血液一般檢驗-紅細胞檢驗ppt課件

1、第二章 血液一般檢驗,血常規(guī)檢驗報告單,第三節(jié) 紅細胞檢驗,一、紅細胞計數(shù)二、血紅蛋白測定三、血細胞比容測定四、紅細胞平均指數(shù)五、網(wǎng)織紅細胞計數(shù),本 節(jié) 內(nèi) 容,六、紅細胞沉降率測定,七、紅細胞形態(tài)檢查,一、紅細胞計數(shù)（RBC） 紅細胞計數(shù)（RBC）是測定單位容積血液中紅細胞數(shù)量。 RBC與血紅蛋白和血細胞比容結(jié)合，常作為診斷貧血、真性紅細胞增多癥及紅細胞增多的主要指標之一,一）檢測原理,顯微鏡法的檢測原理：采用等滲稀釋液將血液標本稀釋一定倍數(shù)（200倍）后，充入改良牛鮑血細胞計數(shù)板中，在顯微鏡下計數(shù)一定區(qū)域（體積）內(nèi)的紅細胞數(shù)量，經(jīng)換算求出每升血液中紅細胞數(shù)量,二）操作步驟 顯微鏡法 準備稀

2、釋液：取一試管，加入紅細胞稀釋液2 ml 。 采血和加血：準確采集末梢血或吸取新鮮靜脈抗凝血10l ，加至上述稀釋液中，立即混勻。 充池：準備計數(shù)板、充分混勻稀釋液、充池，室溫靜置23 min ，待細胞下沉。 計數(shù)：高倍鏡下計數(shù)中央大方格內(nèi)4角和正中5個中方格內(nèi)的紅細胞數(shù)。 計算,三）方法評價,常用紅細胞計數(shù)稀釋液組成與作用,四）質(zhì)量保證 血細胞計數(shù)質(zhì)量保證的關(guān)鍵是控制計數(shù)誤差。血細胞計數(shù)誤差可來源于技術(shù)誤差、儀器誤差和技術(shù)域誤差，可通過減小誤差進行紅細胞計數(shù)的質(zhì)量控制,血細胞計數(shù)誤差種類與原因,五）參考區(qū)間 成年：男性 （4.05.5）1012/L， 女性 （3.55.0）1012/L。 新

3、生兒（6.07.0）1012/L,六）臨床意義 1生理性變化 紅細胞數(shù)量受到許多生理因素影響，但與相同年齡、性別人群的參考區(qū)間相比，一般在20%以內(nèi),紅細胞生理性變化與臨床意義,2病理性變化 （1）病理性增多,2）病理性減少：見于各種原因?qū)е碌呢氀?貧血是指外周血中單位體積內(nèi)血紅蛋白（Hb）、紅細胞計數(shù)（RBC）和（或）血細胞比容（HCT）低于參考區(qū)間下限,病因不同可將貧血分為3大類。此外，藥物也可引起貧血 。 1）紅細胞生成減少：骨髓功能衰竭的再生障礙性貧血、急性造血功能停滯等。造血物質(zhì)缺乏或利用障礙，如腎性貧血、缺鐵性貧血（鐵缺乏）、鐵粒幼細胞貧血（鐵利用障礙）、巨幼細胞貧血（葉酸、維生素

4、B12缺乏性DNA合成障礙）等。 2）紅細胞破壞過多 3）紅細胞丟失（失血）：如急性、慢性失血性貧血,紅細胞破壞過多的原因與臨床意義,引起貧血的藥物與機制,二、血紅蛋白測定（Hb或HGB） 血紅蛋白是在人體有核紅細胞及網(wǎng)織紅細胞內(nèi)合成的一種含色素輔基的結(jié)合蛋白質(zhì)，是紅細胞內(nèi)的運輸?shù)鞍住?每個Hb分子含有4條珠蛋白肽鏈，每條肽鏈結(jié)合1個亞鐵血紅素，形成具有四級空間結(jié)構(gòu)的四聚體，以利于結(jié)合O2和CO2,一）檢測原理 HiCN法檢測原理：血紅蛋白（SHb除外）中的亞鐵離子（Fe2+）被高鐵氰化鉀氧化為高鐵離子（Fe3+），血紅蛋白轉(zhuǎn)化成高鐵血紅蛋白（Hi）。Hi與氰化鉀（KCN）中的氰離子反應(yīng)生成H

