常見腫瘤免疫標(biāo)記ppt課件

常見腫瘤免疫標(biāo)記,常見腫瘤免疫標(biāo)記的意義,江蘇省腫瘤醫(yī)院病理科張靜淵,常見腫瘤免疫標(biāo)記,免疫組化的基本原理,抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))，對(duì)其進(jìn)行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry)。,常見腫瘤免疫標(biāo)記,常用方法,EPOS（一步法）SP法-鏈霉菌抗生物素蛋白過氧化酶連接法二步EnVision（優(yōu)點(diǎn)：敏感性大幅增強(qiáng)，不受內(nèi)源性生物素干擾）SABC法（三步法）,常見腫瘤免疫標(biāo)記,結(jié)果判定,每項(xiàng)指標(biāo)都有其抗體結(jié)合的對(duì)應(yīng)位點(diǎn)，如果定位不準(zhǔn)確，則不能判為陽性。結(jié)果中的“”有相當(dāng)一部分為背景與腫瘤表達(dá)均呈陽性，無法區(qū)分，其原因大致有：孵育過長；抗原抗體交叉反應(yīng)；沖洗不足；血清封閉不足或錯(cuò)誤；二抗與組織非特異性結(jié)合。標(biāo)本沒有按規(guī)范程序固定。（固定液、固定時(shí)間）,常見腫瘤免疫標(biāo)記,腸癌中P53的表達(dá),常見腫瘤免疫標(biāo)記,腸癌中的MDR表達(dá),常見腫瘤免疫標(biāo)記,肺癌中的Ki-67表達(dá),常見腫瘤免疫標(biāo)記,胃癌中的EGFR表達(dá),常見腫瘤免疫標(biāo)記,胃癌中的AFP表達(dá),常見腫瘤免疫標(biāo)記,消化道癌的標(biāo)記,我科常用胃癌標(biāo)記：VEGF,EGFR,P-gp,GST-,Topo-,Ki-67,AFP,P53,C-erbB-2,C-erbB-3,C-erbB-4,TS,TP.我科常用大腸癌標(biāo)記：VEGF,EGFR,P-gp,GST-,Ki-67,P53,MSH2,P21,TS,TP.,常見腫瘤免疫標(biāo)記,耐藥相關(guān)基因的標(biāo)記,P-糖蛋白（P-gp）谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（GST-）DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶（Topo-）腫瘤產(chǎn)生耐藥的生物學(xué)基礎(chǔ)取決于腫瘤多藥耐藥基因的擴(kuò)增，瘤組織生成GST-、TOPO-和P-gp的含量升高，則耐藥性增強(qiáng)。影響化療療效的主要因素是細(xì)胞內(nèi)耐藥、抗腫瘤藥的藥代動(dòng)力學(xué)/藥效學(xué)、腫瘤血供、藥物擴(kuò)散Pgp-MDR及腫瘤細(xì)胞增殖能力等。其中MDR的關(guān)注點(diǎn)是mdri/Pgp、MDR、LRP、拓?fù)洚悩?gòu)酶-、谷胱甘肽代謝和凋亡，或腫瘤細(xì)胞增殖活性介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)多向耐藥基因的擴(kuò)增。,常見腫瘤免疫標(biāo)記,特別提醒,對(duì)應(yīng)耐藥關(guān)系：TOPO-陽性對(duì)應(yīng)多柔比星、米托蒽醌、鬼臼類；P-gp陽性對(duì)應(yīng)長春新堿、VP-6、蒽環(huán)類；GST-陽性對(duì)應(yīng)多種烷化劑耐藥。據(jù)某些學(xué)者統(tǒng)計(jì)，近一半的大腸癌對(duì)GST-、TOPO-所介導(dǎo)的抗癌藥物順鉑和拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑產(chǎn)生耐藥傾向，并大多呈強(qiáng)耐藥性，提示大腸癌聯(lián)合化療用藥時(shí)，對(duì)順鉑和拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑的選擇應(yīng)慎重考慮。