粗茶中茶多糖的提取和測定的分析論文.doc

粗茶中茶多糖的提取和測定的分析論文 茶多糖是一類從茶葉提取出來的與蛋白質(zhì)結(jié)合在一起的酸性多糖或一種酸性糖蛋白，具有降血脂、降血糖、增強(qiáng)免疫力、抗輻射、降血壓、抗血凝、抗血等功效，是一種極具應(yīng)用和開發(fā)前景的天然產(chǎn)物，可廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、保健等領(lǐng)域。 在茶葉的種植和加工生產(chǎn)過程中，大量粗老枝葉和茶葉灰末等副產(chǎn)品常被丟棄，另外由于人們在茶葉消費(fèi)時追求茶葉的檔次，使得中低檔茶葉滯銷而擠壓，造成了自然資源的巨大浪費(fèi)。如果能從其中提取茶多糖作為保健食品的功能因子，則可變廢為寶，為粗茶和中低檔茶的綜合利用開辟一條新的途徑。 本試驗通過對粗老茶葉中的茶多糖的提取與測定，為粗茶的深度開發(fā)和利用提供一定的依據(jù)。 1實(shí)驗部分 1.1儀器和試劑 儀器:722型可見分光光度計(上海光學(xué)儀器)，KQ-500VDB雙頻數(shù)控超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);超純水機(jī)(南京易普易達(dá)科學(xué)發(fā)展有限公司);電子天平(賽多利斯利科儀器(北京)有限公司)等。 試劑:無水乙醇，蒽酮，濃硫酸，葡萄糖，丙酮，無水乙醚等，所用的化學(xué)試劑均為分析純。 1.2茶多糖的提取 1.2.1工藝流程 粗老茶葉-烘干-研磨-溫水浸提-過濾-濃縮-乙醇沉淀-靜置-離心-無水乙醇、丙酮、無水乙醚交替洗滌-烘干-茶多糖粗成品。 1.2.2具體步驟 稱取10 g粗茶，60 度干燥2 h,磨碎過40-50目篩，溫水浸提(80 度 ，80 min， 3次)，過濾，減壓濃縮，沉淀劑，95%乙醇沉淀，離心(4000 r/min，10 min)得沉淀物，用無水乙醇、丙酮、無水乙醚交替攪拌洗滌2次干燥(60 度, 4 h),得粗茶多糖，稱量。 1.3蒽酮-硫酸試液的配制 稱取0.30 g蒽酮，加100 mL濃硫酸，置于棕色試劑瓶中，搖勻后置于冰箱中。 1.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 稱取無水葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品適量，加蒸餾水配成1.008 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密移取標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0. 2.0. 4.0. 6.0. 8.0. 10.0 mL分別置于100 mL容量瓶中，各加水至刻度，搖勻。分別精密移 取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液各2.0 ml置具塞試管中，以2 mL蒸餾水作空自，每管再加8 mL蒽酮-硫酸試液，立即搖勻，冰水浴冷卻。沸水浴中加熱7 min，流動水冷卻至室溫，10 min后在560 nm處測定吸光度，以吸光度(A)對葡萄糖濃度(C)作回歸處理，得回歸方程:C=105.0383 A-7.2499， r=0.9995 。 1.5換算因子的測定 精確稱取干燥至恒重的茶多糖0.0102 g,溶解后定量轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，然后加純化水定容至刻度，80度水浴加熱，再超聲1 min增溶，搖勻，制得茶多糖貯備液。用蒽酮-硫酸法測定其吸光度，由回歸方程求出貯備液中葡萄糖的濃度，測得其葡萄糖含量，按下式計算換算因子。因茶多糖干燥后在水中溶解性降低，故按1.2.2項下的方法制得多糖提取液取等量兩份，經(jīng)乙醇沉淀洗滌后，一份直接加純化水溶解(復(fù)水性好)，定容，測定吸光度和茶多糖含量;另一份干燥至恒重，稱得茶多糖的干重，由二者計算平均換算因子。 1.6茶多糖的測定 精確稱取粗茶葉1g，按照1.2.2項下方法制得茶多糖，然后將制得的茶多糖溶解后定量轉(zhuǎn)移于100 mL容量瓶中，加純化水溶解并稀釋至刻度，80 度水浴加熱，超聲1 min增溶，搖勻，制得茶多糖樣品液，蒽酮-硫酸分光光度法測定其吸光度，由回歸方程計算試液中葡萄糖濃度(C)，按下式計算樣品中茶多糖含量。 2 結(jié)果與討論 2.1茶多糖提取最佳條件選擇 選擇浸提時間、浸提溫度、料液比三個因素、三個水平，進(jìn)行茶多糖提取最佳條件的選擇。 2.2重復(fù)性 精確稱取粗老茶葉1g，按照1.6項下方法處理后重復(fù)測定6次分別計算茶葉多糖含量，RSD=0.54，表明精密度良好。 2.3穩(wěn)定性 精確吸取1.6項下制取茶多糖樣品液1 mL于具塞試管中，每間隔1h測定溶液的吸光度，RSD=0.23 %(n=5)，在5h內(nèi)顯色穩(wěn)定。 2.4加樣回收率 精確稱取3份粗老茶葉各1g，加入精制茶葉多糖約20 mg，按1.6項下方法測定茶葉多糖含量，計算回收率，回收率范圍為9