不同物種的DNA提取方法.docx

不同物種的DNA提取方法摘要 DNA作為遺傳微粒，為生物體的遺傳信息復(fù)制和傳遞做出了巨大的貢獻(xiàn)，而1953年J.Watson和F.Crick提出的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型不僅解釋了有關(guān)DNA的性質(zhì)，而且也清楚地解釋了DNA的各種生物功能，進(jìn)而使DNA的研究進(jìn)入到了分子水平。然而DNA是如何具體在生物體內(nèi)發(fā)揮其作用的，到現(xiàn)在還是一個(gè)熱門課題，為了研究其作用，就需要從各種物種中提取DNA，由于不同物種結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性不同，導(dǎo)致提取DNA的方法也是各不相同，為此，我整理了一些物種的DNA提取方法。關(guān)鍵詞：物種、DNA提取1、 月季DNA的提取方法：之所以提取高質(zhì)量的月季DNA有難度，是因?yàn)槠潴w內(nèi)富含多糖及多酚類的物質(zhì)，在一般的DNA提取方法中，很難被分離，這就嚴(yán)重干擾了提取月季DNA的純度以及完整性。為了解決這個(gè)問題，北京市園林科學(xué)研究所采取五種提取方法，在其最后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：Draper法提取月季DNA的純度最高，完整性最好。2、 大麥小孢子DNA的提取方法：要想分離提取小孢子的DNA，就需要降解小孢子壁，而小孢子壁由外壁和內(nèi)壁組成，內(nèi)壁主要由纖維素和果膠組成，這類物質(zhì)能夠被相應(yīng)的酶所水解，而外壁的主要成分是類胡蘿卜素和類胡蘿卜酯的氧化多聚化的衍生物，化學(xué)物質(zhì)非常穩(wěn)定，到目前為止，還沒有相應(yīng)的酶可以水解。因此外壁便成為提取高質(zhì)量的大麥小孢子DNA的一個(gè)“攔路虎”。對(duì)此，萊陽(yáng)農(nóng)學(xué)院展開了研究，他們通過“收集大麥的花藥”、“分離小孢子”、“分離小孢子”。最后“DNA的提取”等一系列的步驟，在最后的統(tǒng)計(jì)結(jié)果中，發(fā)現(xiàn)CTAB法和微量快速提取法取得不錯(cuò)的效果，而且DNA的得率和質(zhì)量幾乎一樣。這也證明了上述兩種方法是有效而可行的，當(dāng)然在這個(gè)研究過程，首次采用超聲波法進(jìn)行破壁，收到出乎意料的效果，也為CTAB法和微量快速提取法提供了必要的條件。所謂的CTAB，其中文名是十六烷基三甲基溴化銨，是一種陽(yáng)離子去污劑,具有從低離子強(qiáng)度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特性。在高離子強(qiáng)度的溶液中(0.7mol/L NaCl),CTAB與蛋白質(zhì)和多聚糖形成復(fù)合物，只是不能沉淀核酸.通過有機(jī)溶劑抽提，去除蛋白、多糖、酚類等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來(lái)。3、 海綿動(dòng)物DNA的提取方法：海綿動(dòng)物作為最古老的原生動(dòng)物，科學(xué)家對(duì)它的研究還不夠透徹，而對(duì)于分子水平上的研究更是少之又少。因此提取高質(zhì)量的海綿動(dòng)物DNA是更進(jìn)一步研究的重要環(huán)節(jié)。然而，由于海綿動(dòng)物含有許多共生細(xì)菌、藻類、蝦類等，這使得在提取其DNA的時(shí)候很容易混入其他生物的DNA，給研究帶來(lái)很大的影響。廈門大學(xué)為了解決這個(gè)困擾，采用了SDS酚-氯仿法、SDS高鹽法、CTAB法3種方法作為比較，并對(duì)最后的結(jié)果進(jìn)行了分析，得出了CTAB法是提取高質(zhì)量海綿動(dòng)物DNA的有效方法，并且提出了用乙醇固定海產(chǎn)動(dòng)物能夠幫助其DNA的提取更加快速和有效。