【畢業(yè)學位論文】（Word原稿）TGF-β3對脂肪間充質(zhì)干細胞向纖維軟骨細胞誘導分化的影響脂肪干細胞的研究進展

蘭州大學碩士研究生學位論文 脂肪間充質(zhì)干細胞 向纖維軟骨細胞誘導分化的影響 1 文獻回顧 脂肪干細胞的研究進展 1. 引言 脂肪干細胞 (存在于脂肪組織中的間充質(zhì)干細胞 (具有多向分化的潛能。該細胞 由 于 2001年首次從人抽脂術(shù)中抽取的脂肪組織懸液中分離獲得 1。目前，發(fā)現(xiàn)脂肪干細胞廣泛分布于不同物種，如人、鼠、豬、犬及兔等不同部位的脂肪組織中。由于提取方法簡單、創(chuàng)傷小、獲得的細胞數(shù)量大，脂肪干細胞已成為組織工 程中種子細胞研究的熱點 2。 2. 脂肪干細胞的分離 分離脂肪干細胞的脂肪組織主要來源于抽脂術(shù)后廢棄和切取的脂肪組織。從脂肪組織中分離細胞的方法最早由 0世紀 60年代報道，隨后又不斷的被改進 3。顯然，良好的分離技術(shù)可獲得更多數(shù)量的脂肪干細胞，保證脂肪干細胞的活性功能和維持其多向分化潛能。脂肪組織供體的差異可能也影響分離的脂肪干細胞活性。一般認為，脂肪干細胞的附著和增殖能力隨供體年齡增加而降低。但 肪干細胞的衰老與供體的體質(zhì)指數(shù)呈負相關(guān)，而與年齡無關(guān)。由于不同部位脂肪組織的生 物代謝特點不同，來源于不同部位的脂肪干細胞數(shù)量和分化潛能可能不同 4。 腹部、大腿和乳房來源的脂肪組織相比，人前臂脂肪組織中含有更多的脂肪干細胞 5。有研究還發(fā)現(xiàn)，不同脂肪組織中的脂肪干細胞含量不同。脂肪干細胞在鼠白色脂肪組織中的含量明顯高于棕色脂肪組織 6。 3. 脂肪干細胞的培養(yǎng) 脂肪干細胞在培養(yǎng)過程中，同樣需要保持細胞增殖活性和多向分化潛能。很明顯，培養(yǎng)條件是影響脂肪干細胞的重要因素。 報道，低糖可能更有利于維持脂肪干細胞的多分化潛能，而培養(yǎng)液中的抗生素對脂肪干細 胞的細胞表型和分化能力無影響。由于脂肪干細胞在體內(nèi)常處于低氧環(huán)境中， 研蘭州大學碩士研究生學位論文 脂肪間充質(zhì)干細胞 向纖維軟骨細胞誘導分化的影響 2 究了氧濃度對脂肪干 細胞的影響，發(fā)現(xiàn)氧濃度和血清濃度過高、過低均不利于維持脂肪干細胞的生物特性 7。最近，有學者發(fā)現(xiàn)，經(jīng)硒處理后的脂肪干細胞增殖活性和多向分化能力均明顯增強，其機制可能是通過抑制 調(diào)節(jié)2 和 號通路發(fā)揮作用 8。脂肪干細胞的需求量大，常需凍存。研究表明，長時間凍存對脂肪干細胞的表型、增殖和分化沒有影響 。有學者比較不同凍存液對脂肪干細胞的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn) 存 液保存的脂肪干細胞活性最高，但各凍存液對脂肪干細胞的分化能力沒有影響 9。 4. 脂肪干細胞的鑒定 人的脂肪干細胞和骨髓來源的間充質(zhì)干細胞 (面抗原 90 以上都是一致的。但有學者發(fā)現(xiàn)脂肪干細胞存在存 骨髓間充質(zhì)干細胞情況正相反 10。有研究表明，不同來源和分離培養(yǎng)的脂肪干細胞表面抗原基本是一致的，其中， 為多向分化標志，表明脂肪干細胞具有多向分化潛能。已 經(jīng)證實 一種干細胞因子受體，在全能或多能干細胞中表達，包括胚胎干細胞 (而且脂肪干細胞還表達胚胎干細胞的標記物，如 4， 可能是脂肪干細胞跨胚層分化的分子基礎 11。最近有研究發(fā)現(xiàn)，脂肪干細胞的標記物會隨著培養(yǎng)時間的延長而有所改變。