輸血相容性檢測

1、.1 輸血相容性檢測輸血相容性檢測 .2 內內 容容 提提 要要 一一 二二 三三 紅細胞抗原抗體檢測技術紅細胞抗原抗體檢測技術 抗體的篩選及鑒定抗體的篩選及鑒定 交叉配血交叉配血 四四抗篩和配血結果分析抗篩和配血結果分析 五五 案例分析案例分析 .3 紅細胞抗原抗體檢測技術紅細胞抗原抗體檢測技術 u鹽水介質凝集試驗鹽水介質凝集試驗 u抗人球蛋白試驗抗人球蛋白試驗 u酶介質凝集試驗酶介質凝集試驗 u凝聚胺試驗凝聚胺試驗 u微柱凝膠免疫試驗微柱凝膠免疫試驗 .4 u鹽水介質凝集試驗鹽水介質凝集試驗 鹽水介質中紅細胞上的抗原決定簇與相應抗鹽水介質中紅細胞上的抗原決定簇與相應抗 體分子上的抗原結合位

2、點結合，體分子上的抗原結合位點結合，交叉聯(lián)結形交叉聯(lián)結形 成肉眼可見的凝集。成肉眼可見的凝集。 用于用于IgMIgM抗體抗體的檢出、鑒定、鹽水配血試驗以的檢出、鑒定、鹽水配血試驗以 及血型的鑒定。及血型的鑒定。 當當特異性的特異性的IgGIgG類類抗抗A A、抗、抗B B的濃度足夠大時，的濃度足夠大時， 在鹽水介質里也能與相應的紅細胞發(fā)生凝集在鹽水介質里也能與相應的紅細胞發(fā)生凝集 反應，與紅細胞表面抗原位點數(shù)目和抗原決反應，與紅細胞表面抗原位點數(shù)目和抗原決 定簇位置有關。定簇位置有關。 .5 方法：方法：玻片法玻片法- -便于顯微鏡觀察結果便于顯微鏡觀察結果 試管法試管法- -適用于不同溫度、

3、便于洗滌適用于不同溫度、便于洗滌 反應溫度：反應溫度：4 42222 臨床意義：鹽水凝集試驗陽性，并在臨床意義：鹽水凝集試驗陽性，并在3737也也 有活性的抗體有意義。室溫有活性，有活性的抗體有意義。室溫有活性，3737無無 活性者臨床意義不大。活性者臨床意義不大。 優(yōu)點：簡便、快捷、直觀。優(yōu)點：簡便、快捷、直觀。 缺點：不能發(fā)現(xiàn)不完全抗體。缺點：不能發(fā)現(xiàn)不完全抗體。 u鹽水介質凝集試驗鹽水介質凝集試驗 .6 抗人球蛋白試驗是抗人球蛋白試驗是19451945年由年由CoombsCoombs等人建等人建 立的，又稱立的，又稱CoombsCoombs試驗?？谷饲虻鞍自囼炘囼灐？谷饲虻鞍自囼?的建立

4、在血型血清學上有著非常重要的意義。的建立在血型血清學上有著非常重要的意義。 分為直接抗人球蛋白試驗（分為直接抗人球蛋白試驗（DATDAT）和間接抗）和間接抗 人球蛋白試驗（人球蛋白試驗（IATIAT）。）。 u抗人球蛋白試驗抗人球蛋白試驗 .7 IgGIgG類血型抗體類血型抗體（主要是免疫抗體，如（主要是免疫抗體，如RhRh血型血型 抗體）分子量小，與紅細胞相應抗原結合后，抗體）分子量小，與紅細胞相應抗原結合后， 在鹽水介質中不出現(xiàn)肉眼可見的凝集反應，稱在鹽水介質中不出現(xiàn)肉眼可見的凝集反應，稱 之為不完全抗體，但在加入抗之為不完全抗體，但在加入抗-IgG-IgG后，以其搭后，以其搭 橋作用則可

