杜泊綿羊超數(shù)排卵與胚胎移植試驗(yàn)

1、杜泊綿羊超數(shù)排卵與胚胎移植試驗(yàn)王金文 張果平 李煥玲 等摘要選純種杜泊綿羊經(jīng)產(chǎn)母羊22只為供體，通過實(shí)施同期發(fā)情和超排處理，20只可利用供體沖出胚胎153枚，其中可用胚胎104枚，平均每只供體采得可用胚胎5.20枚。選小尾寒羊經(jīng)產(chǎn)母羊90只為受體，經(jīng)同期發(fā)情處理，對(duì)有黃體發(fā)育的母羊72只實(shí)施胚胎移植手術(shù)。結(jié)果表明，移植單胚40只受體的受胎率47.50%，移植雙胚32只受體的受胎率62.50%，平均受胎率54.17%。共產(chǎn)羔40只，每2.60枚胚胎產(chǎn)1只羔羊，每只供體羊沖胚1次繁殖2只羔羊。關(guān)鍵詞杜泊綿羊超數(shù)排卵胚胎移植杜泊綿羊（dorpersheep）原產(chǎn)于南非，黑頭白身軀，體軀成桶形，背腰寬

2、平，后軀豐滿，肌肉特別發(fā)達(dá)，具有典型的肉用體形。杜泊綿羊具有很強(qiáng)的適應(yīng)性和抗病力，而且特別耐粗飼，對(duì)低品質(zhì)牧草、秸桿等有較高的利用率。杜泊綿羊生長(zhǎng)發(fā)育快，產(chǎn)肉力高，成年公羊體重100120kg，母羊90100kg。4月齡羔羊體重可達(dá)3640kg，平均日增重300g以上，胴體重1620kg。我所于2002年從國(guó)外引進(jìn)杜泊羊并與小尾寒羊母羊開展雜交，雜一代公、母羊5月齡平均體重48.9kg，平均日增重306g；屠宰率50.6%，凈肉率76.2%，料肉比4.25：1。杜泊綿羊被譽(yù)為“鉆石級(jí)品牌”和“二十一世紀(jì)最具競(jìng)爭(zhēng)力的肉用綿羊”。但是杜泊羊繁殖力相對(duì)較低，平均產(chǎn)羔率為150%左右，基本上是兩年才產(chǎn)

3、3只羔羊。自然繁殖很難達(dá)到快速擴(kuò)大種群的目的，造成杜泊羊種羊數(shù)量少，價(jià)格偏高，無法在生產(chǎn)中推廣，影響了良種產(chǎn)業(yè)化進(jìn)程和經(jīng)濟(jì)效益的提高。通過胚胎移植技術(shù)，對(duì)杜泊羊供體進(jìn)行超數(shù)排卵處理，并借小尾寒羊之腹懷胎，能夠提高種羊的利用率，快速擴(kuò)大杜泊綿羊種羊的數(shù)量。在開展多批次試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，本課題組通過對(duì)杜泊羊進(jìn)行超排處理和移植試驗(yàn)，取得了較好的效果。1材料1.1供體羊選23歲純種杜泊綿羊經(jīng)產(chǎn)母羊，繁殖機(jī)能正常。1.2受體羊選小尾寒羊經(jīng)產(chǎn)母羊，年齡24歲，體重50kg以上，體格健壯，無傳染性和生殖系統(tǒng)疾病，中等以上膘情。1.3試情公羊選健康無病，體重在75kg以上，性欲較好的非良種公羊?yàn)樵嚽檠颉?.4種公

4、羊選體形外貌達(dá)到該品種標(biāo)準(zhǔn)，遺傳性能穩(wěn)定，性欲好的健康成年公羊。1.5藥品pmsg（寧波激素廠）、氯前列烯醇（上海計(jì)劃生育研究所）、陰道海綿栓（新西蘭）、胚胎保存液（新西蘭）、o-fsh超排藥（新西蘭）、沖胚液（新西蘭）等。1.6器械外科手術(shù)器械，手術(shù)保定架，體視顯微鏡、沖卵管、檢卵針、移植管等。2方法2.1供體羊超排處理2004年11月2829日對(duì)供體綿進(jìn)行同期發(fā)情處理，在放置陰道海棉栓的第12天開始超排，使用o-fsh總劑量10ml，采用劑量逐日遞減處理4天，每天上下午肌肉注射各一次。間隔12小時(shí)，在超排處理的第4天，即埋栓的第15天取栓，同時(shí)用加雙抗（80萬單位青霉素+100萬單位連霉素