5、iCN。HiCN最大吸收波峰為540nm，波谷為504nm。在特定條件下，HiCN毫摩爾消光系數(shù)為44L/（mmolcm）。HiCN在540nm處的吸光度與濃度成正比，根據(jù)測得吸光度可求得血紅蛋白濃度,十二烷基硫酸鈉血紅蛋白（SDS-Hb）檢測原理： SDS作為一種陰離子表面活性劑，具有輕度氧化作用。血液中除SHb以外的所有血紅蛋白均可與低濃度的SDS作用，亞鐵血紅素被氧化成穩(wěn)定的棕紅色高鐵血紅素樣復(fù)合物（SDS-Hb），最大吸收峰在538nm,二）操作步驟 1、氰化高鐵血紅蛋白測定法（直接定量測定法） 準備轉(zhuǎn)化液：取一試管，加入5mlHiCN轉(zhuǎn)化液。 采血與轉(zhuǎn)化：采集全血20l，加到盛有轉(zhuǎn)化

6、液的試管底部，與轉(zhuǎn)化液充分混勻，靜置5min。 測定吸光度：用符合WHO標準的分光光度計，在波長540nm處、光徑為1.000cm、以HiCN試劑調(diào)零，測定標本的吸光度（A）。 計算,2十二烷基硫酸鈉血紅蛋白測定法 制備標準曲線：取4份不同濃度抗凝血分別用 HiCN 法及本法測定每份血液的血紅蛋白濃度和吸光度，以 HiCN 法測得的血紅蛋白濃度為橫坐標，本法測得的吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。 測定：取應(yīng)用液5ml于試管中，加入全血20l充分混勻。5min后置538nm下以應(yīng)用液調(diào)零，測定其吸光度，查標準曲線即可得出血紅蛋白濃度,三）方法學(xué)評價,HiCN測定法是WHO和國際血液學(xué)標準化委員會I

7、CSH推薦的參考方法，由于HiCN試劑含有劇毒的氰化鉀，各國均相繼研發(fā)出不含氰化鉀的血紅蛋白測定方法，有的測定法已用于血液分析儀，但其標準應(yīng)溯源到HiCN量值,血紅蛋白測定的方法學(xué)評價,HiCN轉(zhuǎn)化液的作用與評價,四）質(zhì)量保證,五）參考區(qū)間 成年：男性 120160 g/L， 女性 110150 g/L。 新生兒：170200 g/L,六）臨床意義 與紅細胞計數(shù)相似，但判斷貧血程度優(yōu)于紅細胞計數(shù)。 根據(jù)Hb濃度可將貧血分為4度： 輕度貧血：Hb120g/L（女性Hb110g/L）； 中度貧血：Hb90g/L； 重度貧血：Hb60g/L； 極重度貧血：Hb30g/L。 當RBC1.51012/L

8、，Hb45g/L時，應(yīng)考慮輸血,三、血細胞比容測定(Hct) 血細胞比容（Hct，HCT ，PCV）是指一定體積的全血中紅細胞所占體積的相對比例。 HCT高低與紅細胞數(shù)量、平均體積及血漿量有關(guān)，主要用于貧血、真性紅細胞增多癥和紅細胞增多的診斷，血液稀釋和血液濃縮變化的測定，紅細胞平均值的計算等,一）檢測原理 HCT直接測定采用離心法，間接測定采用血液分析儀法。 1離心法 常用微量法和溫氏法，其檢測原理基本相同，但離心力不同。血液離心后分5層，自上而下分別為血漿層、血小板層、白細胞和有核紅細胞層、還原紅細胞層和氧合紅細胞層。讀取結(jié)果以還原紅細胞層為準，見右圖,血細胞比容結(jié)果判斷,還原紅細胞層,2

9、血液分析儀法 由紅細胞計數(shù)和紅細胞平均體積導(dǎo)出HCT，HCT紅細胞計數(shù)紅細胞平均體積,二）操作步驟 1微量法 吸血：用虹吸法將血液充入專用毛細管中，至2/3(50mm)處 封口：把毛細管未吸血的一端垂直插入密封膠，封口。 離心：把毛細管放入專用高速離心機，以RCF12 500g離心5min。 讀數(shù)：毛細管置于專用讀數(shù)板的凹槽中，移動滑尺刻度至還原紅細胞層表層，讀出相對應(yīng)的數(shù)值；或用刻度尺分別測量紅細胞層和全血層長度，計算其比值，即為HCT,2溫氏法 加標本：用毛細滴管吸取混勻的抗凝血，插入溫氏管底部，將血液緩慢注入至刻度“10”處，用小橡皮塞塞緊管口。 離心：將溫氏管置于離心機，以相對離心力R