5、出現(xiàn)凝集反應。橋作用則可出現(xiàn)凝集反應。 補體補體成分在體內被紅細胞抗原抗體復合物激活成分在體內被紅細胞抗原抗體復合物激活 以后，結合在紅細胞表面。在體外含補體的多以后，結合在紅細胞表面。在體外含補體的多 克隆抗體，或抗克隆抗體，或抗C3bC3b、抗、抗C3dC3d等單特異性抗體與等單特異性抗體與 補體致敏的紅細胞反應，使之凝集也稱為抗球補體致敏的紅細胞反應，使之凝集也稱為抗球 蛋白試驗。蛋白試驗。 抗人球蛋白試驗原理抗人球蛋白試驗原理 .8 DATDAT是檢測體內致敏紅細胞的一種方法，是檢測體內致敏紅細胞的一種方法，用于用于 檢查紅細胞是否已被不完全抗體所致敏，檢查紅細胞是否已被不完全抗體所致

6、敏，尤其尤其 是是IgGIgG和和C3dC3d包被的紅細胞。包被的紅細胞。 應用：應用： HDNHDN和自身免疫性溶血性貧血的診斷和自身免疫性溶血性貧血的診斷 紅細胞被藥物抗體致敏的檢查紅細胞被藥物抗體致敏的檢查 急性和遲發(fā)性溶血性輸血反應的檢查急性和遲發(fā)性溶血性輸血反應的檢查 直接抗人球蛋白試驗直接抗人球蛋白試驗 .9 .10 IATIAT是是檢測血清中不完全抗體的一種，檢測血清中不完全抗體的一種，用于測用于測 定在體外能引起紅細胞致敏的抗體。定在體外能引起紅細胞致敏的抗體。 應用：應用： 血型的鑒定，如血型的鑒定，如RhRh血型血型 抗體的檢出和鑒定抗體的檢出和鑒定 交叉配血交叉配血 間接

7、抗人球蛋白試驗間接抗人球蛋白試驗 .11 .12 原理：紅細胞表面有豐富的唾液酸，帶有負電原理：紅細胞表面有豐富的唾液酸，帶有負電 荷，是紅細胞相互排斥的原理。蛋白水解酶能荷，是紅細胞相互排斥的原理。蛋白水解酶能 消化破壞這種唾液酸，減少紅細胞表面的負電消化破壞這種唾液酸，減少紅細胞表面的負電 荷以及紅細胞之間的排斥力，縮短了紅細胞之荷以及紅細胞之間的排斥力，縮短了紅細胞之 間的間距，使間的間距，使IgGIgG抗體分子能與有相應抗原的抗體分子能與有相應抗原的 紅細胞產(chǎn)生凝集紅細胞產(chǎn)生凝集 常用的酶（常用的酶（0.5%0.5%）：菠蘿酶、木瓜酶、胰酶、）：菠蘿酶、木瓜酶、胰酶、 無花果酶無花果酶

8、 u酶介質凝集試驗酶介質凝集試驗 .13 優(yōu)點：優(yōu)點： 酶法能顯著增強一些抗原抗體系統(tǒng)的反應活性，酶法能顯著增強一些抗原抗體系統(tǒng)的反應活性， RhRh和和KiddKidd系統(tǒng)最明顯系統(tǒng)最明顯 缺點：缺點： 酶法處理酶法處理RBCRBC，蛋白酶會使，蛋白酶會使RBCRBC的抗原結構破的抗原結構破 壞和變性（壞和變性（MM、N N、FyFya a、FyFyb b） 操作繁復，少數(shù)人對酶液過敏操作繁復，少數(shù)人對酶液過敏 u酶介質凝集試驗酶介質凝集試驗 .14 原理：原理： 凝聚胺是一種多價陽離子聚合物，在溶液中有凝聚胺是一種多價陽離子聚合物，在溶液中有 多個陽離子基團，能中和紅細胞表面的負電荷，多個

