《流式細(xì)胞儀介紹》PPT課件

1、流式細(xì)胞儀產(chǎn)品介紹,楊海霞 德國(guó)美天旎生物技術(shù)公司 (僅供內(nèi)部培訓(xùn),主要內(nèi)容,流式細(xì)胞儀基本原理 MACSQuant流式的性能 流式的競(jìng)爭(zhēng)分析,流式細(xì)胞儀基本原理,流式細(xì)胞術(shù)（FCM）： 就是對(duì)在高速流動(dòng)的鞘液包括下的細(xì)胞、粒子進(jìn)行分析和分選的技術(shù)，這種細(xì)胞或粒子是經(jīng)過(guò)特異熒光標(biāo)記的。其特點(diǎn)是測(cè)量速度快，每秒鐘能測(cè)數(shù)千個(gè)乃至上萬(wàn)個(gè)細(xì)胞，且可進(jìn)行多參數(shù)測(cè)量,流式細(xì)胞術(shù)的概念,流式細(xì)胞術(shù)發(fā)展趨勢(shì),單純到復(fù)雜 檢測(cè)熒光參數(shù) 定量 手動(dòng)到自動(dòng) 熒光試劑,液流,檢測(cè)器,光源,電子計(jì)算機(jī),流式細(xì)胞檢測(cè)原理,細(xì)胞可被檢測(cè)的參數(shù)(無(wú)探針標(biāo)記,散射光信號(hào): 細(xì)胞內(nèi)在的結(jié)構(gòu)參數(shù) 細(xì)胞大小 前向角散射 (FSC)

2、細(xì)胞內(nèi)部顆粒性 側(cè)向角散射 (SSC,是細(xì)胞或細(xì)胞上的熒光染料被激光激發(fā)后發(fā)射出的熒光，不同的熒光染料其發(fā)射波長(zhǎng)不同。 區(qū)分陰陽(yáng)性：通過(guò)熒光強(qiáng)度可將同一個(gè)細(xì)胞群體中的有熒光標(biāo)記的細(xì)胞與無(wú)熒光標(biāo)記的細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)。 區(qū)分陽(yáng)性強(qiáng)弱：也可以將陽(yáng)性細(xì)胞中的高FL的細(xì)胞與低FL的細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái),相對(duì)熒光強(qiáng)度（FL） (需探針標(biāo)記,散點(diǎn)圖,密度圖,二維等高圖,直方圖,圖 報(bào)告中常見(jiàn)的幾種流式細(xì)胞圖,如何看流式圖,流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用,流式細(xì)胞術(shù)在細(xì)胞生物學(xué)中的應(yīng)用 染色體核型分析 在分子遺傳學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用 用于性別的預(yù)選擇 在微生物學(xué)中的應(yīng)用 在細(xì)胞周期研究中的應(yīng)用 流式細(xì)胞術(shù)在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用 在免疫學(xué)中的應(yīng)用 流

3、式細(xì)胞術(shù)在腫瘤學(xué)上的應(yīng)用 在血液學(xué)研究中的應(yīng)用 流式細(xì)胞術(shù)新的應(yīng)用,流式細(xì)胞儀的臨床應(yīng)用,HIV免疫分型，CD4絕對(duì)計(jì)數(shù) 白血病和淋巴瘤的免疫分型 腫瘤的細(xì)胞周期和倍體分析 網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù) 細(xì)胞移植的交叉配型和免疫狀態(tài)監(jiān)測(cè) 干細(xì)胞計(jì)數(shù) 殘量白血病細(xì)胞檢查 HLA-B27檢查 血小板功能及相關(guān)疾病,11,臨床意義,了解在不同情況下體內(nèi)免疫功能狀態(tài) 輔助臨床疾病的診斷 探索疾病的發(fā)病機(jī)理、病程、預(yù)后 監(jiān)測(cè)、指導(dǎo)臨床治療方案 免疫系統(tǒng)疾病 免疫缺陷病，AIDS 移植病人排斥反應(yīng)或移植物抗宿主反應(yīng)的檢測(cè) 腫瘤病人化療后免疫力檢測(cè),流式細(xì)胞儀的科研應(yīng)用,樹(shù)突細(xì)胞研究 干細(xì)胞研究 癌癥病人的多藥耐藥性 細(xì)

