蛙心灌流實驗報告

1、實驗二離體蛙心灌流實驗專業(yè)：學(xué)號：姓名：一、實驗?zāi)康?. 學(xué)習(xí)離體器官（蛙心）灌流的方法。2. 觀察理化因素對蛙心活動的影響。二、實驗原理蛙心的灌流：蛙心無營養(yǎng)性血管，離體之后采用人工灌流的方法，仍可保持其新 陳代謝，心臟仍能有節(jié)律的自動收縮、舒張，并維持較長時間，心肌的營養(yǎng)是通 過心臟內(nèi)膜液體的直接滲透而得。心?。菏荏w受體激動劑效應(yīng)B i腎上腺素 去甲腎上腺素心率增快、房室傳導(dǎo) 加速、心肌收縮力加 強。M乙酰膽堿心率減慢、房室傳導(dǎo) 減慢、心肌收縮力減 弱。1. 任氏液：正常對照含有 NaCI、CaCl2、KCI、NaH2PO4、 Na2HPO4和蒸餾水，其電解質(zhì)、晶體滲透壓、pH值與蛙的組織

2、液相近。2.0.65%NaCI 灌流：細胞*液Ca2+W 心肌細胞動作電b期間Ca3+內(nèi)流”心肌細胞胞漿C屏+濃度*心肌收縮力X3.2%CaCb 灌流:心率CZ細胞外液濃度顯著升高工作細胞動作電位期間6內(nèi)流卄自律性個心肌收縮力竹肌漿cF濃度卅肌漿cf濃度 持續(xù)升高CF與肌鈣* 蛋白結(jié)合數(shù)量竹C與肌鈣蛋白 只結(jié)合不解離心肌持續(xù)收縮膜內(nèi)外C注濃度梯度增大慢反應(yīng)細胞4期 自動去極速度4.1%KCl 灌流：痂外液K議皮魏升高K期制C你菰C護的興奮J嫦 裁離用減小靜息電位與龜位 平的電側(cè)小 H I 月心肌細瞅離牆細胞外液K*濃度顯著升高膜內(nèi)外衣濃度梯度戒小靜息電位絕對值減小至-55 mVNa通道失活心肌

3、細胞興奮性喪失心臟停搏于舒張找態(tài)5.1:10000 E 灌流腎上腺素(E)心肌細胞膜加受體結(jié)合侖議凸與肌鈣蛋白親細胞膜對C尹逋透性* 和力*肌漿網(wǎng)攝匚滬速度*1復(fù)極期肌漿C成濃度降低速度齊4期自動去極化速度卒心肌舒張專6.1:10000 Ach 灌流自律性卒心率個肌漿網(wǎng)對Ac滬通透性：動作電位期4間C尹內(nèi)流Ix心肌收縮力竹乙酰膽喊(Adi)心肌細胞膜M受體結(jié)合抑制鈣通道細胞膜對K*通透性專對透性*竇房結(jié)細胞最大復(fù)極電位絕對值增大 4期K*外流增加自律性*動作電位期間C”內(nèi)流44心肌收縮力曲心率*7. 心得安B受體阻斷劑，抑制腎上腺素與 B受體結(jié)合，使E不能發(fā)揮作用。8. 阿托品M受體阻斷劑，抑

4、制Ach減慢心率，加速房室傳導(dǎo)，增加心房收縮力三、實驗器材離體蛙心任氏液、I % KCI溶液、2%CaCW溶液、0.65%NaCI溶液、1:10000腎上腺素、1:10000乙酰膽堿、心得安、阿托品四、實驗步驟1. 離子試劑任氏液清洗任氏液清洗任氏劑 0.65%NaCI2%CaCl21%KCI任氏液2. 藥物試劑任氏液清洗任氏液清洗任氏液清洗E心得安+EAch -阿托品+Ach 任氏液五、結(jié)果與分析 分析：細胞外液中Ca2+濃度降低，2期Ca2+內(nèi)流減少，胞漿中Ca2+減少，心肌收 縮力降低。圖1正常脈搏曲線圖2 0.65% NaCI灌流脈搏曲線心率：38次/min 最大收縮力：3.5g 最小

