微生物實(shí)驗操作ppt課件

.,選修1專題二,課題1微生物的實(shí)驗室培養(yǎng),.,課題1微生物的實(shí)驗室培養(yǎng),微生物的實(shí)驗室培養(yǎng)條件：,（1）合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件,（2）確保其他微生物無法混入,一.培養(yǎng)基,1.概念：,按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。,.,2.種類：（按物理形態(tài)分）,液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基,應(yīng)用微生物分離、鑒定、計數(shù)和菌種保存等方面,按照培養(yǎng)基用途分,選擇性培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基,按照培養(yǎng)基的成分來分,合成培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基,.,3.成分：,思考：各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都包括哪些成分？,水、無機(jī)鹽、碳源、氮源、（生長因子）,+滿足微生物對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)、氧氣的要求,C,.,二.無菌技術(shù),思考：1.什么是無菌技術(shù)？包括哪些方面？2.無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？（P15旁欄思考）3.消毒和滅菌有何不同？4.常用的消毒和滅菌方法有哪些？,無菌技術(shù)：泛指培養(yǎng)微生物操作中，所有防止雜菌污染的方法。,無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。,.,C,返回,.,3.常用的消毒方法：,煮沸消毒法，巴氏消毒法，紫外線或化學(xué)藥劑消毒法,常用的滅菌方法：,灼燒滅菌干熱滅菌高壓蒸汽滅菌：100kPa12115-30min,判斷下列各項是否需要消毒或滅菌。如需要，選擇合適方法。（1）豆?jié){（2）游泳池（3）超凈工作臺（4）玻棒、試管、吸管、錐形瓶（5）培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)皿（6）無菌水（7）牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（8）接種環(huán)、接種針（9）實(shí)驗操作者的雙手,牛奶,接種室、接種箱或超凈工作臺,接種工具，接種環(huán)、接種針或其他金屬用具,玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）,.,三.實(shí)驗操作-大腸桿菌的純化培養(yǎng),（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基計算稱量溶化滅菌倒平板（二）純化大腸桿菌最常用的接種方法有：平板劃線法和稀釋涂布平板法,（冷卻至50）,.,問題討論,涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？,應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。,.,菌種的保存,1、臨時保藏法：對象：溫度：缺點(diǎn)：2、甘油管藏法：對象：溫度：,結(jié)果分析與評價課題延伸,（P20）,頻繁使用的菌種,4（冰箱）,容易被污染或產(chǎn)生變異,長期保存的菌種,-20（冷凍箱）,.,返回,.,接種環(huán),接種針,返回,.,倒平板,討論1，2,討論3，4,.,平板劃線法,討論2，3,.,1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？,操作的第一步灼燒接種環(huán)：每次劃線前灼燒接種環(huán)：劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)：,避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；,殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。,及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。,.,2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？,以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。,劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落,返回1,.,涂布器,.,1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？,提示：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進(jìn)行倒平板了。,通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基,返回1,返回2,.,3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？,平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。,不要空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生,返回,.,選擇培養(yǎng)基,不加氮源的無氮培養(yǎng)基:分離固氮菌不加含碳有機(jī)物的無