環(huán)孢霉素A在兔眼濾過術(shù)中抗增殖作用的實驗研究

1、DOC格式論文，方便您的復(fù)制修改刪減環(huán)孢霉素A在兔眼濾過術(shù)中抗增殖作用的實驗研究(作者：單位：郵編：)【摘要】目的研究環(huán)孢霉素A(CsA)在青光眼濾過手術(shù)中 的抗增殖作用。方法 將20只中國白兔40只眼隨機分成2組，一組 為環(huán)孢霉素組，另一組為生理鹽水對照組，2組均行小梁切除術(shù)，術(shù)中分別在結(jié)膜瓣下放置2 %環(huán)孢霉素A、生理鹽水棉片5min，在術(shù)后 第1、7、14、30天觀察眼壓、濾過泡、角膜、眼底，并行光鏡、電 鏡及增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)檢查。結(jié)果環(huán)孢霉素A組眼壓控制多較 理想，與對照組間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P V 0.05),大多數(shù)形成功能性 濾過泡，光鏡下見極少量纖維組織增生，電鏡下見

2、纖維細(xì)胞線粒體少， 染色質(zhì)功能不活躍，增殖細(xì)胞陽性率低，與對照組差異有統(tǒng)計學(xué)意義 (P V 0.05)，且沒有淺前房、視網(wǎng)膜損害等嚴(yán)重并發(fā)癥。結(jié)論環(huán)孢霉素A在兔眼濾過手術(shù)中抗增殖作用好，安全性高?！娟P(guān)鍵詞】 環(huán)孢霉素A濾過手術(shù)眼兔Abstract: Objective To study the antiproliferative effects ofcyclosporine A in filtering operation. Methods 20 Chinese white rabbits,40 eyes, ran domly were devided into 2 groups, cyclo

3、spori ne A group and no rmal sodium group, and un derwe nt trabeculectomy. During the operation, 2 % CsA and NS were placed under conjuctival flap for 5 minutes, and then 100mL balaneed salt solution was used to flush the area. At 1st, 7th,14th,and 30th day after surgery, filtering blebs, intraocula

4、r pressure, cornea and ocular fundus were observed.The operative area was examined with light microscope, electronic microscope, and the proliferating cell nuclear antigen(PCNA)was detected. Results In CsA group, intraocular pressure was significantly lower than that in NS group(P v 0.05), and more

5、functional filtering blebs were observed. Less fibroplasia and proliferative cells, less bioblast and less active caryotin in fibrocyte were found in CsA group than that in NS group. No serious mcomplicaton was found in both group. Conclusion CsA is safe and has a better antiproliferative effect in

6、filtering operation.Key words : cyclosporin A; filtering operation; eye; rabbit 青光眼濾過手術(shù)是治療青光眼的主要手術(shù)方法，但由于術(shù)后纖 維組織增生，常造成濾過通道阻塞，房水引流不暢，導(dǎo)致手術(shù)失敗。 環(huán)孢霉素A(cyclosporine A，CsA)是一種強效免疫抑制劑，廣泛應(yīng)用 于器官移植及免疫相關(guān)性疾病的治療。最近研究表明，CsA對多種細(xì)胞的生長有抑制作用，本研究將CsA用于青光眼濾過術(shù)中，旨在觀察其抑制纖維組織增生的效果及安全性。1材料和方法1.1實驗動物和分組選用健康中國白兔20只（寧夏醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供

7、），體重 2.53.0kg，月齡56個月，雌雄兼有，無眼病。隨機分成兩組， CsA組和生理鹽水對照組，每組 20只眼。1.2主要材料山地明注射液（環(huán)孢霉素 A），Novartis Pharma AG Switzerland 生產(chǎn)；絲裂霉素C，浙江海正藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)；小鼠單克隆抗 增殖細(xì)胞核抗原、生物素化山羊抗小鼠IgG抗體、鏈霉素-生物素D- 過氧化物酶復(fù)合物（SABC復(fù)合物）、二氨基聯(lián)苯胺（DAB）均為武漢博 士德生物有限公司生產(chǎn)。日產(chǎn) HITACHI H-600透射電鏡。1.3方法用3%戊巴比妥鈉，按1mL/kg耳緣靜脈注射麻醉，術(shù)前10min 雙眼各滴0.4%鹽酸奧布卡因表面麻醉3

