、 命名原則 例子數(shù)據(jù)文件 （前綴）（在patient窗口中的病人登記號）.（管號） xiejun05. 02數(shù)據(jù)文件（第一次獲取） （前綴）（在patient窗口中的病人登記號）.（管號）（代表獲取次數(shù)的字母） xiejun05. 02a數(shù)據(jù)文件（第二次獲?。?（前綴）（在patient窗口中的病人登記號）.（管號）（代表獲取次數(shù)的字母） xiejun05. 02b實(shí)驗(yàn)報(bào)告文 （前綴）（在patient窗口中的病人登記號）. lab xiejun05. lab醫(yī)生報(bào)告文件 （前綴）（在patient窗口中的病人登記號）. phy xiejun05. phy日程記錄文件 ddmmyy.sch 2

8、51100.sch總結(jié)報(bào)告文件 ddmmyy.sum 251100.sum注意:1. 一管可反復(fù)獲取達(dá)26次,但只要最后一次的數(shù)據(jù)用于統(tǒng)計(jì)計(jì)算、生成實(shí)驗(yàn)報(bào)告文件、 醫(yī)生報(bào)告文件。95 simulset獲取前的準(zhǔn)備 用beads 來運(yùn)行facscomp，調(diào)校儀器的pmt、補(bǔ)償和靈敏度。用樣本來優(yōu)化儀器條件，并將優(yōu)化條件儲存。facscomp可在simulset上運(yùn)行。在做標(biāo)本獲取前，調(diào)出以前保存的instrument settings。 在cytometer菜單中點(diǎn)擊instrument settings，調(diào)出獲取條件，文件路徑為bd file:instrument settings file:

9、calib。96 simulset獲取 961 啟動(dòng)simulset （sign in）1在蘋果菜單下點(diǎn)擊simulset ，如是第一次使用，需要做注冊。2輸入操作者姓名、單位名稱和實(shí)驗(yàn)室主任名稱。儀器自動(dòng)顯示流式細(xì)胞儀的序列號和型號。3點(diǎn)擊accept，進(jìn)入下一工作程序（setup）。962 set up 窗口 在此選擇分析的數(shù)據(jù)來源、文件名前綴、瀏覽報(bào)告的方式、儲存的內(nèi)容及位置。 1選擇數(shù)據(jù)來源。如選擇做儀器獲取，需要保證儀器與計(jì)算機(jī)連接。 from data files：對以前保存的數(shù)據(jù)文件做分析。 from cytometer ：在流式細(xì)胞儀上運(yùn)行標(biāo)本，獲得數(shù)據(jù)。在自動(dòng)門或手動(dòng)門內(nèi)默認(rèn)

10、最低淋巴細(xì)胞數(shù)為2000，但可更改。標(biāo)本獲取完畢后，軟件自動(dòng)分析數(shù)據(jù)，輸出實(shí)驗(yàn)室報(bào)告和醫(yī)生報(bào)告，保存在輸出文件中。 2確定數(shù)據(jù)文件、實(shí)驗(yàn)室報(bào)告、醫(yī)生報(bào)告等文件名前綴的使用。 前綴可以用標(biāo)本名稱sample name、標(biāo)本編號sample id、病歷號case number、日期date-ddmmyy或自定前綴custom prefix。 3確定自動(dòng)保存的文件類型及其保存位置。選擇是否保存data files, laboratory report, physician report, summary report。按location，選擇或創(chuàng)建文件保存路徑，文件默認(rèn)路徑bd files: sim

11、ulset files: ddmmyy folder (自動(dòng)生成日期目錄)。 4選擇瀏覽實(shí)驗(yàn)室報(bào)告和醫(yī)生報(bào)告的方式?？梢园磏ext閱讀報(bào)告，也可以選擇計(jì)算機(jī)停若干秒后自動(dòng)翻頁 (可以停留0-60秒鐘)。 5點(diǎn)擊accept，進(jìn)入下一工作程序（facscomp）。 在此可設(shè)置軟件的preference ： 可設(shè)置輸出、打印、細(xì)胞數(shù)和選擇panel，且所有這些可在schedule 文件中儲存。1 從simulset 菜單中選擇preference，出現(xiàn)對話框2選擇export：設(shè)定tab(適用于macintosh 軟件, 若選comma, 可在其它軟件中使用).3選擇printing：設(shè)定為nev

12、er：報(bào)告生成后不立即打印 after each entry：報(bào)告生成后立即打印 4選擇panel：設(shè)定適當(dāng)?shù)膒anel，并設(shè)定允許手動(dòng)設(shè)門、允許象限marker調(diào)整5選擇events：設(shè)定初始獲取細(xì)胞數(shù)：1000015000 設(shè)定最大獲取細(xì)胞數(shù)：50000、75000或1000006點(diǎn)擊save。 963 facscomp 窗口 facscomp：如果從儀器獲取數(shù)據(jù)，軟件自動(dòng)進(jìn)入此畫面。 選擇launch facscomp，進(jìn)行l(wèi)yse wash校正。 如果當(dāng)日已做校正，則選擇skip facscomp，進(jìn)入下一工作畫面。在做標(biāo)本獲取前，調(diào)出以前保存的instrument settings。

