高中生物 第一部分《實(shí)驗(yàn)一 大腸桿菌的培養(yǎng)和分離》課件7 浙科版選修1

實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的培養(yǎng)和分離,指結(jié)構(gòu)簡單,形體微小的單細(xì)胞、多細(xì)胞或無細(xì)胞結(jié)構(gòu)的低等生物。,一、微生物,微生物的類群,（1）結(jié)構(gòu)：（2）繁殖方式：（3）變異類型：（4）應(yīng)用：,1、細(xì)菌：,擬核區(qū),基因突變、基因重組,基因工程、遺傳實(shí)驗(yàn)材料,（1）概念：（2）作用：,2、菌落：,鑒定菌種,3、培養(yǎng)基：,（1）類型：按物理性質(zhì)分,液體培養(yǎng)基,固體培養(yǎng)基,凝固劑瓊脂,擴(kuò)大培養(yǎng)，工業(yè)生產(chǎn),分離純化，鑒定菌種，計(jì)數(shù)，保藏,LB培養(yǎng)基營養(yǎng)培養(yǎng)基,天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基,3、培養(yǎng)基：,（2）成分及其作用：,二、無菌操作,1、概念：,無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。,2、無菌操作包括：（1）對實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒；（2）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌；（3）為避免周圍微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近旁進(jìn)行；（4）避免已滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸。,（1）消毒：利用化學(xué)或物理方法，殺死大部份致病微生物的過程；不能殺死芽孢和孢子。,3、消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別,（2）滅菌：,以化學(xué)或物理方法消滅所有微生物，包括所有細(xì)菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達(dá)到完全無菌的過程。,3.常用的消毒與滅菌的方法：,（1）消毒法：A、煮沸消毒法:100煮沸5-6minB、巴氏消毒法：70-75下煮30min或80下煮15min（牛奶）C、化學(xué)藥劑消毒法:用70%酒精進(jìn)行皮膚消毒;氯氣消毒水源D、紫外線消毒（空氣）,（2）常用滅菌的方法：,高壓蒸汽滅菌：培養(yǎng)基、無菌水、各種耐高溫的玻璃金屬器具,高壓蒸汽滅菌鍋1kg/cm2、121下維持15min,酒精燈灼燒滅菌：接種環(huán)等金屬器具,1.無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？,2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實(shí)驗(yàn)操作者的雙手,答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。,答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。,思考,三、分離細(xì)菌方法,1、劃線分離法1）灼燒接種環(huán)；2）接種環(huán)冷卻后，蘸取帶菌培養(yǎng)物3）在近火焰處，讓帶菌接種環(huán)在固體培養(yǎng)基上劃線。,2、涂布分離法,1)稀釋菌液（10-510-7倍）用無菌吸管吸取1ml細(xì)菌培養(yǎng)液加入另一個(gè)盛有9ml無菌水的試管中，混合均勻，以此制成10-1倍的稀釋液。2)涂布用無菌吸管取0.1ml稀釋度不同的菌液，加在培養(yǎng)皿的固體培養(yǎng)基上。再將玻璃刮刀放在酒精燈火焰上灼燒，待刮刀冷卻后，在酒精燈旁打開培養(yǎng)皿，將菌液涂布到整個(gè)平面上。3)培養(yǎng)：將培養(yǎng)皿倒置，在37恒溫箱中培養(yǎng)2448h。,劃線分離：方法簡單，但單菌落較難分開。涂布分離：單菌落更易分開，但操作復(fù)雜。,四、大腸桿菌的培養(yǎng)和分離1、大腸桿菌（1）特性：革蘭氏陰性、兼性厭氧的腸道桿菌（2）用途：基因工程技術(shù)中被廣泛采用的工具2、培養(yǎng)：LB液體培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)LB液體培養(yǎng)基分離,3、分離,培養(yǎng)基滅菌,將LB液體和固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿高壓蒸汽滅菌,將滅菌后冷卻到60的LB固體培養(yǎng)基倒入滅菌過的培養(yǎng)皿中，制作平面培養(yǎng)基.,將大腸桿菌從斜面接種到LB液體培養(yǎng)基中，然后在37搖床中震蕩培養(yǎng)12h。,用接種環(huán)取震蕩培養(yǎng)后的菌液，并在固體培養(yǎng)基上劃線，然后將劃線后的培養(yǎng)皿倒置與37的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1224h，觀察劃線末端的菌落生長情況.,用接種環(huán)取單菌落，用劃線法接種于斜面上，在37的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，再放入4的冰箱中保存。,1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到60左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？,思考,可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可進(jìn)行倒平板了。,2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？,通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。,3.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？,空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。,問題討論,1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？,操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。,2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？,以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。,3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？,劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使