4、胞周期和細(xì)胞凋亡 流式細(xì)胞術(shù)與分子生物學(xué)研究 細(xì)胞系的鑒定 細(xì)胞內(nèi)蛋白的分析 細(xì)胞膜電位測(cè)定 細(xì)胞內(nèi)鈣離子測(cè)定,流式細(xì)胞儀潛在客戶,醫(yī)院：血液科，檢驗(yàn)科，風(fēng)濕免疫病科，腫瘤科，細(xì)胞治療科,開(kāi)展移植（肝腎）的科室。 科研院所及大專(zhuān)院校：免疫系或免疫實(shí)驗(yàn)室，中心實(shí)驗(yàn)室，分子生物學(xué)室，腫瘤研究所，血液病研究所,MACSQuant流式細(xì)胞儀細(xì)胞分析的里程碑,多參數(shù)細(xì)胞分析,三激光 紫色 (405 nm)40 mW 藍(lán)色 (488 nm)25 mW 紅色(635 nm)20 mW 9個(gè)光學(xué)參數(shù) FSC/SSC + 7 個(gè)熒光通道,MACSQuant光路系統(tǒng),MACSQuant流式細(xì)胞儀的創(chuàng)新特性： 集成

5、，臺(tái)式數(shù)字化流式細(xì)胞儀強(qiáng)大并且直觀的軟件 多參數(shù)：3激光，9個(gè)參數(shù)（FSC,SSC,FL1-7) 12寸觸摸屏（內(nèi)置） 不同用戶登錄模式，可用密碼進(jìn)行保護(hù) 2種不同的模式（針對(duì)有豐富經(jīng)驗(yàn)和無(wú)流式經(jīng)驗(yàn)的人員） 分析速度可達(dá)10000個(gè)細(xì)胞/秒,無(wú)需計(jì)數(shù)微珠進(jìn)行絕對(duì)計(jì)數(shù) 不同的流速控制：25/50/100uL/分鐘 自動(dòng)化處理樣本，自動(dòng)進(jìn)樣，自動(dòng)清潔，自動(dòng)補(bǔ)償,自動(dòng)標(biāo)記 矩陣補(bǔ)償和脫機(jī)補(bǔ)償 小巧（60X35X40cm）、低噪、低熱,流式細(xì)胞儀基本特征,細(xì)胞富集系統(tǒng) 絕對(duì)計(jì)數(shù)，無(wú)需微珠 自動(dòng)補(bǔ)償 自動(dòng)進(jìn)樣 自動(dòng)標(biāo)記,A new milestone in cell analysis,MACSQuant

6、 分析儀 功能強(qiáng)大、操作簡(jiǎn)單的多參數(shù)細(xì)胞分析的理想工具 (高端儀器 操作簡(jiǎn)單 多種自動(dòng)化選擇,MACS 富集系統(tǒng) 使用MACS微珠磁性富集細(xì)胞 細(xì)胞被富集后再進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析 預(yù)富集的應(yīng)用： 內(nèi)皮祖細(xì)胞檢測(cè) 頻率:每 105 PBMCs 中有1個(gè)細(xì)胞(如 CD34的預(yù)富集) 腫瘤細(xì)胞檢測(cè) 頻率: 每 107 PBMCs 中有1個(gè)細(xì)胞 (如 EpCAM的預(yù)富集) 抗原特異性T細(xì)胞檢測(cè) (如 CD154的預(yù)富集) 成分檢測(cè) 可以只檢測(cè)富集后組分或者同時(shí)檢測(cè)原始標(biāo)本、陰性組分和陽(yáng)性組分,MACSQuant流式細(xì)胞儀獨(dú)有特征,高靈敏度地分析稀有細(xì)胞,每次反應(yīng)后，自動(dòng)計(jì)算每 L體積中的細(xì)胞數(shù) 無(wú)須計(jì)數(shù)

7、磁珠，細(xì)胞培養(yǎng)后往往需要細(xì)胞計(jì)數(shù)，可以完全替代細(xì)胞計(jì)數(shù)儀 CD4絕對(duì)計(jì)數(shù)用于輔助HIV監(jiān)測(cè)治療 CD34絕對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)用于干細(xì)胞移植,MACSQuant流式細(xì)胞儀獨(dú)有特征,絕對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)(容積型,自動(dòng)化的多樣本處理： 使用 MACS MiniSampler 和 MACS 冷凍試管架 靈活性高，可使用不同的試管 5 mL tubes 15 mL tubes 50 mL tubes 通量高(從Chill 96 rack 到 96孔板,MACSQuant流式細(xì)胞儀獨(dú)有特征,自動(dòng)進(jìn)樣,MACSQuant流式細(xì)胞儀獨(dú)有特征,自動(dòng)標(biāo)記,MACS微型載樣器上的試劑架，可最多放置4支染色試劑，如： PI / 7-