5、）的生理鹽水沖洗陰道。2.2供體羊試情、配種供體羊在取栓的第2天進(jìn)行試情，發(fā)情的羊當(dāng)天配種2次，第二天繼續(xù)配種12次。2.3沖卵供體羊發(fā)情后67.5天采卵，采用子宮角方法。將子宮暴露于創(chuàng)口表面后，用套有膠管的腸鉗夾在子宮角分叉處，注射器吸入預(yù)熱的沖卵液2030ml（一側(cè)用液5060ml），鈍形沖卵針頭從子宮角尖端插入，確認(rèn)針頭在管腔內(nèi)，進(jìn)退通暢時(shí)，將硅膠管連接于注射器上，推注沖卵液，當(dāng)子宮角膨脹時(shí)，將回收卵針頭從腸鉗夾基部的上方迅速扎入，沖卵液經(jīng)硅膠管收集于杯內(nèi)，最后用兩手拇指和食指將子宮角捋一遍。另一側(cè)子宮角用同樣方法沖洗。進(jìn)針時(shí)避免損傷血管，推注沖卵液時(shí)用力和速度應(yīng)適中。2.4檢卵用玻璃棒

6、清除卵外圍的粘液，雜質(zhì)。將胚胎吸至第一個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)，吸管先吸入少許pbs再吸入卵，在培養(yǎng)皿的不同位置沖洗卵35次。依次在第二個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)重復(fù)沖洗，然后把全部卵移至另一個(gè)培養(yǎng)皿。每換一個(gè)培養(yǎng)皿時(shí)應(yīng)換新的玻璃吸管，一個(gè)供體的卵放在同一個(gè)皿內(nèi)，操作室溫度保持在2025。2.5胚胎質(zhì)量鑒定在2040倍體視顯微鏡下根據(jù)受精卵的形態(tài)、色澤、分裂球的大小、均勻度、細(xì)胞的密度、與透明帶的間隙以及變性情況等，將胚胎分為a、b、c三個(gè)等級(jí)。發(fā)情后第7天回收的受精卵在正常發(fā)育時(shí)應(yīng)處于致密桑椹胚至囊胚階段。凡在16細(xì)胞以下的受精卵及變性細(xì)胞超過一半的胚胎均屬等外級(jí)，凡卵子的卵黃未形成分裂球及細(xì)胞團(tuán)的，均列為未受精卵。2.

7、6受體羊同期發(fā)情受體綿羊與供體羊同時(shí)埋植陰道海綿栓，并在埋栓的第15天提前12小時(shí)取栓，取栓同時(shí)肌肉注射pmsg400iu/只羊。第二天將試情公羊系上試情布放入受體羊群中，并記錄取栓后2日內(nèi)母羊發(fā)情情況。2.7胚胎移植采用手術(shù)法移植。將受體羊仰臥保定在手術(shù)架上，在羊的腹部開一5cm左右的切口，用食指和中指從腹腔取出子宮和卵巢，檢查受體羊卵巢上黃體發(fā)育情況，黃體發(fā)育按突出卵巢的直徑分為優(yōu)、中、差三個(gè)等級(jí)，優(yōu)0.61cm，中0.5cm，差小于0.5cm。將卵巢上黃體發(fā)育良好側(cè)的子宮角取出體外，將12枚優(yōu)質(zhì)胚胎移入子宮角內(nèi)，還納子宮角于腹腔內(nèi)并縫合創(chuàng)口。2.8供、受體羊術(shù)后處理供、受體羊術(shù)后在小圈內(nèi)