P-gp陽性表達(dá)者對(duì)P-gp相關(guān)的主要抗癌藥長春新堿、阿霉素等有耐藥傾向。,常見腫瘤免疫標(biāo)記,表皮生長因子受體相關(guān)標(biāo)記,表皮生長因子受體（EGFR）、人類表皮生長因子受體-2（C-erbB-2）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）。C-erbB-2為HER-2癌基因的表達(dá)產(chǎn)物，HER-2為原癌基因，廣泛存在于各種組織中。通常處于非激活狀態(tài)，被刺激激活后具有腫瘤轉(zhuǎn)化活性，其表達(dá)越高，瘤株對(duì)化療越不敏感，越易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。VEGF與消化道癌形成密切相關(guān)，并參與其侵襲和轉(zhuǎn)移，可作為預(yù)后判斷指標(biāo)。三者在消化道癌中的表達(dá)具有一致性，它們的聯(lián)合檢測可作為判斷胃癌預(yù)后、篩選高危轉(zhuǎn)移患者的有效指標(biāo)。,常見腫瘤免疫標(biāo)記,酪氨酸激酶I型受體家族,I型表皮生長因子受體是廣泛分布于人體各組織細(xì)胞膜上的多功能糖蛋白，分享由細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域及胞漿結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的分子信號(hào)傳導(dǎo)通道。其家族包括：HER1(EGFR)、HER2(C-erbB-2)、HER3、HER4四種同源受體。其受體及配體在多種實(shí)體瘤如NSCLC、BC、CC、NPC、GC等中過表達(dá)，正常組織中低表達(dá)。據(jù)報(bào)道，C-erbB-3蛋白在慢性胰腺炎、外分泌胰腺癌與胃腸道腫瘤中有明顯表達(dá)。,常見腫瘤免疫標(biāo)記,p53,正常p53的生物功能好似“基因組衛(wèi)士（guardianofthegenome）”，在G1期檢查DNA損傷點(diǎn)，監(jiān)視基因組的完整性。如果修復(fù)失敗，P53蛋白則引發(fā)細(xì)胞凋亡。如果p53基因突變，對(duì)細(xì)胞的增殖將失去控制(顯性負(fù)調(diào)控)。p53基因突變與人類50%的腫瘤有關(guān)。,常見腫瘤免疫標(biāo)記,p21,p21可以和p53共同構(gòu)成細(xì)胞周期G1檢查站，減少受損DNA的復(fù)制，發(fā)揮抑癌作用.P21作為一種負(fù)性調(diào)節(jié)因子,在依賴野生型p53的表達(dá)通路上與腫瘤的表達(dá)、表達(dá)含量、表達(dá)位置,以及預(yù)后都密切相關(guān).當(dāng)P21、Cyclin、CDK、PCNA四聚體的功能受到抑制,則使增殖信號(hào)大量活化,導(dǎo)致細(xì)胞異化和惡變.,常見腫瘤免疫標(biāo)記,PCNA:Proliferatingcellnuclearantigen,常見腫瘤免疫標(biāo)記,p53是G1期能否進(jìn)入S期的分子警察,復(fù)制,DNA損傷,p53,p21,P21-cyclin-CDK復(fù)合物,Rb-E2F,Rb-P+E2F,阻滯G1期,修復(fù),無法修復(fù),凋亡,誘導(dǎo),（P21CIP1）,（Cyclin-CDK活性抑制）,啟動(dòng)增殖,常見腫瘤免疫標(biāo)記,聯(lián)合表達(dá)意義,P53、c-erbB-2、P21的表達(dá)與消化道癌的分化程度,浸潤程度,轉(zhuǎn)移程度及臨床分期呈正相關(guān).