藥物的體外抗菌試驗(yàn)PPT課件.ppt

微生物與藥學(xué)的關(guān)系 1 某些微生物可以生產(chǎn)藥物 微生物制藥 2 微生物可能會(huì)污染藥品 藥物的微生物檢查 3 某藥物有能抑菌或是殺菌 藥物的抗菌試驗(yàn) 1 藥物的體外抗菌試驗(yàn) 2 藥物的體外抗菌試驗(yàn) 用途 抗菌藥物的篩選 藥物的抗菌譜測(cè)定及臨床藥物敏感性試驗(yàn)等方面 3 抑菌 即抑制微生物的生長(zhǎng)繁殖 但不能殺死微生物 在藥物除去后微生物又能生長(zhǎng) 殺菌 即能殺死微生物 當(dāng)藥物除去后 微生物也不能再生長(zhǎng)繁殖 兩者并非絕對(duì) 只是在一定條件下相對(duì)而言 4 常用的體外抑菌試驗(yàn) 瓊脂擴(kuò)散法濾紙片法挖溝法連續(xù)稀釋法 5 瓊脂擴(kuò)散法 原理 藥物可以在瓊脂培養(yǎng)基中自由擴(kuò)散 形成一定濃度的含藥區(qū)域 由于各種微生物對(duì)不同藥物或同一藥物不同濃度的敏感性不同 因而形成一定大小的抑菌圈或抑菌距離 根據(jù)其大小 可以了解藥物的抗菌作用大小或是微生物對(duì)試驗(yàn)藥物的敏感性 6 濾紙片法 制成含菌平板后 將濾紙片蘸取藥液置于平板上 培養(yǎng)后觀察結(jié)果 量取抑菌圈直徑以此判斷試驗(yàn)藥物抑菌作用的強(qiáng)弱 用于新藥的初篩及臨床的藥敏試驗(yàn) 7 8 挖溝法 1 在瓊脂平板上挖溝 溝兩邊垂直劃線接種各種試驗(yàn)菌 溝內(nèi)加入藥液 2 培養(yǎng)后 根據(jù)溝兩邊所生長(zhǎng)的試驗(yàn)菌離溝的距離來(lái)判斷藥物對(duì)試驗(yàn)菌的抗菌作用強(qiáng)弱 適用于在一個(gè)平板上試驗(yàn)一種藥物對(duì)幾種不同試驗(yàn)菌的抗菌作用 9 10 瓊脂擴(kuò)散法具有方法簡(jiǎn)便 技術(shù)要求不高 易掌握操作的特點(diǎn) 但精確度不高 一般能用于定性或初步判斷其作用的強(qiáng)弱 液體稀釋法是一種測(cè)定藥物的抗菌作用定量方法 較瓊脂擴(kuò)散法精確 因而運(yùn)用較普遍 11 連續(xù)稀釋法 可用于測(cè)定藥物的最低抑菌濃度 MIC 和最低殺菌濃度 MBC 可以用液體培養(yǎng)基 也可用固體培養(yǎng)基 凡能抑制試驗(yàn)菌生長(zhǎng)的最高藥物稀釋度為該藥的最低抑菌濃度 Minimalinhibitoryconcentration MIC 以培養(yǎng)后無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的最高藥物稀釋度為最小殺菌濃度 Minimalbactericidalconcentration MBC 12 液體連續(xù)稀釋法 1 在一系列的試管中用液體培養(yǎng)基將試驗(yàn)藥物作連續(xù)對(duì)倍稀釋 使藥物的濃度沿試管順序成倍遞減 2 再于各管中加入等量的實(shí)驗(yàn)菌 經(jīng)16 24h培養(yǎng)后 與陰性及陽(yáng)性對(duì)照管進(jìn)行對(duì)照觀察 3 將未長(zhǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)液取出 分別轉(zhuǎn)種瓊脂平皿 如培養(yǎng)后重新長(zhǎng)出試驗(yàn)菌 說(shuō)明該藥僅有抑菌作用 如無(wú)菌生長(zhǎng)則可以認(rèn)為該藥物有殺菌作用 13 14 聯(lián)合抗菌試驗(yàn) 在藥學(xué)中 常需要檢查兩種抗菌藥物在聯(lián)合應(yīng)用時(shí)的相互作用以及抗菌藥物與不同PH值或不同離子溶液的相互影響 加強(qiáng)藥物抗菌作用的為協(xié)同 synergism 減弱藥物作用的為拮抗 antagonism 互相無(wú)影響的為無(wú)關(guān) indifference 作用二者之和為累加 addition 15 聯(lián)合抗菌試驗(yàn)的常用方法 一 紙條試驗(yàn) paperstriptest 即在已接種實(shí)驗(yàn)菌的平板表面垂直放置兩條浸有一種藥液的濾紙條 培養(yǎng)后根據(jù)抑菌區(qū)的加強(qiáng) 減弱或無(wú)影響來(lái)判斷它們?cè)诼?lián)合應(yīng)用時(shí)的效應(yīng) 圖20 2是紙條實(shí)驗(yàn)的示意圖 16 圖20 2是紙條實(shí)驗(yàn)的示意圖 圖中A列的兩紙條中只有一條含有抗菌藥物 另一條不含抗菌藥物 B列的兩紙條均含有抗菌藥物 17 二 棋盤(pán)格法 checkboardtest 是由于在試驗(yàn)時(shí) 含兩種不同濃度藥物的試管排列呈棋盤(pán)狀而得名 用以評(píng)價(jià)兩種藥物同時(shí)用不同濃度進(jìn)行聯(lián)合試驗(yàn)時(shí)的抗菌活性 實(shí)驗(yàn)時(shí)排列6排試管 每排6管 共36管使成方塊 A及B藥各以液體培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋 A藥各稀釋度縱行定量加入各管 B藥各稀釋定量按橫排加入 兩藥同時(shí)作單獨(dú)抗菌實(shí)驗(yàn)對(duì)照 然后加入定量菌液 經(jīng)培養(yǎng)后觀察結(jié)果 18 抗菌試驗(yàn)的影響因素 1 試驗(yàn)菌 用專門(mén)的供應(yīng)機(jī)構(gòu)提供的標(biāo)準(zhǔn)菌株 北京衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所菌種保藏中心 試驗(yàn)菌應(yīng)合理保藏 用前加以純化及生物學(xué)特征鑒定 19 所用的試驗(yàn)菌株應(yīng)處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期 因此期的微生物對(duì)外界因素變化最敏感 試驗(yàn)結(jié)果的靈敏度在一定程度上與試驗(yàn)菌的接種量成反比關(guān)系 故應(yīng)選用適宜的接種量 20 抗菌試驗(yàn)的影響因素 2 培養(yǎng)基抗菌試驗(yàn)的培養(yǎng)基應(yīng)按試驗(yàn)菌的需求配制 如鏈球菌常用含血清的肉湯培養(yǎng)基 抗真菌藥物試驗(yàn)需用沙氏培養(yǎng)基 培養(yǎng)基的酸堿度 電解質(zhì) 還原性物質(zhì)等均可影響試驗(yàn)結(jié)果 實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)盡可能排除各種影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果因素的摻入 經(jīng)無(wú)菌檢查合格 21 抗菌試驗(yàn)的影響因素 3 抗菌藥物藥物的濃度 pH及含有的其他成分均可影響試驗(yàn)結(jié)果 特別是中草藥制劑往往含有色素 雜質(zhì)和鞣質(zhì)等 這些均可造成錯(cuò)誤結(jié)果 應(yīng)加注意 22 抗菌試驗(yàn)的影響因素 4 對(duì)照試驗(yàn) 為精確判