9、陽離子基團，能中和紅細胞表面的負電荷， 并借助正負電荷的作用，并借助正負電荷的作用，引起紅細胞的非特異引起紅細胞的非特異 性凝集。性凝集。 當紅細胞與血清在低離子介質中孵育后，當紅細胞與血清在低離子介質中孵育后，IgGIgG 抗體與紅細胞上相應的抗原結合在凝聚胺的作抗體與紅細胞上相應的抗原結合在凝聚胺的作 用下發(fā)生凝聚。凝集和凝聚在表面上不能區(qū)分，用下發(fā)生凝聚。凝集和凝聚在表面上不能區(qū)分， 再加入枸櫞酸鈉重懸液，枸櫞酸根的負電荷與再加入枸櫞酸鈉重懸液，枸櫞酸根的負電荷與 凝聚胺上的正電荷中和，非特異性凝集現(xiàn)象消凝聚胺上的正電荷中和，非特異性凝集現(xiàn)象消 失，而真正的凝集不會消失。失，而真正的凝集

10、不會消失。 u凝聚胺試驗凝聚胺試驗 .15 .16 u微柱凝膠試驗微柱凝膠試驗 原理：微柱凝膠技術是用特定的化學物質做原理：微柱凝膠技術是用特定的化學物質做 成微型凝膠柱，柱的上端有一個加樣反應室。成微型凝膠柱，柱的上端有一個加樣反應室。 抗原抗體反應后離心，凝膠柱起過篩作用，抗原抗體反應后離心，凝膠柱起過篩作用， 紅細胞凝集塊不能通過凝膠的間隙而留在凝紅細胞凝集塊不能通過凝膠的間隙而留在凝 膠的上部，未凝集的紅細胞通過凝膠的間隙，膠的上部，未凝集的紅細胞通過凝膠的間隙， 沉積到底部。沉積到底部。 .17 微柱凝膠免疫反應的本質：凝集反應微柱凝膠免疫反應的本質：凝集反應 紅細胞抗原與相應抗體反

11、應出現(xiàn)凝集。根據(jù)紅細紅細胞抗原與相應抗體反應出現(xiàn)凝集。根據(jù)紅細 胞在膠質介質中的位置肉眼判斷。胞在膠質介質中的位置肉眼判斷。 .18 u微柱凝膠試驗微柱凝膠試驗 特異性膠：抗特異性膠：抗A A、 抗抗B B、抗、抗D D 中性膠：對照孔、中性膠：對照孔、 反定型反定型 抗人球蛋白膠：抗人球蛋白膠： 抗篩、交叉配血抗篩、交叉配血 .19 u幾種方法的比較幾種方法的比較 方法方法優(yōu)點優(yōu)點缺點缺點 鹽水法鹽水法操作方便操作方便, ,費用低廉費用低廉只能檢出不相配合完全抗體只能檢出不相配合完全抗體, ,不能檢不能檢 出不相配合的不完全抗體出不相配合的不完全抗體 抗球蛋抗球蛋 白法白法 檢測不完全抗體最

12、靈敏檢測不完全抗體最靈敏 的方法的方法 操作復雜、不利于急診檢查和血庫的操作復雜、不利于急診檢查和血庫的 大批量工作大批量工作 酶法酶法增強增強Rh Rh 、KiddKidd系統(tǒng)系統(tǒng)破壞破壞MM、N N、S S、s s、Fy(a) Fy(a) 、Fy(b)Fy(b)抗原抗原 結構結構, ,易失活易失活, ,壽命短壽命短, ,反應時間長反應時間長 凝聚胺凝聚胺 法法 方便、應用最廣方便、應用最廣KellKell系統(tǒng)部分抗體如抗系統(tǒng)部分抗體如抗K K 、抗、抗 kp(a) kp(a) 、 抗抗kp(b)kp(b)檢測不出檢測不出, ,需要抗球蛋白試驗需要抗球蛋白試驗. . 且肝素對其有影響且肝素對

