實(shí)驗(yàn)七 實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

1、實(shí)驗(yàn)七、逆境對(duì)植物的傷害及 植物對(duì)逆境的適應(yīng)性調(diào)節(jié) 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 磺基水楊酸對(duì)脯氨酸有特定反應(yīng)，當(dāng)用磺基水楊酸提取植物 樣品時(shí)，脯氨酸便游離于磺基水楊酸溶液中。然后用酸性茚 三酮加熱處理后，茚三酮與脯氨酸反應(yīng)，生成穩(wěn)定的紅色化 合物，再用甲苯處理，則色素全部轉(zhuǎn)移至甲苯中，色素的深 淺即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度， 即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出脯氨酸的含量。 脯氨酸的測(cè)定 脯氨酸的測(cè)定 （一）材料及試劑 1. 材料：植物葉片。 2 .試劑及配制： 2.5酸性茚三酮溶液配制：將1.25g茚三酮溶于30ml冰醋酸 和20ml 6molL1磷酸中，攪拌加熱（70）溶解，貯于冰 箱中

2、。(配置的酸性茚三酮溶液僅在24 h內(nèi)穩(wěn)定，因此最好現(xiàn)用現(xiàn)配。) 3磺基水楊酸配配制：3g磺基水楊酸加蒸餾水溶解后定容 至100ml。 100gmL -1脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)母液配制：精確稱取20mg脯氨酸， 倒入小燒杯內(nèi)，用少量蒸餾水溶解，再倒入200ml容量瓶中， 加蒸餾水定容至刻度（為100gmL1脯氨酸母液）。 冰醋酸；甲苯。 （二）實(shí)驗(yàn)步驟（二）實(shí)驗(yàn)步驟 1.脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 用100gmL 1脯氨酸母液配制成0、1、2、3、4、5、 6、7、8、9、10g /mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。取標(biāo)準(zhǔn)溶液2mL，然 后向各管分別加入2ml 3的磺基水楊酸溶液，加入2ml冰 醋酸及4mL

3、 2.5酸性茚三酮試劑，在沸水浴中加熱1h， 溶液即呈紅色。冷卻后加入4ml甲苯，搖蕩30秒鐘，靜置 片刻，取上層液 ，以甲苯溶液為空白對(duì)照，在520nm波長(zhǎng) 處測(cè)定吸光度（A）值。 OD值為縱坐標(biāo)，脯氨酸濃度（g /mL ）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo) 準(zhǔn)曲線。 回歸方程式 2. 樣品的測(cè)定 2.1脯氨酸的提取 稱取不同處理的植物葉片各0.5g，分別置大試管中，然 后向各管分別加入5mL3的磺基水楊酸溶液，在沸水浴中 提取10min（提取過程中要經(jīng)常搖動(dòng)），冷卻后3000r/min 離心10min。取上清液待測(cè)。 2.2測(cè)定 吸取2ml提取液于帶玻塞試管中，加入2mL 去離子水， 2mL冰醋酸及4mL 2

4、.5酸性茚三酮試劑，在沸水浴中加熱 1h，溶液即呈紅色。冷卻后加入4mL甲苯，搖蕩30秒鐘， 靜置片刻。 用吸管輕輕吸取上層脯氨酸紅色甲苯溶液于比色杯中，以 甲苯溶液為空白對(duì)照，在520mm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（A）值。 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣品測(cè)定液中脯氨酸的含量，按下公式計(jì)算樣品中脯 氨酸含量： X 提取液總量（mL） 脯氨酸含量（gg 1 Fw） 樣品鮮重（g） 測(cè)定時(shí)提取液用量（mL） 公式中：X 從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得的脯氨酸含量（g/mL） （三）計(jì)算結(jié)果（三）計(jì)算結(jié)果 依據(jù)回歸方程式計(jì)算得到脯氨酸含量（g/mL ） 相對(duì)電導(dǎo)率測(cè)定 ? 取根系或植物葉片，自來水洗凈，蒸餾水沖洗干凈，吸干取根系或

5、植物葉片，自來水洗凈，蒸餾水沖洗干凈，吸干 表面水分。秤取1g，剪成長(zhǎng)約1cm小段。 ? 將材料裝到30ml指形管內(nèi)，加入去離子水15ml，抽真空至 材料下沉，室溫放置12h。測(cè)電導(dǎo)率。測(cè)電導(dǎo)率R1。（用根系時(shí)可以。（用根系時(shí)可以 不用抽真空） ? 將指形管沸水浴1520min（注意加蓋防止水分蒸發(fā)），以 充分殺死植物組織，取出放入自來水中冷卻至室溫，測(cè)電 導(dǎo)率R2。 ? 相對(duì)電導(dǎo)率=R1R2100% 植物含水量的測(cè)定 ? 1、取成熟植物葉片，剪成適當(dāng)大小，迅速稱量鮮重 Wf（1g）。 ? 2、將植物材料浸入蒸餾水并置于4冰箱中數(shù)小時(shí)至 恒重（因植物材料而異） 。 ? 3、將材料從水中取出，用吸水紙迅速吸去材料表面水 分，稱取其飽和鮮重Wfs。 （12h以上） ? 4、將上述材料放入一信封內(nèi)，放入烘箱中，在105 下殺青30min，然后將溫度調(diào)到80烘至恒重。 ? 5、稱取材料干重Wd。 自然含水量= 100 鮮重 干重鮮重? 相對(duì)含水量（Relative Water Content， RWC） 植物組織含水量的指標(biāo) RWC = 飽和含水量 實(shí)際含水量 自然鮮重-干重 水飽和鮮重-干重 = 100 100 植物含水量的測(cè)定 組織飽和含水量有較好的重復(fù)性，而組織的鮮重、干重不太穩(wěn)定（鮮 重常隨時(shí)間及處理?xiàng)l件而有變化）。 蒽酮試劑：稱取 1.0