早期原代培養(yǎng)的脂肪干細胞中存在造血干細胞以及內(nèi)皮祖細胞的標志分子，培養(yǎng) 3-5 d 后顯著下降，這可能與原代培養(yǎng)的脂肪干細胞含有多種細胞成分有關(guān)。但也提示脂肪干細胞可能存在不同的 “干細胞 亞群 ”12。眾所周知，干細胞是一類具有自我復制能力的多潛能細胞，在一定條件下，它可以分化成多種功能細胞。由于目前尚未發(fā)現(xiàn)脂肪干細胞的特異細胞標記物，因此，通過誘導細胞分化為多種成熟功能細胞的方法可鑒定獲得脂肪干細胞 13。 5. 脂肪干細胞的多向分化潛能 軟骨細胞分化 多次傳代后的脂肪干細胞仍能保持向軟骨分化的能力。 研究表明，脂肪干細胞向軟骨分化后，長時間培養(yǎng)，其軟骨細胞表型穩(wěn)定。有研究發(fā)現(xiàn)，不同部位來源的脂肪干細胞誘導成軟骨細胞能力不同，關(guān)節(jié)周圍組織來源的誘導成軟蘭州大學碩士研究生學位論文 脂肪間充質(zhì)干細胞 向纖維軟骨細胞誘導分化的影響 3 骨的能力更強 14。一 般認為，低濃度胎牛血清有利于脂肪干細胞向軟骨細胞分化。但最近國內(nèi)有學者報道，含 10 軟骨誘導液更利于脂肪干細胞向軟骨細胞方向增殖和分化。研究還發(fā)現(xiàn)，高密度種植更利于脂肪干細胞向軟骨細胞分化，這可能因為密集種植脂肪干細胞，減少了細胞間的間隔，使細胞間相互作用增加而促進脂肪干細胞向軟骨細胞分化 15。目前，常用的生長因子有轉(zhuǎn)化生長因子 、胰島素樣生長因子 I、骨形態(tài)發(fā)生蛋白、表皮生長因子等。對于哪種生長因子最好，目前還不了解。有學者發(fā)現(xiàn)，單純應用生長因子可使脂肪干細胞表達膠原 X、軟骨細胞發(fā)生退變，而且 ，單一生長因子在體外可能不能誘導脂肪干細胞表達 型膠原。由于體內(nèi)環(huán)境復雜，生長因子眾多，因此聯(lián)合應用生長因子效果可能更好。大劑量的生長因子能提高誘導后的脂肪干細胞中 型膠原和蛋白多糖的含量，改善組織工程軟骨的生物品質(zhì) 16。 脂肪細胞分化 已證實誘導后的脂肪干細胞可表達脂蛋白、脂肪酶、過氧化物酶體增殖物激活受體 等多個脂肪細胞基因，而且細胞質(zhì)內(nèi)可見脂滴形成。多次傳代后，脂肪干細胞仍有向脂肪細胞分化的能力。目前，對脂肪干細胞分化為脂肪細胞的機制仍不清楚。有報道認為，抑制脂肪干細胞中的 號通路 可提高脂肪干細胞的成脂能力 17。值得注意的是，多個獨立研究發(fā)現(xiàn)，脂肪干細胞的成脂與成骨密切相關(guān)。 發(fā)現(xiàn)，大約有 65 個基因參與調(diào)控脂肪干細胞成脂與成骨的平衡。深入研究這些基因，可能有助于理解調(diào)節(jié)脂肪干細胞的成脂成骨分化的機制。與誘導脂肪干細胞分化成軟骨細胞一樣，不同的培養(yǎng)條件對脂肪干細胞的影響不同。有研究稱無糖的 高糖的 能促進脂肪干細胞成脂分化 18。 成骨細胞分化 脂肪干細胞具有向成骨細胞分化的能力，并且不受供體年齡的限制。供體性別可能對 脂肪干細胞的成骨分化有影響。雄性新西蘭大白兔的脂肪干細胞的成骨能力高于雌性大白兔。目前，多個研究小組對脂肪干細胞的成骨機制進行了研究，發(fā)現(xiàn) 號通路對調(diào)節(jié)脂肪干細胞向成骨細胞分化起重要作用 19。 認為，抑制 號通路可促進脂肪干細胞向成骨細胞分化，同時也降低了脂肪干細胞的增殖 ， 但也有相反報道。也有學者報道，降低 表達，可抑制脂肪干細胞的增殖，促進脂肪干細胞的成骨分化，同時不影響脂肪干細胞的成脂分化。可見，可能有多個信號途徑參與調(diào)節(jié)脂肪干細胞的成骨分化。