5、收縮力：1.1g圖3 2% CaCb灌流脈搏曲線分析：心肌的舒縮活動與心肌肌漿中的鈣離子濃度的高低有關(guān)。心肌肌漿網(wǎng)不發(fā)達，儲鈣能力差，易受細胞外鈣離子濃度高低影響。細胞外液中Na+與。&2+有競爭性抑制，細胞外液Ca2+濃度升高，細胞興奮時內(nèi)流Ca2+增加，心肌收縮力增 強。慢反應(yīng)細胞4期去極速度加快，心率增快。分析：K+與Cf在細胞膜上有競爭性抑制，細胞外液中 K：濃度升高，K+抑制細胞 膜對Cf轉(zhuǎn)運，因此進入細胞內(nèi)CeT降低，心肌的興奮一收縮耦聯(lián)作用減小，心肌收縮力減弱心率：35次/min 最大收縮力：3.5g 最小收縮力：0.9g圖5腎上腺素灌流脈搏曲線分析：腎上腺素與心肌細胞膜上的 沏

6、受體結(jié)合，心肌細胞和肌漿網(wǎng)膜CeT通透性 增強，肌漿中Cf濃度升高，心肌收縮力增強。而且腎上腺素使肌鈣蛋白與鈣離 子親和力下降，肌鈣蛋白對鈣離子的釋放增強，肌漿網(wǎng)膜攝取鈣離子的速度加快， 鈉-鈣離子的交換增加，復(fù)極期向細胞外排出鈣離子增多，心肌舒張速度增快， 整個舒張過程明顯加強。分析：心得安是B1受體阻斷劑，能夠抑制腎上腺素與 B1受體結(jié)合，使E不能 發(fā)揮作用，因此心率及心肌收縮力保持不變。圖7 乙酰膽堿灌流脈搏曲線圖8 阿托品+Ach灌流脈搏曲線分析：乙酰膽堿與心肌細胞膜上的 M受體結(jié)合，心肌細胞膜K通道的通透性增強, 促進K+外流，動作電位期間cf內(nèi)流減少，心肌收縮力降低。同時乙酰膽堿可

7、直 接抑制CaT通道，導(dǎo)致Cf內(nèi)流減少，心肌收縮力降低。心率：34次/min 最大收縮力：2.5g 最小收縮力：l.lg 分析：阿托品是M受體阻斷劑，能夠抑制Ach減慢心率，加速房室傳導(dǎo)，增加心 房收縮力，因此心率及心肌收縮力保持不變。六、討論1. 為何常用離體蛙心，而不常用離體哺乳類動物心臟做心臟灌流實驗？蛙類的某些基本生命活動和生理功能與哺乳類動物有相似之處，它的離體組 織、器官的生活條件比較簡單，易于控制和掌握，來源豐富且價格低廉。離體蛙 心不需要恒溫和特殊的供氧設(shè)備，因此常被選作心臟灌流實驗。而哺乳類心臟生 活條件要求高，離體心臟灌流需要恒溫環(huán)境，恒壓或恒流灌流、供氧。實驗影響 因素多

8、、設(shè)備多，心臟離體后存活時間較短。因此一般學(xué)生實驗較少用哺乳類動 物心臟做離體心臟灌流實驗。2. 離體蛙心為什么會節(jié)律性跳動？把離體和脫離神經(jīng)支配、體液因素影響的動物心臟保持在適宜的環(huán)境中，在 一定時間內(nèi)仍能產(chǎn)生節(jié)律性興奮和收縮活動， 這是由于心臟的靜脈竇能自動按一 定的興奮節(jié)律產(chǎn)生興奮，并傳導(dǎo)到心房和心室，引起整個心臟又節(jié)律的興奮和收 縮。靜脈竇能產(chǎn)生節(jié)律性興奮是由于其自律細胞在復(fù)極完畢后，立即開始自動的緩慢的去極化，使膜電位逐漸減小，當達到閾電位水平時，便爆發(fā)動作電位。3. 蛙心插管插入心室時，是在心臟舒張期插入還是在心臟收縮期插入？為什么？蛙心插管插入心室時，應(yīng)在心縮期插入。這是因為主動