13、其有影響, ,易引起假陰性易引起假陰性. . 微柱凝微柱凝 膠法膠法 國際安全輸血檢查的推國際安全輸血檢查的推 薦方法，靈敏度高、重薦方法，靈敏度高、重 復性好、特異性好、檢復性好、特異性好、檢 測結果可較長時間保存測結果可較長時間保存 費用高費用高 .20 抗體的篩選及鑒定抗體的篩選及鑒定 有臨床意義的抗體：能引起新生兒溶血病、有臨床意義的抗體：能引起新生兒溶血病、 引發(fā)溶血性輸血反應，或者使輸入的紅細胞引發(fā)溶血性輸血反應，或者使輸入的紅細胞 存活期減少的在存活期減少的在3737有反應的同種異型抗體有反應的同種異型抗體 不規(guī)則抗體：抗不規(guī)則抗體：抗A A，抗，抗B B以外的抗體以外的抗體 包

14、括：同種抗體和自身抗體包括：同種抗體和自身抗體 .21 u抗體篩選方法抗體篩選方法 鹽水介質凝集法鹽水介質凝集法 抗人球蛋白法抗人球蛋白法 凝聚胺法凝聚胺法 微柱凝膠法微柱凝膠法 .22 結果的判讀與解釋結果的判讀與解釋 溶血和血液凝集意義相同，都是抗原抗體反溶血和血液凝集意義相同，都是抗原抗體反 應陽性結果。先觀察有無溶血，后觀察有無應陽性結果。先觀察有無溶血，后觀察有無 凝集。凝集。 記錄結果，并與以前結果對照。記錄結果，并與以前結果對照。 抗體篩選試驗不一定能檢出所有有臨床意義抗體篩選試驗不一定能檢出所有有臨床意義 的抗體。一些低頻抗原的抗體或有劑量效應的抗體。一些低頻抗原的抗體或有劑量

15、效應 的抗體，可能被漏檢。的抗體，可能被漏檢。 .23 u抗體鑒定抗體鑒定 通過篩選，抗體一經(jīng)檢出，應進一步作抗體鑒通過篩選，抗體一經(jīng)檢出，應進一步作抗體鑒 定試驗，以確定其特異性。定試驗，以確定其特異性。 自身細胞檢查自身細胞檢查 - - 排除非特異性排除非特異性 譜紅細胞檢查譜紅細胞檢查 .24 u抗體鑒定抗體鑒定 譜紅細胞：譜紅細胞： 一般是由一般是由8-168-16人份的已知血型表現(xiàn)型人份的已知血型表現(xiàn)型O O型紅細型紅細 胞組成，具有各種不同的抗原成分，根據(jù)譜胞組成，具有各種不同的抗原成分，根據(jù)譜 紅細胞的反應格局一般可以鑒定常見的抗體。紅細胞的反應格局一般可以鑒定常見的抗體。 方法

16、：方法： 在鹽水法基礎上、靈活應用白蛋白介質法、在鹽水法基礎上、靈活應用白蛋白介質法、 酶技術及抗人球蛋白實驗。酶技術及抗人球蛋白實驗。 .25 交叉配血交叉配血 主側：主側：受血者血清受血者血清+ +供者紅細胞供者紅細胞 檢測對供者紅細胞起反應的抗體檢測對供者紅細胞起反應的抗體 次側：次側：受血者紅細胞受血者紅細胞+ +供者血清供者血清 檢測對受者紅細胞起反應的抗體檢測對受者紅細胞起反應的抗體 自身對照：自身對照：受血者紅細胞受血者紅細胞+ +受血者血清受血者血清 排除自身抗體、直接抗球蛋白試排除自身抗體、直接抗球蛋白試 驗陽性及紅細胞緡錢狀凝集驗陽性及紅細胞緡錢狀凝集 .26 緡錢狀凝集緡