研究還發(fā)現(xiàn)，蘭州大學碩士研究生學位論文 脂肪間充質(zhì)干細胞 向纖維軟骨細胞誘導分化的影響 4 適度的機械刺激能 促進脂肪干細胞向成骨細胞分化，這可能有助于組織工程構(gòu)建大塊骨組織 20。 其他細胞分化 現(xiàn)發(fā)現(xiàn)脂肪干細胞還可跨胚層分化成中胚層以外的細胞，如肝細胞、內(nèi)皮細胞、心肌細胞、胰腺細胞和神經(jīng)細胞等。目前，對脂肪干細胞的這種跨胚層分化機制仍不了解。盡管對脂肪干細胞在體內(nèi)能否分化成具有功能的中胚層以外的細胞還有爭議，但這已經(jīng)預示了脂肪干細胞具有廣泛的應用前景。作為組織工程的種子細胞：現(xiàn)認為應用于再生醫(yī)學或組織工程的理想干細胞必須符合以下條件：含量豐富；分離方法無傷害性；多分化潛能具有可調(diào)控性和可再生性；自體 或異體移植具有高效性和安全性；具有符合目前醫(yī)療實踐指南的操作標準。已知脂肪干細胞含量豐富，分離方法簡單，吸脂術(shù)安全，對患者傷害小，脂肪組織易再生，可反復獲取 21。應用于直接細胞治療：脂肪干細胞能分泌多種細胞因子，如白細胞介素 管內(nèi)皮生長因子、肝細胞生長因子、腫瘤壞死因子等。因此，脂肪干細胞還有可能通過旁分泌細胞因子促進組織修復。經(jīng)靜脈注射的脂肪干細胞可自主聚集于病灶部位參與修復損傷。脂肪干細胞的這種 “歸巢 ”作用，其具體機制不明。有報道稱通過增加膜型基質(zhì)金屬蛋白酶 1 表達和促進 原的激活可增 強脂肪干細胞的遷移。近期研究發(fā)現(xiàn)，脂肪干細胞能釋放新的線粒體至損害的細胞，從而挽救有氧代謝的過程。這說明脂肪干細胞可通過多種機制參與組織的修復 22?；蛑委煹妮d體：由于體外條件下外源基因容易導入脂肪干細胞，并且在體內(nèi)可穩(wěn)定表達，因此，脂肪干細胞還可作為基因治療的目的基因載體。最近， 利用脂肪干細胞作為藥物細胞載體，通過其 “歸巢 ”作用成功抑制了小鼠黑色素瘤的生長 23。 6. 存在問題與展望 雖然對脂肪干細胞的研究越來越深入，但仍然有許多問題尚未解決。由于體外不能充分誘導脂肪干細胞的分化，且分 化后的細胞功能與正常成熟細胞存在差異。如何高效、廉價、安全的誘導脂肪干細胞分化和應用是目前急需解決的難題?，F(xiàn)多數(shù)脂肪干細胞的研究為體外試驗，對于體內(nèi)微環(huán)境特別是病理狀態(tài)下的微環(huán)境與脂肪干細胞的相互作用，以及脂肪干細胞如何被調(diào)控定向分化，幾乎一無所知，而這恰是理解體內(nèi)脂肪干細胞作用機制的關(guān)鍵所在。脂肪干細胞是一種來源廣泛、含量豐富、分離簡單的成體間充質(zhì)干細胞。隨著作用機制的深入研究，脂蘭州大學碩士研究生學位論文 脂肪間充質(zhì)干細胞 向纖維軟骨細胞誘導分化的影響 5 肪干細胞有望成為臨床上良好的種子細胞。 蘭州大學碩士研究生學位論文 脂肪間充質(zhì)干細胞 向纖維軟骨細胞誘導分化的影響 6 參考文獻 1 A,et 001,7(2):2112 ,et of of SC)an in 007,359(2):313 of of (of on 966,241(1): 4 ,J,et of 004,6(1):75 ,G,on of 008,60(5):5386 ,et to in 006,312(6):727 7 T,E,E,et of in 008,122(3):7258 H,R,H,et of in 008,26(10):2724 9 , ,et of 008,17(135 10 A,A,et of on 003,89(2267 11 ,J,C,el of by . 