8、AAD 熒光素標(biāo)記的抗體 抗體混合物 (如MACS MC Cocktails) 全系列試劑 (抗體 和試劑盒),如: MACS 對(duì)照抗體混合物: MC CD14 Monocyte Cocktail, humanMC CD19 B Cell Cocktail, humanMC CD34/CD133 Cocktail, humanMC CD34 Cocktail, human MC CD4 T Cell Cocktail, mouseMC CD90 Pan T Cell Cocktail, mouseMC CD19 B Cell Cocktail, mouse,MACSQuant流式細(xì)胞儀獨(dú)有特征

9、,完全自動(dòng)化的儀器設(shè)置,全自動(dòng)的儀器校準(zhǔn) (使用 MACS Calibration Beads) 7x7 矩陣補(bǔ)償 自動(dòng)補(bǔ)償，對(duì)多色分析自動(dòng)生成補(bǔ)償值 手動(dòng)補(bǔ)償,儀器操作簡(jiǎn)單、易行: 溶液瓶 (1.5L) 附著在儀器兩側(cè)(通過(guò)瓶子上不同的指示燈來(lái)顯示機(jī)器狀態(tài),結(jié)構(gòu)： 數(shù)字化 分析速率 10,000 events /秒 流速: 25 / 50 / 100 L/min,MACSQuant Analyzer,自動(dòng)化的儀器設(shè)置 自動(dòng)校準(zhǔn)儀器（使用MACS校準(zhǔn)微珠） 自動(dòng)補(bǔ)償 7X7自動(dòng)矩陣補(bǔ)償 自動(dòng)清洗 自動(dòng)化進(jìn)樣和抗體標(biāo)記 帶有清洗工作站（washing station）的進(jìn)樣針 自動(dòng)化進(jìn)樣針臂（y

10、,z方向移動(dòng)） 無(wú)加壓系統(tǒng) 溶液瓶附著在儀器上 儀器狀態(tài)能夠通過(guò)溶液瓶的不同顏色來(lái)指示,用戶友好的儀器操作,12觸摸屏（內(nèi)嵌） Live support 遠(yuǎn)程網(wǎng)絡(luò)服務(wù)，德國(guó)工程師進(jìn)行遠(yuǎn)程在線檢修機(jī)器 VGA 接口 (連接第二個(gè)顯示器或者代替的顯示器) 功能強(qiáng)大、易于操作 直觀的操作界面 (用于儀器控制, 數(shù)據(jù)獲取和數(shù)據(jù)分析) 不同的用戶模式 拖拉式安裝 含預(yù)設(shè)程序 在個(gè)人電腦上進(jìn)行獨(dú)立數(shù)據(jù)分析 MACSQuant 數(shù)據(jù)（MQD)文件 -FCS格式-FCS3.0 -與其它流式軟件兼容,軟件基本特征,簡(jiǎn)捷的數(shù)據(jù)處理: 個(gè)人用戶登錄 數(shù)據(jù)自動(dòng)保存在對(duì)應(yīng)的用戶文件夾中 MQD 文件 (內(nèi)部格式) 數(shù)據(jù)

11、 儲(chǔ)存/備用: 可用硬盤(pán)驅(qū)動(dòng)器 / DVD RW 驅(qū)動(dòng)器, USB 接口, 以太網(wǎng)絡(luò)連接,軟件基本特征,軟件簡(jiǎn)單易操作: 鍵盤(pán)在顯示屏上 (觸摸式顯示屏) USB接口 可用來(lái)連接外設(shè)的鼠標(biāo)、鍵盤(pán) 條形碼讀碼器,MACSQuant Analyzer A new milestone in cell analysis,MACSQuant Analyzer A new milestone in cell analysis,MACSQuant Analyzer A new milestone in cell analysis,流式相關(guān)抗體,針對(duì)流式檢測(cè)的全系列抗體,FITC -PE -APC -Viob