10、CF為2264g離心30min。 讀數(shù)：以還原紅細胞層表面為準，讀取紅細胞層柱高的毫米數(shù)，乘以0.01，即為HCT值,三）方法評價,HCT測定的方法學(xué)評價,四）質(zhì)量保證,五）參考區(qū)間 成年：男性：0.400.50； 女性：0.370.48。 新生兒： 0.470.67。 兒童：0.330.42,六）臨床意義 與紅細胞計數(shù)相似。HCT減低是診斷貧血的指標，若紅細胞數(shù)量正常，血漿量增加，為假性貧血；HCT增加可因紅細胞數(shù)量絕對增加或血漿量減少所致。HCT的主要應(yīng)用價值為： 1臨床補液量的參考 2真性紅細胞增多癥診斷指標 3計算紅細胞平均指數(shù)的基礎(chǔ),HCT增高和減低的原因,四、紅細胞平均指數(shù) 紅細胞

11、平均體積（MCV） 紅細胞平均血紅蛋白量（MCH） 紅細胞平均血紅蛋白濃度（MCHC） 紅細胞平均指數(shù)有助于深入認識紅細胞特征，為貧血的鑒別診斷提供線索,一）檢測原理 1手工法 根據(jù)RBC、Hb、HCT測定結(jié)果計算紅細胞平均指數(shù),2血液分析儀法 MCV：由血液分析儀直接測定導(dǎo)出； MCH：由儀器測定HGB、RBC， MCHHGB/RBC； MCHC：HGB/（RBCMCV,二）操作步驟 檢測RBC、Hb、HCT 計算：根據(jù)RBC、Hb、HCT測定結(jié)果計算紅細胞平均指數(shù),三）方法評價 手工法紅細胞平均指數(shù)由RBC、HGB、HCT測定后計算而來，因此，必須采用同一抗凝血標本，且所檢測的結(jié)果必須準確

12、。儀器法紅細胞平均指數(shù)的測定同樣依賴于RBC、HGB和MCV測定的準確性,四）參考區(qū)間,五）臨床意義,貧血形態(tài)學(xué)分類及臨床意義,補：紅細胞體積分布寬度（RDW）測定,RDW：是反映外周血紅細胞體積異質(zhì)性的參數(shù)，紅細胞體積大小的變異系數(shù)表示,參考區(qū)間】11.5%14.5,臨床意義,一）結(jié)合MCV用于貧血的形態(tài)學(xué)分類,貧血形態(tài)學(xué)分類,形態(tài)學(xué)分類,MCV,RDW,增高 正常 大細胞均一性貧血 部分再生障礙性貧血 增高 大細胞非均一性貧血 巨幼細胞貧血、MDS,病因,正常 正常 正常細胞均一性貧血 急性失血性貧血 增高 正常細胞非均一性貧血 再生障礙性貧血、酶缺乏等,減低 正常 小細胞均一性貧血 珠蛋

13、白生成障礙性貧血 增高 小細胞非均一性貧血 缺鐵性貧血,二）缺鐵性貧血的診斷和鑒別診斷,網(wǎng)織紅細胞,五、網(wǎng)織紅細胞計數(shù),網(wǎng)織紅細胞（Ret，RET）是介于晚幼紅細胞和成熟紅細胞之間的過渡細胞，略大于成熟紅細胞，其胞質(zhì)中殘存的嗜堿性物質(zhì)RNA經(jīng)堿性染料活體染色后，形成藍色或紫色的點粒狀或絲網(wǎng)狀沉淀物。 ICSH將網(wǎng)織紅細胞分為4型,網(wǎng)織紅細胞分形及特征,一）檢測原理 1普通顯微鏡法 活體染料的堿性著色基團可與網(wǎng)織紅細胞RNA的磷酸基結(jié)合，使RNA膠體間的負電荷減少而發(fā)生凝縮，形成藍色的點狀、線狀或網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。 2血液分析儀法 特殊染料與網(wǎng)織紅細胞中RNA結(jié)合后進行RNA定量，可精確計數(shù)網(wǎng)織紅細胞占