8、次。以角鞏緣為基底做8mm X5mm結(jié)膜瓣，雙眼分別用浸 2% CsA、生理鹽水的海綿片（4mm X 3mm X2mm）置于鞏膜面上5min，用20mL生理鹽水沖洗，制作4mm X4mm板層鞏膜瓣，切除1mm X3mm小梁組織，根切虹膜，10-0尼 龍線縫合鞏膜瓣2針，分層縫合Tenons囊和球結(jié)膜瓣致密閉。術(shù)后 雙眼滴用0.1 %滴塞米松眼液、0.25 %氯霉素眼液，每天4次，共1 周。術(shù)后每天觀察濾過泡、結(jié)膜、角膜、前房情況，術(shù)后1周、2周、 1個月測眼壓、觀察眼底，在術(shù)后1周、2周、1個月分別用空氣栓 塞法處死動物5、5、10只，立刻取濾過泡及其附近組織，一分為二， 一半用10%中性甲醛

9、固定，石蠟包埋，制作病理切片，分別予 HE 染色、增殖細(xì)胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen ，PCNA)染 色，并行光鏡檢測；另一半用2.5 %的戊二醛固定，行電鏡觀察。1.4統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件，應(yīng)用卡方檢驗、t檢驗和秩和檢驗 對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。2結(jié)果2.1各組白兔術(shù)前、術(shù)后眼壓(表1)表1實驗組與對照組眼壓 比較(略)經(jīng)t檢驗，各組白兔術(shù)前、術(shù)后第1天眼壓差異無統(tǒng)計學(xué)意義 (P 0.05);術(shù)后第7、14、30天CsA組眼壓較對照組下降明顯，差 異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P V 0.05)。2.2各組白兔術(shù)后濾過泡形態(tài)(表2)

10、表2實驗組與對照組濾過 泡形態(tài)比較(略)濾過泡依照Krofeld分型法分為4型：I型微小囊泡型、II型扁平 彌散型、皿型瘢痕型、W型包囊型。I、I型為功能濾過泡，皿、W型 為非功能濾過泡；雖然經(jīng)x2檢驗兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P 0.05)， 但是實驗組在各個時期功能性濾過泡比例明顯增高，且泡壁薄，血管少。術(shù)后1周生理鹽水組見較多淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤，大 量新生毛細(xì)血管；CsA組炎性細(xì)胞和毛細(xì)血管均較少。術(shù)后 2周， 生理鹽水組炎癥細(xì)胞和毛細(xì)血管漸減少，出現(xiàn)成纖維細(xì)胞和少量增生 纖維組織；CsA組炎性細(xì)胞更少，偶見成纖維細(xì)胞。術(shù)后第 30天， 生理鹽水組見大量致密纖維組織，CsA組僅

11、見少量稀疏纖維組織。2.4術(shù)后不同時期濾過區(qū)組織電鏡檢查結(jié)果生理鹽水組術(shù)后7d，見多量圓形核細(xì)胞，胞質(zhì)空化，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹， 少量成纖維細(xì)胞；術(shù)后14d，見多量成纖維細(xì)胞，胞核增大，核仁染 色深，核膜突起多，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹明顯，胞漿受壓，質(zhì)少，間質(zhì)內(nèi)膠原 量多，紊亂；術(shù)后30d，見大量成纖維細(xì)胞，核染色變淺，核膜突起 減少，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹減輕，胞漿增多，空化少，間質(zhì)纖維致密。CsA組：術(shù)后7d見少量炎性細(xì)胞，細(xì)胞漿內(nèi)空泡，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹；術(shù)后14d， 少量成纖維細(xì)胞，核仁染色略深，核膜突起少，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度腫脹；術(shù) 后30d，成纖維細(xì)胞略增多，核仁規(guī)則，間質(zhì)少量膠原纖維，排列整 齊（圖24,見封4）。2.5成纖維

