玉米苞葉對大鼠血管內皮平滑肌凋亡及p53表達的藥用效應研究

1、DOC格式論文，方便您的復制修改刪減玉米苞葉對大鼠血管內皮、平滑肌凋亡及p53表達的藥用效應研究(作者：單位：郵編：)作者：丁曉猛，李國拉，姜秀娟，王輝，李弈，王志軍，甄 艷軍【摘要】目的研究玉米苞葉對高血脂大鼠血管內皮及平滑肌細胞凋 亡與突變型p53表達的藥用效應。方法選用雄性 SD大鼠,隨機分為 正常對照、病理模型、陽性對照及玉米苞葉煎劑組，復制食餌性高脂 血癥,玉米苞葉煎劑預防性給藥，以吉非羅齊為陽性藥對照。流式細胞 術檢測內皮和平滑肌細胞凋亡率及突變型p53表達量。結果玉米苞葉煎劑組內皮細胞突變型p53表達下降(P毛.05)，凋亡率下降(P0.05)，增殖指數輕度上升(P $05);平

2、滑肌突變型 p53表達下降 (P0.05)，凋亡率上升(P0.05)，增殖指數下降(P0.05)。結論玉米苞葉 煎劑具有調控大鼠血管內皮及平滑肌細胞p53表達，平衡兩種細胞凋亡與增殖相關性的藥用效應。【關鍵詞】 玉米苞葉；內皮；平滑??；突變型p53玉米苞葉煎劑具有抗動脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)的藥用 效應已被我們多次實驗結果證實13。本文就高血脂大鼠主動脈內 皮細胞(endothelial cells , EC)及平滑 肌細胞(smooth muscle cell,SMC)凋亡率及增殖指數與突變型 p53表達的相關性，進一步揭 示玉米苞葉干預AS早期損傷的作用。1材料與

3、儀器1.1藥物收集成熟潔凈的玉米苞葉，曬干切碎，每克玉米苞葉加 蒸餾水100 ml煮沸3 h,濃縮至1.5 g/ml生藥備用。選用羧甲基纖維 素鈉(CMC)為溶劑配制吉非羅齊(Gemfibrozil由保定古城制藥廠提 供，批號：040625)CMC 溶液，濃度：0.016 g/ml。1.2動物健康成年雄性SD大鼠，體質量180200 g由華中科 技大學同濟醫(yī)學院實驗動物學部提供，醫(yī)學動物合格證號：SCXK(e)2004-0007，清潔級，32 只。1.3試劑與儀器突變型p53兔抗人多克隆抗體，由美國 Santa Cruz公司提供。流式細胞儀，Epics-XL H型，美國Beckman Coul

4、ter 公司生產。2方法2.1動物分組與模型復制動物適應性喂養(yǎng) 1周后,隨機分為正常 對照、病理模型、陽性藥對照、玉米苞葉煎劑組 ，每組8只。正常組 給予基礎飼料喂養(yǎng)，其余 3組給予高脂飼料(87.48%基礎飼料+10% 豬油+2%膽固醇+0.5%膽鹽+0.02%他巴唑),各組動物自由飲水。2.2給藥方法造模同時，陽性對照組用10 ml/(kg d)(合0.16 g/kg d)吉非羅齊溶液灌胃，玉米苞葉煎劑組每日以玉米苞葉水煎劑10ml/(kg d)(合生藥15g/kg d)灌胃。正常組，模型組分別給予等量自來 水灌胃，隨體質量增長調節(jié)藥量，實驗9周。2.3流式樣品制備與檢測每組各取 6只大鼠

5、，斷頭處死，打開 胸腹腔，暴露主動脈，剝離血管周圍結締組織，于胸主動脈同一部位 取材，2 cm長，撕除外膜，分別剝取內皮及中膜層，70%乙醇固定， 制備單細胞懸液，碘化丙啶染色，流式細胞儀檢測EC及SMC凋亡率，用Muticycle AV分析軟件對DNA細胞周期擬合分析。計算出 DNA組方圖各時相分布的百分比，以增殖指數(proliferation index, PI) 表示細胞的增殖活性。先后加入突變型P53兔抗人多克隆一抗，IgG-PE二抗。應用Expo 32 ADC進行免疫熒光數據分析，以熒光指 數(FI)表示蛋白表達的相對含量。2.4統(tǒng)計學處理 全部數據用士s表示，采用SPSS(13.