14、成熟紅細胞的百分數(shù)（Ret%），并可根據(jù)RNA含量將網(wǎng)織紅細胞分類及計算網(wǎng)織紅細胞其他參數(shù),二）操作步驟 1試管法 加染液：取一試管，加入染液2滴。 加血染色：注入新鮮全血2滴，立即混勻，室溫下放置1520min。 制備涂片：取混勻染色血1小滴制成薄血涂片，自然干燥。 觀察：低倍鏡下選擇紅細胞分布均勻、著色好的部位。 計數(shù)：常規(guī)法是在油鏡下計數(shù)至少1000個紅細胞中的網(wǎng)織紅細胞；Miller窺盤計數(shù)法是將Miller窺盤放置于目鏡內(nèi)，于Miller窺盤的小格A內(nèi)計所有成熟RBC，在大格B內(nèi)（含小格）計數(shù)網(wǎng)織紅細胞數(shù),Miller窺盤結(jié)構(gòu)示意圖,計算,2玻片法 加染液：于載玻片的一端滴加10g/

15、L煌焦油藍乙醇溶液1滴，自然干燥后備用。 加血液：取血l滴在干燥的染料上，用推片角將血滴與染料混勻，用另一載玻片蓋在此載玻片上，使兩玻片粘合。 制備涂片：510min后，移開上層玻片，取l小滴推制成血涂片。 觀察、計數(shù)和計算：同試管法,三）方法評價,網(wǎng)織紅細胞計數(shù)的方法學(xué)評價,四）質(zhì)量保證 以手工計數(shù)法為重點。 1選擇合適的染料 用于網(wǎng)織紅細胞檢測的活體染料很多，有煌焦油藍（brilliant cresyl blue）、新亞甲藍（new methylene blue）、中性紅、亞甲藍、甲苯胺藍等,網(wǎng)織紅細胞活體染料的評價,2. 正確辨認網(wǎng)織紅細胞 外周血液網(wǎng)織紅細胞主要為型，凡含有2個或2個以

16、上顆粒、且顆粒必須遠離細胞邊緣的紅細胞均應(yīng)計為網(wǎng)織紅細胞,紅細胞各種顆?；虬w的鑒別,3網(wǎng)織紅細胞計數(shù)方法 （1）Miller窺盤法：ICSH及我國衛(wèi)生部臨床檢驗中心推薦使用Miller窺盤法（見下圖）進行網(wǎng)織紅細胞計數(shù)。 （2）顯微成像系統(tǒng),Miller窺盤結(jié)構(gòu)示意圖,高熒光強度網(wǎng)織紅細胞（HFR） 中熒光強度網(wǎng)織紅細胞（MFR） 低熒光強度網(wǎng)織紅細胞（LFR,ICSH建議，為控制CV在10%內(nèi)，應(yīng)根據(jù)網(wǎng)織紅細胞比率，決定在連續(xù)視野中Miller窺盤小方格內(nèi)實際需要計數(shù)的紅細胞數(shù)量，見下表,五）參考區(qū)間 成人、兒童：0. 51.5。 新生兒：2.06.0。 成人絕對值：（2484）109/

17、L,六）臨床意義 網(wǎng)織紅細胞計數(shù)是反映骨髓造血功能的重要指標。 1評價骨髓增生能力，判斷貧血類型 2評價療效 3放療和化療的監(jiān)測,常見網(wǎng)織紅細胞參數(shù)及評價,小,六、紅細胞沉降率測定 紅細胞沉降率（ESR）簡稱血沉，是指在規(guī)定條件下，離體抗凝全血中的紅細胞自然下沉的速率,一）檢測原理 1魏氏（Westergren）法 將枸櫞酸鈉抗凝血置于特制的刻度血沉管內(nèi)，在室溫下垂直立于血沉架1h后，讀取上層血漿的高度，即為紅細胞沉降率。血沉測定實際上是測量單位時間內(nèi)紅細胞下沉后血漿段的高度，而并非真正紅細胞沉降的速度。 2自動血沉儀法 全自動血沉儀根據(jù)紅細胞下沉過程中血漿濁度的改變，采用光電比濁法、紅外線掃

18、描法或攝影法，動態(tài)分析紅細胞下沉各個時段血漿的透光度，以微電腦記錄并打印結(jié)果,二）操作步驟 1魏氏法 加抗凝劑：取濃度為109mmol/L的枸櫞酸鈉溶液0.4ml加入試管中。 采血：采靜脈血1.6ml，加入試管中，混勻。 吸血：混勻全血吸入血沉管內(nèi)至刻度“0”處，拭去管外殘留余血。 立血沉管：將血沉管直立于血沉架上。 讀數(shù)：1h后，準確讀取紅細胞下沉后露出的血漿段高度，即為紅細胞沉降率。 2自動血沉儀法 按儀器操作規(guī)程操作,三）方法評價,血沉測定的方法學(xué)評價,四）質(zhì)量保證 1ICSH規(guī)定的參考方法 可用于驗證其他方法的可靠性 未稀釋標本結(jié)果糾正公式為： 糾正ESR（mm/h）（未稀釋標本ESR