12、細(xì)胞PCNA檢測結(jié)果（圖5、6,見封4）PCNA陽性結(jié)果為細(xì)胞核界限清楚呈棕黃染色的成纖維細(xì)胞。正常結(jié)膜下、鞏膜上組織無纖維組織增生，濾過術(shù)后，PCNA陽性細(xì)胞明 顯增加，各組分別在結(jié)膜下、鞏膜上部位隨機選取5個高倍鏡視野，計算PCNA陽性細(xì)胞的數(shù)目。術(shù)后第 7天，兩組間均偶見增生的 PCNA陽性細(xì)胞，無明顯差異；術(shù)后第 14、30天，CsA組PCNA 陽性細(xì)胞數(shù)少，經(jīng)秩和檢驗，兩組差異明顯（P V 0.05）。三個時間點秩和檢 驗結(jié)果 分別為 U=6.500,P=0.166;U=11.000,P=0.003；U=1.000,P=0.016。2.6并發(fā)癥CsA組有3例出現(xiàn)角膜上皮點狀剝脫，自行

13、愈合，未見淺前房及視 網(wǎng)膜損害；生理鹽水組有1例上皮點狀損害，自愈。3討論小梁切除術(shù)是治療青光眼的主要手術(shù)方法， 術(shù)后濾過口開放、濾過 道通暢，是房水外流、手術(shù)成功的保證1。但由于手術(shù)后成纖維細(xì) 胞的增殖和移行，阻塞濾過通道，常造成手術(shù)失敗。PCNA，又稱周期素，是一種僅在增殖周期中合成和表達(dá)的核內(nèi)多肽鏈，可以作為評價細(xì)胞增殖狀態(tài)的指標(biāo)之一。CsA是一種新型免疫抑制劑，廣泛用于 器官移植及免疫有關(guān)的疾病，近年來研究發(fā)現(xiàn)CsA還具有抗增殖作用，在適當(dāng)濃度能有效抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、表皮角質(zhì)細(xì) 胞、結(jié)膜成纖維細(xì)胞、晶狀體上皮細(xì)胞的增殖2-3 關(guān)于CsA抗 增殖作用的確切機制尚未完全闡明，可

14、能通過以下途徑作用于瘢痕形 成的各個環(huán)節(jié)4:通過與其受體（CPH）結(jié)合，通過靶物質(zhì)與相應(yīng)的轉(zhuǎn) 錄基因控制蛋白發(fā)揮抗增殖作用； 通過抗炎、抑制細(xì)胞表達(dá)白細(xì)胞介 素、腫瘤壞死因子、堿性成纖維細(xì)胞生長因子的產(chǎn)生來抑制成纖維細(xì) 胞的活化；通過抑制血管形成或使血管產(chǎn)生痙攣造成局部缺血；抑制細(xì)胞分泌膠原；誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞凋亡；通過抑制免疫反應(yīng)抑制成纖維 細(xì)胞持續(xù)產(chǎn)生瘢痕組織5;在肉芽組織早期抑制金屬蛋白酶 2，9 活性而抑制傷口愈合6。關(guān)于CsA在眼部應(yīng)用的安全性，已有很 多報道：CsA是親脂性化合物，滴眼劑能迅速透過角膜上皮，但眼內(nèi) 通透性差7，房水中濃度很低8，所以對角膜內(nèi)皮作用不大，不 易引起角膜內(nèi)皮

15、毒性，造成角膜水腫、混濁及視網(wǎng)膜損傷。Akyol等 研究發(fā)現(xiàn)9, CsA對睫狀上皮的改變輕微。本實驗通過在術(shù)中一 次性使用2 % CsA，能有效抑制纖維組織增生，減少瘢痕形成，保持 濾過道通暢，形成功能性濾過泡，使手術(shù)獲得成功。而且在術(shù)中一次 性、短時間用藥，再加用生理鹽水徹底沖洗，故局部并發(fā)癥很少，僅 3眼有角膜上皮點狀缺損，并自行消退，未見濾過泡漏、角膜混濁、 低眼壓、晶狀體混濁及視網(wǎng)膜損傷等嚴(yán)重并發(fā)癥。因此我們認(rèn)為： CsA能有效抑制成纖維細(xì)胞的增殖，保證濾過道通暢，合理控制眼壓, 且比較安全，是較理想的輔助抗青光眼的藥物?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】:1李斌濾過漏口的功能狀態(tài)與手術(shù)療效的關(guān)系J 眼外傷

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