008,375(4):547 12 W,S,C,et of 008,17(4):681 13 ,et of 007,327(3):449 14 , ,et of of in 006,54(3):843 15 胡生鎖 ,胡蘊玉 ,魏義勇 ,等 J中國矯形外科雜志 ,2007,15(11):860 16 ,et of of 州大學碩士研究生學位論文 脂肪間充質(zhì)干細胞 向纖維軟骨細胞誘導分化的影響 7 008,26(3):132 17 P,W,S,et nt of J008,41(6):859 18 ,fo of . 009,11(1):5219 R,E,M,et in 008,19(2):360 20 J,T,C,et in of 008,83(25851 21 M,J,007,100(9):1249 22 W,et in in a of 009,27(3):295 23 , ,et in 008,10(10):1071蘭州大學碩士研究生學位論文 脂肪間充質(zhì)干細胞 向纖維軟骨細胞誘導分化的影響 8 第一部分 脂肪間充質(zhì)干細胞向纖維軟骨細胞誘導分化的影響 由于 纖維軟骨缺乏自我修復能力，顳下頜關(guān)節(jié)盤軟骨損傷的修復一直是口腔科醫(yī)生面臨的巨大挑戰(zhàn) 1。近年來 纖維軟骨組織工程技術(shù)的發(fā)展為解決這一難題提供了新的方法。但由于 纖維軟骨細胞來源少，增殖有限，不能滿足臨床需要。脂肪 來源 的間充質(zhì)干細胞 (由于具有強大增殖和多向分化能力，且易于獲得，已成為纖維軟骨組織工程研究的重要細胞來源 2脂肪組織來源的脂肪干細胞，與其它成體 干細胞一樣具有自我更新和多向分化的能力，在適宜誘導條件下經(jīng)誘導可以分化為成骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞等 5,6。因此誘導 成纖維細胞樣細胞分化，合成與纖維軟骨相似的細胞外基質(zhì) (有可能是纖維軟骨組織工程中解決細胞來 源問題的重要途徑。轉(zhuǎn)化生長因子 (廣泛用于脂肪 干細胞的 纖維軟骨分化 7。國內(nèi)外許多研究表明使用轉(zhuǎn)化生長因子 導干細胞向軟骨細胞分化 8,9。但使用 轉(zhuǎn)化生長因子 導脂肪間充質(zhì)干細胞向纖維軟骨細胞分化 的研究 卻很少見。 族的生物化學結(jié)構(gòu)及功能：轉(zhuǎn)化生長因子 一族多肽類生長因子，胚胎形成期可誘導原始的間充質(zhì)干細胞 (化形成軟骨組織 2。所有 族成員都具有一些共同的結(jié)構(gòu)特征 3，是由多種細胞和組織產(chǎn)生的一類同源二聚體多肽分子，分子量約 25條多肽鏈含 110氨基酸殘基。所有 關(guān)因子顯示與 序列相似性，是 家族的一員，通過 體及其細胞內(nèi)信號系統(tǒng) 將信號傳遞到細胞核內(nèi)而起到多種不同的生理調(diào)節(jié)作用 4。 本研究采用聚集體培養(yǎng)通過使數(shù)量較多的 鼠 合在一起，選用轉(zhuǎn)化生長因子 用于 察 分化和生物合成情況 ，充分發(fā)揮 自分泌及旁分泌作用，有可能促進纖維軟骨細胞胞外基質(zhì)分泌以及表型的表達； 通過觀察細胞的形態(tài)變化，組織學和免疫熒光染色等 檢測生 括 I/膠原和蛋白多糖 )的情況，初步評價 為工蘭州大學碩士研究生學位論文 脂肪間充質(zhì)干細胞 向纖維軟骨細胞誘導分化的影響 9 程化纖維軟骨種子細胞的可行性。 1. 