6、0)分析軟 件，單因素方差分析進行數據處理。3結果3.1玉米苞葉對EC突變型p53表達、凋亡率及增殖指數的影 響玉米苞葉煎劑組EC的突變型p53表達較模型組下降(P .05);凋亡 率較模型組明顯下降(P0.05);增殖指數輕度上升(P 005)。見表1。3.2玉米苞葉對SMC突變型p53表達、凋亡率及增殖指數的 影響玉米苞葉煎劑組SMC突變型p53表達較模型組顯著下降(P0.05);凋亡率明顯高于模型組(P0.05);增殖指數低于模型組(P0.05)。見表2。表1玉米苞葉對EC p53表達、凋亡率及增殖指 數的影響表2玉米苞葉對SMC p53表達、凋亡率及增殖指數的影響4討論在AS早期,高脂

7、氧化損傷后的血管內膜炎癥反應致內皮損傷 ， 誘發(fā)平滑肌細胞凋亡與增殖失衡，是多種促凋亡與抑凋亡基因的調控 作用紊亂的復雜結果。研究發(fā)現(xiàn)，突變型p53在AS病變組織中的異 常表達較高4,本實驗模型組的主動脈內膜損傷處在AS早期階段,VEC的突變型p53表達明顯上升，其促凋亡作用增加，致VEC凋 亡較正常對照組增加近8倍,其增殖指數僅相當于正常對照組的 1/2, 是AS早期內皮損傷嚴重，修復障礙的特征。模型組SMC突變型p53 較對照組上升1倍，凋亡率亦相應增高，但SMC的增殖指數不但沒有 下降,反而較正常組增加了 8倍,該指標的變化與內皮相比截然相反， 認為正是內皮損傷誘導AS初期SMC呈現(xiàn)增殖

8、異?；钴S，增殖與凋亡 嚴重失衡的結果。玉米苞葉作用后，VEC的p53基因突變減少，凋亡率降低，增 殖指數較模型組顯著增加，提示玉米苞葉的藥用效應在于通過調控相 關基因p53表達,減少內皮死亡，促進分裂增殖及內膜修復。而玉米苞 葉對SMC的p53表達,凋亡及增殖的影響顯示出與 VEC結果不同。 玉米苞葉組SMC的p53表達較模型組降低，凋亡率上升，而增殖指 數大幅度下降，這與突變型p53有促進異常細胞增殖，抑制其凋亡的 作用5的觀點相吻合，可能是玉米葉的藥理活性通過其他環(huán)節(jié)調控 突變型p53基因表達，促進了 SMC凋亡;同時玉米苞葉對EC的保護 作用減輕了對SMC的刺激，其凋亡加快，增殖減慢，使

9、AS早期SMC的增殖與凋亡趨于新的平衡，顯現(xiàn)出EC與SMC增殖的相關性。玉米苞葉不是傳統(tǒng)的中藥材，但在我們以往系列的實驗研究中 證實，玉米苞葉水煎劑預防性給藥，可使食餌性高脂血癥家兔主動脈 內膜粥樣硬化一期病變的脂斑面積顯著縮小6,治療性給藥后，對家兔主動脈病變具有同樣的拮抗 AS作用，對尚未出現(xiàn)AS形態(tài)改變的高 血脂鵪鶉和大鼠動脈內膜損傷仍顯示出良好的干預作用7,增加內皮NO的分泌，減少ET釋放8，影響IL-1和IL-8的分泌(另文待發(fā) 表),掃描和透射電鏡觀察內皮和平滑肌的超微結構變化，從形態(tài)角度支持了玉米苞葉確有改善血管內皮損傷的藥用效應。上述實驗結果證 實，玉米苞葉具有多層面的抗 AS

10、作用的藥理活性。【參考文獻】1 侯建明，甄彥君，趙春桂，等.玉米苞葉對鵪鶉血脂的影 響J.河北中醫(yī)藥學報，1997，12(4) : 3.2 甄彥君，侯建明，劉淑君，等.玉米苞葉對動物高血脂及AS影響的實驗研究J.中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志，1999，5 (12) : 20.3 侯建明，甄顏君，王 林，等.玉米苞葉降低動脈硬化家兔白細胞凋亡及 CD44表達J.中國老年學雜志，2004,24(11) :1036.4 劉 凜腫瘤中p53、iNOS表達及二者相關性研究J.醫(yī)學研究雜志,2006, 35(7):71.DOC格式論文，方便您的復制修改刪減5 韓峰，顧振綸.百草降脂靈對動脈粥樣硬化兔腹主動脈PCNA及突變型p53表達的影響J,蘇州醫(yī)學院學報，2001 ,21(5): 520.6 甄艷軍 候建明，吳中秋，等玉米苞葉煎劑對動脈粥樣硬化家兔血清內皮素、前列環(huán)素及病理形