13、 在cytometer菜單中點(diǎn)擊instrument settings，調(diào)出獲取條件，文件路徑為bd file:instrument settings file:calib。 964 test prefs 窗口 進(jìn)行分析和報(bào)告內(nèi)容的選擇，選擇是否報(bào)告絕對計(jì)數(shù)，是否報(bào)告正常值范圍，是否選擇一致性檢測及樣本制備的方法。1 在analysis choices中選擇：percent lymphocyte conversion、three part differential 、absolute counts（選擇絕對數(shù)的來源）。2 在consistency checks中選擇：需作一致性檢測的內(nèi)容（包括

14、t+b+nk總數(shù)、所有含cd3+管的cd3均值、所有含cd8+管的cd8均值）。3 reference range report：選擇正常值范圍報(bào)告方式（百份數(shù)、絕對數(shù)）4 preparation：選擇樣本來源（溶血的全血樣本、外周血單個(gè)核細(xì)胞等） 在此可編輯reagent 和panel： panel 的編輯：panel允許您將所定義的試劑進(jìn)行組合，以便為實(shí)驗(yàn)的每管自動(dòng)選擇參數(shù)名。1點(diǎn)擊panel tools，出現(xiàn)對話框。imk-lymphocyte 的panel已存在?？商砑踊騽h除。2點(diǎn)擊reagent information 中subset，輸入相關(guān)信息，點(diǎn)擊ok。 reagent 的編輯

15、：（也可輸入?yún)⒖挤秶?，?.8）1 點(diǎn)擊reagent tools，出現(xiàn)對話框?？商砑踊騽h除reagent。2點(diǎn)擊add panel，new panel 就出現(xiàn)在panel list 中，輸入panel 名3點(diǎn)擊add ，點(diǎn)擊reagent上的cd3/cd19，點(diǎn)擊move。4重復(fù)第3步。依次將其它余下的reagent加上，點(diǎn)擊ok在此可將上述設(shè)置以schedule 文件儲存： 在file 菜單中選擇save，選擇儲存的位置，點(diǎn)擊save，文件以ddmmyy.sch保存。它包含了在set up 和test prefs中輸入的信息。965 patient 窗口1 點(diǎn)擊test prefs窗口中的

16、accept。2點(diǎn)擊patient name 并輸入病人姓名，在panel name 中選擇imk3在wbc count/lymphs（%）中輸入相應(yīng)數(shù)字，以便作絕對計(jì)數(shù)。4點(diǎn)擊run test進(jìn)入獲取步驟。在此可將調(diào)出以前保存的優(yōu)化的instrument settings 在cytometer菜單中點(diǎn)擊instrument settings，調(diào)出獲取條件，文件路徑為bd file:instrument settings file:calib。966 acquisition 窗口（數(shù)據(jù)獲?。? 點(diǎn)擊run test進(jìn)入獲取。 2插上leucogate管，點(diǎn)擊acquire，獲取一結(jié)束，實(shí)驗(yàn)報(bào)告

17、就出現(xiàn)。 一個(gè)可接受的軟件自動(dòng)設(shè)立的淋巴細(xì)胞門應(yīng)： the gate composition：% lymphocytes： 90% % monocyte： 3% % granulocyte：page: 10 6% % debris： 10% 若想提高淋巴細(xì)胞的純度，可手動(dòng)重新畫門。點(diǎn)擊fsc/ssc點(diǎn)圖，手動(dòng)畫門，然后關(guān)閉該點(diǎn)圖，所有報(bào)告中數(shù)據(jù)重新統(tǒng)計(jì)。 3點(diǎn)擊continue，插上同型對照管，點(diǎn)擊acquire，獲取一結(jié)束，實(shí)驗(yàn)報(bào)告就出現(xiàn)，若必要可調(diào)節(jié)fl1/fl2點(diǎn)圖的象限marker。 4點(diǎn)擊continue，依次插上其余管進(jìn)行獲取。全部獲取完后，點(diǎn)擊continue，打印實(shí)驗(yàn)報(bào)告。最后退出軟件。97 simulset數(shù)據(jù)分析 可分析以前獲取的list mode 數(shù)據(jù)文件。若該數(shù)據(jù)文件是用cellquest獲取的，則必須滿足下列條件：l 分辨率必須為256l 只能二色樣本l cellquest的panel必須與simulset中一致1在蘋果菜單下點(diǎn)擊simulset ，完成sign in 2點(diǎn)擊accept，進(jìn)入setup，選擇數(shù)據(jù)來源：from data files：完成其余set up 內(nèi) 容 3點(diǎn)擊accept，進(jìn)入（跳過facscomp）test prefs，完成該窗內(nèi)容。 4 點(diǎn)擊accept，進(jìn)入pat