ANCA熒光判讀與講解.ppt

抗中性粒細胞胞漿抗體（ANCA）,相關(guān)疾病IIF染色型特異性靶抗原抗體韋格納氏肉芽腫(WG)c,p(少見)PR3(85%),MPO(10%)顯微型多動脈炎(MPA)c,pPR3(30%),MPO(70%)壞死性新月體腎小球腎炎p,c(少見)PR3(25%),MPO(65%)（NCGN）過敏性肉芽腫性血管炎(CSS)p,c(少見)PR3(10%),MPO(60%)結(jié)節(jié)性多動脈炎(PAN)低陽性率PR3(5%),MPO(15%)抗腎小球基底膜疾病pMPO(30%)（抗GBM?。?ANCA臨床意義(1)：原發(fā)性系統(tǒng)性小血管炎,相關(guān)疾病IIF染色型特異性靶抗原抗體炎癥性腸病潰瘍性結(jié)腸炎(UC,60-80%)p,aBPI,lamina？其它克羅恩病(Crohns病,10-20%)p,aBPI,lamina？其它自身免疫性肝病原發(fā)性硬化性膽管炎(PSC,70-88%)p,aactin?BPI,其它原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC,3-18%)p,aactin?BPI,其它自身免疫性肝炎(AIH)p,aactin?BPI,其它結(jié)締組織病系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)p,aLF,CG,MPO(少見)類風濕性關(guān)節(jié)炎(RA)p,aLF,CG,MPO(少見)Felty綜合征p,aLF,CG,MPO(少見),ANCA臨床意義(2)：IBD/ALD/CTD,相關(guān)疾病IIF染色型特異性靶抗原抗體藥物性ANCA陽性血管炎藥物性狼瘡(DIL)pMPO（常見）LF,HEL甲狀腺功能亢進(PTU治療)p,aMPO,LF,HEL,BPI,其它呼吸系統(tǒng)炎性疾病囊性纖維化(CF)a,pBPI（91%）原發(fā)性支氣管擴張癥a,pBPI，其它原發(fā)性支氣管擴張a,pBPI，其它感染性疾病細菌(心內(nèi)膜炎、呼吸道感染)a,pBPI，CG，其它病毒(HIV感染)a,p不明真菌(著色真菌病)a,p不明原蟲(急性瘧疾、侵襲性阿米巴感染)a,pCG，PR3,ANCA臨床意義(3)：藥物性/感染性疾病,ANCA檢測方法及檢測指標,ANCA(抗中性粒細胞胞漿抗體),ANCA=Anti-NeutrophilCytoplasmAutoantibodies,中性粒細胞結(jié)構(gòu)：細胞直徑10-12um，核呈深染的彎曲桿狀（馬蹄鐵形）或分葉狀，分葉核一般為25葉，葉間有前戲的縮窄部相連。,ANCA(抗中性粒細胞胞漿抗體),歐蒙公司產(chǎn)品基質(zhì)是從O型血的人血中提取出來的中心粒細胞。ANCA的靶抗原位于中心粒細胞胞漿中，ANCA是從間接免疫熒光法中發(fā)現(xiàn)的。ANCA分兩種：cANCA及pANCA。,ANCA檢測方法及指標,間接免疫熒光法,ELISA方法/歐蒙印跡法,ANCA檢測和報告的國際公識(Savige,vanderWoude,Wiiketal.,1999),間接免疫熒光法是檢測ANCA的經(jīng)典方法,特點：敏感性高，半定量，是區(qū)分cANCA和pANCA的基礎局限性：間接免疫熒光法測定的是總ANCA，不能區(qū)分靶抗原，需要確認實驗作為補充,間接免疫熒光法檢測ANCA,核周型ANCA（pANCA）胞漿型ANCA（cANCA）,間接免疫熒光法檢測ANCA,細胞核周圍呈現(xiàn)平滑的帶狀熒光，細胞核陰性,細胞漿呈現(xiàn)不均勻的顆粒樣熒光，有時形成小團塊或粗大顆粒，核分葉處有熒光增強,兩種ANCA熒光染色成因,甲醛的強固定作用細胞漿中ANCA抗原如MPO不能從嗜天青顆粒中釋放，表現(xiàn)為胞漿內(nèi)均一的熒光染色即c-ANCA,無水乙醇固定時，MPO等抗原物質(zhì)可以從嗜天青顆粒中釋放出來，由于電荷作用吸附在細胞核周圍形成p-ANCA,ANCA篩查:免疫熒光,cANCA,ANCA判讀,建議讀片順序：粒細胞(乙醇固定)粒細胞(甲醛固定)HEP-2猴肝判讀,cANCA,pANCA,HEp-2cells,cANCA,粒細胞(乙醇固定),粒細胞(甲醛固定),猴肝,1,3,4,2,cANCA:靶抗原,蛋白酶3(PR3)殺菌性/通透性增強蛋白(BPI;CAP57)其它未知抗原,cANCA:相關(guān)疾病,韋格納肉芽腫（WG）-典型的WG：可逐漸發(fā)展成為腎小球腎炎90%-