17、錢狀凝集 也稱串錢狀凝集，是一種假凝集，紅細胞像也稱串錢狀凝集，是一種假凝集，紅細胞像 許多錢幣堆積在一起。許多錢幣堆積在一起。 血漿球蛋白異常，如高球蛋白血癥、巨球蛋血漿球蛋白異常，如高球蛋白血癥、巨球蛋 白血癥。使用大分子右旋糖酐或羥乙基淀粉白血癥。使用大分子右旋糖酐或羥乙基淀粉 擴容。擴容。 將血清適當稀釋。將血清適當稀釋。 .27 抗篩和配血結果分析抗篩和配血結果分析 主側交叉配血不相合的原因：主側交叉配血不相合的原因： 病人或供血者病人或供血者ABOABO血型錯誤血型錯誤 病人血清中存在同種抗體或自身抗體，與供病人血清中存在同種抗體或自身抗體，與供 血血 者紅細胞上的相應抗原反應。者

18、紅細胞上的相應抗原反應。 供血者紅細胞上已經(jīng)包被了抗體，導致抗人供血者紅細胞上已經(jīng)包被了抗體，導致抗人 球蛋白試驗陽性。球蛋白試驗陽性。 病人血清異常，如白蛋白球蛋白比例不正病人血清異常，如白蛋白球蛋白比例不正 常引起緡錢狀假凝集，血清中存在高分子聚合常引起緡錢狀假凝集，血清中存在高分子聚合 物的血漿擴容劑引起假陽性（用鹽水添加試驗物的血漿擴容劑引起假陽性（用鹽水添加試驗 來解決）。來解決）。 試驗系統(tǒng)被污染。試驗系統(tǒng)被污染。 .28 抗篩和配血結果分析抗篩和配血結果分析 主側：主側：+ +，自身對照：，自身對照：- -，抗篩：，抗篩：- - 患者或供血者患者或供血者ABOABO血型錯誤血型錯

19、誤重新定型重新定型 患者血清中可能含患者血清中可能含ABOABO抗體抗體檢查病人亞檢查病人亞 型、輸血史及移植史型、輸血史及移植史 患者血清中有抗體，但篩選細胞上無相應患者血清中有抗體，但篩選細胞上無相應 抗原抗原對患者血清進行抗體鑒定對患者血清進行抗體鑒定 供血者紅細胞直抗試驗陽性供血者紅細胞直抗試驗陽性檢查供血者檢查供血者 直抗試驗直抗試驗 .29 抗篩和配血結果分析抗篩和配血結果分析 主側：主側：+ +，自身對照：，自身對照：- -，抗篩：，抗篩：+ + 患者血清中的同種抗體與供血者紅細胞上相患者血清中的同種抗體與供血者紅細胞上相 應抗原反應應抗原反應對患者血清進行抗體鑒定，選對患者血清

20、進行抗體鑒定，選 擇無相應抗原的血擇無相應抗原的血 .30 抗篩和配血結果分析抗篩和配血結果分析 主側：主側：+ +，自身對照：，自身對照：+ +，抗篩：，抗篩：+ + 病人血清中可能同時存在自身抗體和同種病人血清中可能同時存在自身抗體和同種 抗體抗體對病人血清進行抗體吸收及鑒定，用對病人血清進行抗體吸收及鑒定，用 吸收后血清配血吸收后血清配血 病人血清不正常：白病人血清不正常：白/ /球比不正常、血漿擴球比不正常、血漿擴 容物容物鹽水添加試驗鹽水添加試驗 試驗系統(tǒng)污染試驗系統(tǒng)污染重新抽樣檢測重新抽樣檢測 .31 抗篩和配血結果分析抗篩和配血結果分析 次測交叉配血不相合的原因：次測交叉配血不相合的原因： 供血者血漿中存在針對患者紅細胞抗原的供血者血漿中