多基因聯(lián)合表達(dá)檢測對(duì)消化道癌預(yù)后判斷明顯優(yōu)于單基因表達(dá)檢測.據(jù)國外文獻(xiàn)報(bào)道，分化差的大腸癌中，P53、P21蛋白的過表達(dá)常伴隨著Kras、p53基因的高突變，所以該對(duì)應(yīng)關(guān)系很可能參與了大腸癌的形成及演進(jìn)。,常見腫瘤免疫標(biāo)記,Ki-67,增殖細(xì)胞核抗原(Ki-67)對(duì)于研究腫瘤細(xì)胞的生物化學(xué)特性、惡性程度及預(yù)后判斷等具有一定的價(jià)值。Ki-67是真核細(xì)胞G1和S期合成的一種36kD的核蛋白，是DNA聚合酶輔助蛋白，直接參與細(xì)胞增殖過程中DNA的復(fù)制。在靜止期的細(xì)胞內(nèi)含量很少，從G1晚期開始增加，S期達(dá)到高峰，G2期和M期呈明顯下降，其表達(dá)程度能客觀反映瘤細(xì)胞增殖活性。,常見腫瘤免疫標(biāo)記,AFP,AFP（甲胎蛋白）是在體液中發(fā)現(xiàn)的70kD的癌胚抗原，正常表達(dá)于胎肝，常態(tài)下成人組織中呈陰性。在部分生殖細(xì)胞腫瘤（尤其卵黃囊瘤）和多數(shù)肝細(xì)胞肝癌中高表達(dá)。依據(jù)其病理組織形態(tài)學(xué)特點(diǎn)和癌細(xì)胞內(nèi)AFP染色陽性表達(dá)，并對(duì)比3個(gè)月胚胎胃腸組織學(xué)的改變，將組織學(xué)類型分為4個(gè)亞型：肝樣型（34.9），胎兒胃腸型（23.8）和肝樣型伴腸胚分化混合型（38.1）以及卵黃囊瘤樣型（3.2）。結(jié)論：AFP陽性胃癌與普通型胃癌不同，是一組具有獨(dú)特臨床病理特征的高度惡性腫瘤。,常見腫瘤免疫標(biāo)記,MSH2,MSH2基因是錯(cuò)配修復(fù)基因的重要成員之一,其表達(dá)的蛋白參與DNA的錯(cuò)配修復(fù)反應(yīng)。MSH2等錯(cuò)配修復(fù)基因缺陷導(dǎo)致錯(cuò)配修復(fù)蛋白的失表達(dá)及微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(MSI+)進(jìn)而引起基因組的不穩(wěn)定,誘發(fā)腫瘤,尤其是在遺傳性非息肉性大腸癌(HNPCC)常見有MSH2基因缺陷。Muir-Torre綜合征、卵巢癌也與該基因密切相關(guān)。有文獻(xiàn)稱，若錯(cuò)配修復(fù)蛋白2在回腸與結(jié)腸中隱窩細(xì)胞有失表達(dá)，隱窩細(xì)胞會(huì)快速更新，產(chǎn)生分化細(xì)胞遷移至隱窩腺腔內(nèi)，參與了腫瘤的形成。,常見腫瘤免疫標(biāo)記,HNPCC的遺傳因素：(1)家庭成員中有三人以上患有結(jié)直腸癌，其中兩人以上為同一代；(2)至少相近的兩代人均有發(fā)??；(3)其中至少有一人是在50歲以前診斷為結(jié)直腸癌。若滿足上述因素中一條，一級(jí)親屬亦應(yīng)進(jìn)行HNPCC突變檢測。攜帶MLH1和MSH2突變者罹患結(jié)直腸癌的一生累計(jì)風(fēng)險(xiǎn)高達(dá)80%。若免疫組化檢測出腫瘤細(xì)胞核為陰性，提示該基因失活，發(fā)生了hMLH1和hMSH2的基因的胚系突變。,常見腫瘤免疫標(biāo)記,TS&TP,5-FU代謝(DPD，TP，dUTPase)、DNA修復(fù)(ERCC2，XRCC1)，血管生成(COX-2，EGFR，IL-8，PLA2)以及藥物解毒(GST-)基因的mRNA水平影響著晚期消化道癌患者的預(yù)后。TS（胸苷酸合成酶）是DNA合成中的限速酶，在DNA合成與修復(fù)中起重要作用，并與細(xì)胞分裂和增生關(guān)系密切。TS的高表達(dá)預(yù)示著腫瘤的高侵襲性。