局限性的WG：可不累及腎小球70%顯微鏡下多動脈炎（MPA）upto30%變應性肉芽腫性血管炎（Churg-Strauss綜合征）10-20%結(jié)節(jié)性多動脈炎(PAN)5-10%,注意區(qū)分ANA對熒光模型的干擾,抗溶酶體抗體,粒細胞(乙醇固定),猴肝,粒細胞(甲醛固定),HEp-2cells,1,3,4,2,pANCA,pANCA（甲醛抗性）,粒細胞(乙醇固定),猴肝,粒細胞(甲醛固定),HEp-2cells,HEp-2cells,1,3,4,2,pANCA（甲醛敏感）,粒細胞(乙醇固定),猴肝,粒細胞(甲醛固定),HEp-2cells,1,3,4,2,pANCA:靶抗原,髓過氧化物酶(MPO;甲醛固定;甲醛抗性)乳鐵蛋白彈性蛋白酶組織蛋白酶G（甲醛敏感）殺菌性/通透性增強蛋白(BPI;CAP57)-烯醇化酶-葡萄糖醛酸酶溶菌酶Azurocidine(CAP37).,請參考上文2-4頁相關(guān)疾病與其靶抗原,pANCA:相關(guān)疾病,原發(fā)性血管炎（MPO）顯微鏡下多動脈炎42-70%變應性肉芽腫性血管炎18-60%,結(jié)締組織病SLE9-25%類風濕性關(guān)節(jié)炎3-20%,慢性炎癥性腸病潰瘍性結(jié)腸炎76%克隆恩氏病7%,自身免疫性肝病原發(fā)性硬化性膽管炎87%AIHtype1/PBC?,注意區(qū)分ANA對熒光模型的干擾,ANA+pANCA與ANA,猴肝,猴肝,ANA+pANCA,ANA,均質(zhì)型ANA的干擾,粒細胞(乙醇固定),猴肝,粒細胞(甲醛固定),HEp-2cells,1,3,4,2,核膜型ANA的干擾,猴肝,粒細胞(甲醛固定),HEp-2cells,粒細胞(乙醇固定),1,3,4,2,ANA+pANCA（甲醛抗性）,粒細胞(乙醇固定),猴肝,粒細胞(甲醛固定),HEp-2cells,1,3,4,2,ANA+pANCA（甲醛敏感）,粒細胞(乙醇固定),猴肝,HEp-2cells,粒細胞(甲醛固定),1,3,4,2,1,3,4,2,ANA干擾ANCA陰性,EUROIMMUN,猴肝,HEp-2細胞,粒細胞(乙醇固定),粒細胞(甲醛固定),1,3,4,2,陰性,EUROIMMUN,猴肝,HEp-2細胞,粒細胞(乙醇固定),粒細胞(甲醛固定),1,3,4,2,甲醛抗性pANCA,EUROIMMUN,猴肝,HEp-2細胞,粒細胞(乙醇固定),粒細胞(甲醛固定),1,3,4,2,甲醛抗性pANCA,猴肝,HEp-2細胞,粒細胞(甲醛固定),粒細胞(乙醇固定),1,3,4,2,ANCA陰性,ANCA常見問題答疑,關(guān)于ANCA：理論知識：,一、實驗結(jié)果與理論知識不符,IFT為C-ANCA，靶抗原為MPO,結(jié)果的解釋（1）,作者證明了抗MPO抗體成為C-ANCA的原因：抗MPO抗體為一組異質(zhì)性抗體，其中某個亞群的靶抗原（即MPO蛋白）被與乙醇反應后不會向胞膜移動。,IFT為C-ANCA，靶抗原為MPO樣本稀釋后實驗結(jié)果：IFT為強C-ANCA+弱pANCA靶抗原結(jié)果為：弱MPO+強BPI,結(jié)果的解釋（2）,提醒：強C-ANCA有時會掩蓋弱pANCA;ANCA的靶抗原檢測多數(shù)醫(yī)院還是很有局限,ANCA譜ELISA-可同時檢測6種靶抗原,蛋白酶3,乳鐵蛋白,髓過氧化物酶,彈性蛋白酶,組織蛋白酶G,BPI(CAP57),pANCA,二、檢測方法學選擇上的問題,僅RP3和MPO,僅定性，無定量,單基質(zhì)/兩基質(zhì)片，未排除ANA干擾,僅IIF,臨床應用范圍受限,降低疾病特異性,假陽性,給臨床信息少,國內(nèi)ANCA臨床常規(guī)檢測存在的問題,兩種方法聯(lián)合使用，可提高ANCA臨床應用價值原發(fā)性系統(tǒng)性小血管炎患者約5%IIFT陰性而ELISA陽性,ANCA檢測方法的合理選擇,據(jù)國內(nèi)外報道，采用IIF在SLE中檢測ANCA，陽性率差異很大，16%-69%，主要為pANCA僅采用乙醇片判斷，ANA干擾大據(jù)歐蒙檢測數(shù)據(jù)，SLE中單獨采用乙醇固定抗原片檢測ANCA，由于ANA干擾可產(chǎn)生31.2%的假陽性結(jié)果，主要為均質(zhì)型的ANA（占77.8%）推薦：IIF法檢測ANCA提倡應用組合抗原片（甲醛固定片、乙醇固定片、Hep-2細胞片等），綜和判斷結(jié)果，避免ANA干擾，提高ANCA臨床應用價值,ANCAIIF法檢測的影響因素-ANA,需求：抗PR3