12、lue -,北京大學(xué)人民醫(yī)院血液病研究所 流式細(xì)胞儀檢測(cè)報(bào)告 姓名： 性別： 年齡： 標(biāo)本： 病歷： 診斷： 編號(hào),淋巴細(xì)胞占有核細(xì)胞 % CD3+細(xì)胞占有核細(xì)胞 % CD4+細(xì)胞占有核細(xì)胞 % CD8+細(xì)胞占有核細(xì)胞 % CD14+細(xì)胞占有核細(xì)胞 ,簽名： 審核者： 日期,競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì): 預(yù)富集功能，高敏感性檢測(cè)罕見(jiàn)細(xì)胞，比如臨床最常用的造血干細(xì)胞、腫瘤干細(xì)胞、pDC等。 非常節(jié)省細(xì)胞，對(duì)于科研珍貴標(biāo)本尤為重要！ 絕對(duì)的細(xì)胞計(jì)數(shù)，無(wú)需計(jì)數(shù)微珠，細(xì)胞培養(yǎng)后往往需要細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，可以完全代替細(xì)胞計(jì)數(shù)儀。 自動(dòng)標(biāo)記，自動(dòng)進(jìn)樣，自動(dòng)清洗，節(jié)省時(shí)間。 自動(dòng)補(bǔ)償，對(duì)多色分析自動(dòng)生成補(bǔ)償數(shù)值 小巧的臺(tái)式機(jī)設(shè)計(jì),

13、低噪，低熱 非加壓系統(tǒng)進(jìn)樣,MACSQuant Analyzer A new milestone in cell analysis,34,25,儀器的競(jìng)爭(zhēng)分析,BD的各種機(jī)型（一,calibur,Aria,LSR II,BD的各種機(jī)型（二,Canto II,Influx,Beckman的各種儀器（一,EPICS XL-ADC,Cytomics FC500,Gallios,Moflo,EPICS XL-Altra,Quanta,Partec公司各種機(jī)型（適合植物學(xué)研究,Amnis公司的ImageStreamX圖像流式細(xì)胞儀,被評(píng)為2008年度生命科學(xué)十大創(chuàng)新產(chǎn)品之一，是流式細(xì)胞儀上的新突破,Mi

14、lipore公司的Guava,EasyCyte Mini/EasyCyte Plus無(wú)鞘液毛細(xì)管細(xì)胞分析儀,Accuri 的c6-流式細(xì)胞儀,一種全功能、二激光、六探測(cè)器分析流式細(xì)胞儀系統(tǒng),MACSQuant Analyzer “add-ons” MACS MiniSampler Chill Racks (Chill 5, 15, 50 or 96 well adapter) MACSQuant Columns Additional years of Service Fluorochromes, MACS Control Cocktails and Microbeads Instrument

15、Training MACSQuant Calibration Beads MACSQuant Starting Buffer kit Individual Buffer/Solution boxes,MACSQuant Analyzers in the World Belgium Canada China France Germany Iceland Ireland Italy Japan Russia South Korea Syria United Kingdom United States Coming soon to the list is: Australia,Flow Cytome

16、try Market Estimated to be $1.5 billion in 2008 (CAGR 10-15%, $3.7 billion in 2015) Instruments 68% - $1.02 billion Reagents 32% - $480 million Sales in 2009 Total 6.1 million (4.7 million ) Instruments 2.632 million (0.36%) Reagents 3.4 million ( 0.99,Who buys the MACSQuant Analyzer Innovators are

17、the first to purchase instruments and new gadgets Most countries are currently selling to the early adopters Some countries have sold a few MQ and are now selling to the researchers who want/need greater scientific arguments . Must be targeted to maximize our success Guidelines have been followed in

18、 several countries and success is seen,What have we learned? Miltenyi Biotec is still a new player in flow cytometry What is the MB track record in flow cytometry? What is the capability of MB Service (in US, EU and around the world) MACSQuant is a huge project Underestimated level of need on all le

19、vels We need an improved MACSQuant support structure Combination with MACSQuant is a powerful tool Fluorochromes autoMACS Pro gentleMACS MACSQuant is the unifier of MACS brand not the divider,Goals 2010 MACS Cell Analysis Gain customer awareness in the market place Introduce MACS Cell Analysis as a flow cytometry provider (flow cytometer, fluorochromes and kits, assays and applications) Improve our support structure to augment the offerings Become known as a flow cytometry company More exposure, publications and reference custome