19、0.86）12 其結(jié)果在95%限定值范圍內(nèi)，表明方法滿意。因ESR影響因素復(fù)雜，新方法應(yīng)建立特定的自身參考區(qū)間,ICSH參考方法與常規(guī)工作法ESR檢測結(jié)果比較,2魏氏法對抗凝劑、血液標本及 物理條件的要求,3質(zhì)控方法 參考方法常作為常規(guī)試驗的質(zhì)控方法，但參考方法費時、費力，通常采用替代的穩(wěn)定化全血質(zhì)控品作為每日質(zhì)控。 進行質(zhì)控必須要滿足以下條件：EDTA抗凝，HCT為0.35左右，ESR在15105 mm/h范圍，檢測前將標本顛倒混勻16次,4. 血沉測定影響因素,五）參考區(qū)間 魏氏法：男性015mm/h，女性020mm/h。 （六）臨床意義 血沉主要用于觀察病情的動態(tài)變化、區(qū)別功能性與器質(zhì)性

20、病變、鑒別良性與惡性腫瘤等,1血沉加快 （1）生理性：見下表,2）病理性：對于疾病鑒別和動態(tài)觀察具有一定參考價值。 2血沉減慢 見于真性紅細胞增多癥、低纖維蛋白原血癥、充血性心力衰竭、紅細胞形態(tài)異常等,病理性血沉加快的臨床意義,七、紅細胞形態(tài)檢查,一）檢測原理及方法學(xué)評價,紅細胞形態(tài)檢查的檢測原理及方法學(xué)評價,二）操作步驟 制備良好的染色血涂片。 低倍鏡觀察：低倍鏡下觀察染色血涂片中紅細胞的分布和染色情況。選擇細胞分布均勻、染色良好、紅細胞緊密排列但不重疊區(qū)域。 油鏡觀察：滴加香柏油1滴，在油鏡下仔細觀察上述區(qū)域中紅細胞的形態(tài)，同時瀏覽全片是否存在其他異常細胞,三）質(zhì)量保證,紅細胞形態(tài)檢查的質(zhì)

21、量保證,人為原因造成的紅細胞形態(tài)異常,四）臨床意義 1正常形態(tài)紅細胞 正常紅細胞呈雙凹圓盤形，大小相對均一，平均直徑7.2m（6.77.7m）。 Wrihgt染色后為粉紅色或琥珀色，血紅蛋白充盈良好，呈正色素性、向心性淡染。 中央部位為生理性淡染區(qū)，大小約為細胞直徑的1/3。 胞質(zhì)內(nèi)無異常結(jié)構(gòu),正常形態(tài)紅細胞,正常形態(tài)紅細胞（掃描電鏡,正常形態(tài)紅細胞常見于健康人，但也可見于急性失血性貧血、部分再生障礙性貧血等,2異常形態(tài)紅細胞 在排除人為因素后，若血涂片中出現(xiàn)異常形態(tài)紅細胞，且數(shù)量增多，常提示病理性改變。 常見的異常形態(tài)紅細胞可分為紅細胞大小、形狀、血紅蛋白含量、結(jié)構(gòu)和排列異常,紅細胞大小異常

22、的臨床意義,紅細胞大小不均,巨紅細胞,A.小紅細胞；B.巨幼紅細胞；C.大紅細胞；D.紅細胞大小不均,紅細胞形狀異常的臨床意義,紅細胞形狀異常的臨床意義,球形紅細胞,橢圓形紅細胞,靶形紅細胞,棘形紅細胞,淚滴形紅細胞,鋸齒形紅細胞,橢圓型紅細胞,口形紅細胞,球型紅細胞,靶形紅細胞,A.球形紅細胞，B.鐮形紅細胞； C.緡錢狀紅細胞；D.棘形紅細胞； E.靶紅細胞,A.裂紅細胞，B.淚滴形紅細胞； C.新月形紅細胞；D.口形細胞； E.橢圓形紅細胞,鋸齒形紅細胞,淚滴形紅細胞,紅細胞形態(tài)不整,紅細胞血紅蛋白含量異常的臨床意義,低色素性紅細胞,嗜多色性紅細胞,染色異常,A.正常紅細胞，B.低色素性 ； C.高色素性 ；D.嗜多色性,紅細胞結(jié)構(gòu)異常和排列異常的臨床意義,豪焦小體,卡波環(huán),嗜堿性點彩紅細胞,紅細胞緡錢狀形成,有核紅細胞,A.嗜堿性點