4、 北方土壤真菌DNA的提取方法：真菌作為分解者，在生態(tài)系統(tǒng)中扮演著無(wú)可替代的角色，同時(shí)是維持生態(tài)系統(tǒng)平衡的重要一員，要探究土壤真菌是如何影響生態(tài)系統(tǒng)以及相互之間的關(guān)系，最直接的方法就是提取其全部DNA，利用相關(guān)技術(shù)進(jìn)行分析。但是，由于真菌的細(xì)胞壁是由大量的幾丁質(zhì)和多糖物質(zhì)組成的，嚴(yán)重干擾DNA高質(zhì)量的提取，為了順利解決這個(gè)問題，中國(guó)科學(xué)院沈陽(yáng)應(yīng)用生態(tài)研究所的吳敏娜博士等人通過傳統(tǒng)的土壤真菌DNA的提取方法進(jìn)行了改進(jìn)，并在具體的實(shí)驗(yàn)中得到了良好的效果。其改進(jìn)方法的大致操作為-6565凍融3次，纖維素酶、蝸牛酶和溶菌酶(6、3和1mgml-1)作用180min，2%SDS于65裂解30min。5、 梨DNA的提取方法：由于梨本身含有大量的多糖和酚類，在提取過程中會(huì)干擾DNA的絮狀沉淀，導(dǎo)致DNA的純度受到影響。烏云塔娜等人圍繞如何提高梨DNA高純度提取的問題展開研究，通過7個(gè)品種的梨為實(shí)驗(yàn)材料，采用了SDS 法、CTAB法、SDS-CTAB法、改良的 CTAB法、高鹽低 pH 值法、分步離心法6種方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，記錄下各種方法提取到的DNA純度和質(zhì)量進(jìn)行比較，表明分步離心法是提取梨DNA的最佳方法。6、 亞麻DNA的提取方法：亞麻作為一種純天然的纖維，具有吸汗、透氣性良好和對(duì)人體無(wú)害等顯著特點(diǎn)，在服裝、紡織行業(yè)越來(lái)越受到重視，有良好的發(fā)展前景，許多農(nóng)民也開始大量種植，然而由于亞麻的種植要求比較高，抗病性差，經(jīng)常導(dǎo)致歉收。近年來(lái)，科學(xué)院研究發(fā)展的“花粉管通道技術(shù)育種”理論，可以將一些外源基因?qū)胄←湣⒋蠖挂恍┳魑镏?，以增?qiáng)它們的抗病性、提早成熟等。對(duì)此科學(xué)家也為了解決亞麻的問題對(duì)如何導(dǎo)入外源基因展開研究。但亞麻種子含有大量的果膠，果膠和DNA一樣，也是在堿性條件下能夠溶于一般的有機(jī)溶劑如乙醇，采用一般的去除方法是行不通的。王玉富等人就此展開實(shí)驗(yàn)，探討哪種方法最適合提取高質(zhì)量的亞麻DNA，他們采用了氯仿異戊醉核糖核酸酶法、CTAB法、高鹽低pH法3種方法來(lái)進(jìn)行試驗(yàn)，經(jīng)過嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)過程，并在最后的統(tǒng)計(jì)結(jié)果中表明高鹽低pH法是最適合提取該物種的DNA方法，該方法加大了提取液的比例,使提取過程中液體的粘度下降,利于DNA與雜質(zhì)的分離;用低pH的醋酸鉀沉淀蛋白質(zhì),比用氯仿一異戊醇分層反復(fù)抽提去除蛋白質(zhì)方便、省時(shí),提取液中加入了PVP,有利于色素等雜質(zhì)的去除?？偨Y(jié)與討論通過上述的幾種物種DNA的提取方法表明，不同物種由于其本身細(xì)胞結(jié)構(gòu)、成分不同以及可能會(huì)受到其他生物的影響，導(dǎo)致采用的方法也是各不相同，因此對(duì)于一種物種來(lái)說，如何高質(zhì)量的提取其DNA，不僅需要分析該物種的細(xì)胞成分，如何去除除DNA外的其他雜質(zhì)，而且還需要采用多種不同的方法去嘗試，最后統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)證實(shí)哪種方法是行之有效的。參考文獻(xiàn)【1】 王玉富等. 亞麻總DNA快速提取方法的研究【J】.中國(guó)麻作，1997,19(1):19一21【2】 吳敏娜等. 提取北方土壤真菌DNA的一種方法【J】.生態(tài)學(xué)，2007-04-30【3】 王建紅等. 月季葉片DNA提取方法的研究【J】.北京園林，2003-09-25【4】 龔琳等. 海綿動(dòng)