TS與ERCC1（切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因）分別為標(biāo)志氟尿嘧啶(5-Fu)、奧沙利鉑(L-OHP)耐藥的指標(biāo)。TP（胸苷磷酸化酶）基質(zhì)TP表達(dá)對(duì)腫瘤微血管密度產(chǎn)生顯著影響。TP表達(dá)對(duì)預(yù)測5-FU化療療效、判斷結(jié)腸癌預(yù)后有一定的指導(dǎo)意義。,常見腫瘤免疫標(biāo)記,肺癌的標(biāo)記,我科常用肺癌標(biāo)記：VEGF-C3,EGFR,P-gp,p53,Ki-67,PE,CD24,CA125,bcl-2,Tslc1.,常見腫瘤免疫標(biāo)記,VEGF-C3,血管內(nèi)皮生長因子-C(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF-C)是迄今發(fā)現(xiàn)的最重要的淋巴管生成因子,VEGF-C誘導(dǎo)的淋巴管生成與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。因此,以VEGF-C為靶點(diǎn)抑制淋巴管生成已成為抗腫瘤轉(zhuǎn)移的重要策略之一。,常見腫瘤免疫標(biāo)記,CA125,CA125（糖鏈抗原125）又稱卵巢癌抗原（OCA）是由一組糖基轉(zhuǎn)移酶綜合作用而產(chǎn)生，主要存在于癌組織中。肺癌中CA125敏感性56.43%、特異性84.72%。CA125的檢測在對(duì)NSCLC的診斷、NSCLC與SCLC的鑒別診斷中具有一定價(jià)值,對(duì)肺癌的療效觀察、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)監(jiān)測及預(yù)后有較大的輔助診斷意義.,常見腫瘤免疫標(biāo)記,bcl-2,Bcl-2蛋白是bcl-2原癌基因的編碼產(chǎn)物，是一種定位于線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和連續(xù)的核周膜的25kD膜蛋白，廣泛分布。Bcl-2蛋白家族是一個(gè)特別的家族，成員中有些促進(jìn)凋亡，如Bad、Bid、Bax，有些成員阻止細(xì)胞凋亡,如Bcl-2、Bcl-x、Bcl-w。Bcl-2能夠阻止細(xì)胞色素c從線粒體釋放到細(xì)胞質(zhì)，從而抑制了細(xì)胞凋亡。有文獻(xiàn)稱，Bcl-2蛋白過度表達(dá)在肺癌發(fā)生中起重要作用,是肺癌的早期表現(xiàn),有可能成為肺癌早期診斷的重要參考指標(biāo)。,常見腫瘤免疫標(biāo)記,Tslc1,TSLC1（腫瘤阻抑基因1）是一種新的抑癌基因,其失活與消化系腫瘤的發(fā)生,浸潤轉(zhuǎn)移及預(yù)后有著重要的關(guān)系.TSLC1的失活重要機(jī)制之一是基因甲基化.TSLC1抑癌機(jī)制目前還不完全明確,認(rèn)為與細(xì)胞黏附,細(xì)胞間信號(hào)傳導(dǎo),參與腫瘤免疫,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和抑制細(xì)胞生長周期有關(guān).,常見腫瘤免疫標(biāo)記,CD24,CD24是一種低分子量高度糖基化的黏蛋白樣的黏附分子，通過糖基磷脂酰肌醇黏附在細(xì)胞膜上，最初被認(rèn)為是一種B細(xì)胞標(biāo)志物，在B細(xì)胞分化早期階段表達(dá)。最近國外一些研究發(fā)現(xiàn)，CD24在上皮細(xì)胞來源的腫瘤如非小細(xì)胞肺癌、前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌、卵巢癌等腫瘤中呈高表達(dá)，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)CD24的表達(dá)和腫瘤的侵襲性有