8、觀察12天。圈舍應(yīng)保持干燥、清潔、防止感染。2.9移植地點(diǎn)濟(jì)南市歷城區(qū)畜牧局唐王羊場(chǎng)。3結(jié)果3.1供體羊沖胚共處理22只供體，其中20只發(fā)情，共沖出胚胎153枚，可用胚胎104枚，胚胎可利用率為67.97%，平均每只供體得可用胚胎5.20枚（表1）。表1供體羊超排與沖胚情況處理時(shí)間超排供體數(shù)(只)采胚供體數(shù)(只)采胚總數(shù)(枚)平均采胚數(shù)(枚)可用胚胎總數(shù)(枚)平均可用胚數(shù)(枚)04年12月910日22201537.651045.203.2受體羊同期發(fā)情效果及可利用率對(duì)90只受體綿羊進(jìn)行同情發(fā)情處理，發(fā)情75只，可用作移植的72只，同期發(fā)情率和可利用率分別為88.2%和96.0%（表2）。表2受

9、體羊同期發(fā)情效果處理日期放栓受體數(shù)(只)取栓受體數(shù)(只)發(fā)情受體數(shù)(只)同期發(fā)情率(%)手術(shù)受體數(shù)(只)移植受體數(shù)(只)受體可利用率(%)04年11月2829日放栓90857588.2757296.0表3胚胎移植受胎率與產(chǎn)羔率（單位：枚、只、%）胚胎移植日期移胚數(shù)受體數(shù)單胚受體雙胚受體單胚妊娠雙胚妊娠分娩受體移單胚受胎率移雙胚受胎率平均受胎率產(chǎn)羔數(shù)胚胎/羔羊羔羊/供體04年12月222310472403219203947.50a62.50b54.17402.602.00注：受胎率統(tǒng)計(jì)以產(chǎn)羔和流產(chǎn)的受體羊?yàn)闇?zhǔn)。同行字母不同表示差異顯著（p0.05）。3.3胚胎移植受胎率將104枚可用胚胎移入72

10、只受體，其中40只受體移入單胚，32只受體移入雙胚。從表3可以看出，移植單胚懷孕受體數(shù)為19只，受胎率47.50%；移植雙胚懷孕受體數(shù)20只，受胎率62.50%；總懷孕受體數(shù)39只，平均受胎率54.17%。移植雙胚的受胎率顯著高于移植單胚受胎率（p0.05）。3.4產(chǎn)羔用104枚胚胎繁殖出40只羔羊，平均2.6枚胚胎產(chǎn)1只羔。每只供體獲得羔羊2只。3.5經(jīng)濟(jì)效益分析（1）受體羊胚胎移植及使用成本500元/只，（2）供體超排藥物及人工費(fèi)500元/只。（3）杜泊羔羊13月齡平均每只消耗顆粒飼料50kg，單價(jià)1.5元，消耗苜蓿干草5kg；單價(jià)1元，折合人民幣80元。（4）每只羔羊人工飼養(yǎng)費(fèi)15元。目

11、前3月齡杜泊羊的市場(chǎng)價(jià)為3000元左右，每只供體繁殖2只羔羊獲純利潤(rùn)3510元。表4每只供體羊超排和胚胎移植效益單位：只、元品種羔羊市場(chǎng)價(jià)價(jià)羔羊數(shù)羔羊毛收入受體移植成本（72）供體超排成本（20）羔羊飼料費(fèi)飼養(yǎng)費(fèi)純利潤(rùn)每只供體獲利杜泊綿羊300040120000360001000032006007020035104討論與小結(jié)4.1采用同期發(fā)情和超排技術(shù)，對(duì)經(jīng)產(chǎn)杜泊綿羊母羊供體實(shí)施超排，平均每只采得可利用胚胎5.2枚，達(dá)到了國(guó)內(nèi)報(bào)道肉用綿羊平均57枚的水平。4.2以經(jīng)產(chǎn)小尾寒羊?yàn)槭荏w實(shí)施同期發(fā)情處理，同期發(fā)情率為88.2%，受體羊利用率達(dá)到96%。與國(guó)內(nèi)同類研究相吻合。4.3移植受體產(chǎn)羔率平均達(dá)到5