9、脈開口處有半月瓣， 當心室收縮時，半月瓣正好打開，此時主動脈與心室腔相通，插管容易順勢插入 心室。而在心室舒張期，半月瓣處于關(guān)閉狀態(tài)，對插管產(chǎn)生阻力，不利于插入， 強行插入易損傷心肌組織。4. 實驗過程中，為什么必須保持蛙心插管內(nèi)液面高度的恒定？液面過高過低會產(chǎn)生什么影響？在實驗中，蛙心插管內(nèi)液面的高度發(fā)生變化，心臟收縮曲線會發(fā)生相應(yīng)的變 化。心肌縮短幅度和速度即受前負荷的影響，也受后負荷的制約。插管內(nèi)液面高 度所產(chǎn)生的壓力，在心室舒張末期是作用于心肌的前負荷，這個前負荷決定了心 肌在收縮之前的初長度。因此根據(jù)心肌Starling 心肌定律，液面高度的變化將 導(dǎo)致心肌收縮強度的改變。心室開始收

10、縮時，插管內(nèi)液體產(chǎn)生的壓力又成為心肌 收縮時承受的后負荷，后負荷改變會使心肌收縮的幅度和速度發(fā)生變化。液面過高，心縮曲線幅度降低。過高的液面使心室前負荷超過最適前負荷， 心肌收縮強度不在增加或下降。而過高的后負荷卻使心肌縮短幅度和速度大大下 降。液面過低，心室收縮曲線幅度也會降低，前負荷過小，導(dǎo)致心肌收縮強減小 的效應(yīng)比后負荷減小的效應(yīng)要強。因此試驗中選取一最適液面高度，并保持這一 液面高度，以便取得較好的實驗結(jié)果。5. 任氏液為何能維持離體蛙心較長時間的跳動？怎樣才能使離體蛙心存活時間長？因為任氏液是常規(guī)的生理代用液。它的組成與體液相近，具有能維持生物體 的正常生命活動的功能。它與體液等滲具

11、有相同的PH值，并含有能量、營養(yǎng)物, 而且含有生物體心肌波動所需要的離子，如：K+、Na+ Ca2+等，并且等濃度，故能維持蛙心較長時間的跳動?？梢酝ㄟ^用與蛙體液相近的生理代用液來使蛙心 長時間存活。6. 蛙心灌流時，蛙心心肌以何種方式獲得營養(yǎng)？蛙心心肌可以通過擴散的方式從任氏液中獲得葡萄糖，以維持心肌的能量供 應(yīng)，同時又可以通過產(chǎn)能長生 ATP進而參與主動運輸過程，從而從任氏液中獲 得更多的離子或營養(yǎng)物質(zhì)7. 蛙心灌流實驗中，為什么不能改變蛙心與換能器連線的張力？改變蛙心與換能器連線的張力會影響蛙心收縮幅度，太緊心臟會停止，太松 換能器反應(yīng)不明顯。”可見，一個人的心胸和眼光，決清代 紅頂商人”胡雪巖說： 做生意頂要緊的是眼光，看得到一省，就能做一省的生意；看得到天下，就能做天下的生意；看得到外國，就能做外國的生意。定了他志向的短淺或高遠；一個人的希望和夢想，決定了他的人生暗淡或輝煌。人生能有幾回搏，有生不搏待何時！所有的機遇和成功，都在充滿陽光，充滿希望的大道之上！我們走過了黑夜，就迎來了黎明；走過了荊棘，就迎來了花叢；走過了坎坷，就走出了泥濘；走過了失敗，就走向了成功！一個人只要心存希望，堅強堅韌，堅持不懈，勇往直前地去追尋，去探索，去拼搏，他總有一天會成功。正