材料與方法 材料與儀器 鼠 購自 司 ； 胞培養(yǎng)液購自 司 ； 胎牛血清購自杭州四季青公司 ； 兔抗鼠 I 型膠原抗體， 膠原抗體購自 司 ； 記的羊抗兔抗體 購自 司； 阿利新藍染色購自 司 ； 熒光顯微鏡 號 1 鼠 培養(yǎng) 胞解凍后種植于細胞培養(yǎng)瓶中，加入 10%胎牛血清的 養(yǎng)液，置于 37 5% 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。 48 小時首次換液，以后每隔 2 天換液一次，逐漸除去非貼壁細胞，約 5后細胞達到融合，當細胞融合至 80加入 酶消化液，按 1:3 的比例傳代。 導 纖維軟骨細胞分化的細胞形貌觀察 選擇第三代細胞以 度接種于離心管中進行三維培養(yǎng)。隨機分為兩組：第一組加入含 0g/成纖維軟骨誘導液 (含 10%胎牛血清 (杭州四季青公司 )和高糖 養(yǎng)基 (誘導分 化培養(yǎng) 14 天；第二組加入不含 基礎培養(yǎng)液培養(yǎng)作為對照組。通過顯微鏡動態(tài)觀察細胞生長 狀態(tài)。 蘭州大學碩士研究生學位論文 脂肪間充質(zhì)干細胞 向纖維軟骨細胞誘導分化的影響 10 阿利新藍染色 細胞培養(yǎng) 14 天后，采用 4多聚甲醛 固定細胞后石蠟包埋組織制作顯微切片，阿利新藍染色液 (50浸染 30 分鐘。蒸餾水終止染色。 95%乙醇分化 10秒，顯微鏡下觀察染色 結(jié)果 。 免疫組織化學染色 消化細胞種植在離心管中進行培養(yǎng)。細胞數(shù)量為 2 天換培養(yǎng)液， 4多聚甲醛固定后石蠟包埋組織制作顯微切片，加入 300l 穿透液(穿透 30 分鐘。吸去穿透液，加入正常山羊血清封閉液 140l，封閉 50 分鐘后，吸去封閉血清，分別加入 100l ， 1： 200， 在保濕盒中 4 孵育過夜。 膠原兔抗鼠抗體 (I， 1:200， 在保濕盒中 37孵育 1 小時。吸出抗體溶液后加入 記的羊抗兔抗體 H+L)， 115 1:100 稀釋，分別加入 100l， 37光孵育 1 小時，然后取出 入 140l 液 (室溫避光孵育 30 分鐘。吸去染液，加入 滌；最后添加 用熒光倒置顯微鏡觀察各抗體表達情況。 2 結(jié)果 導分化前后的細胞形態(tài)變化 倒置熒光顯微鏡觀察結(jié)果顯示 胞在 導下呈現(xiàn) 明顯 不同的形貌特征。圖 1（ a）顯示 在未加入 長因子下，細胞呈聚集生長，細胞外基質(zhì)分泌較少；經(jīng) 長因子誘導之后，細胞有明顯的聚集生長現(xiàn)象，形態(tài)呈多角形、多邊形，細胞外基質(zhì)分泌增多（圖 1（ b）。 蘭州大學碩士研究生學位論文 脂肪間充質(zhì)干細胞 向纖維軟骨細胞誘導分化的影響 11 圖 1 倒置顯微鏡下觀察 用前后形態(tài)變化情況（ 200）。 （ a）未加入 b）加入 a) b) 00). 利新藍染色 阿利新藍染色結(jié)果顯示 未有 導下，未見明顯的藍色，空泡多見（圖 2a）。而經(jīng) 導后 胞染色呈藍色，并且可見明顯的異染性著色，空泡少見（圖 2b）。這表明 長因子誘導下能合成大量的 糖胺 聚糖。 圖 2 糖胺聚糖阿利新藍染色（ 400）。 （ a）無 照組；（ b） 。 00). (a) (b) 蘭州大學碩士研究生學位論文 脂肪間充質(zhì)干細胞 向纖維軟骨細胞誘導分化的影響 12 型膠原和 型膠原免疫組織化學染色 圖 3 顯示了合成膠原基質(zhì)的免疫組織化學染色。 I 型膠原免疫化學細胞染色結(jié)果顯示，在沒有 誘導下，沒有明顯的 I 型膠原合成，表達不明顯，胞漿呈淺黃色，而胞核染色為藍色（圖 3A）；在 誘導下 , I 型膠原免疫化學細胞染色顯示染色結(jié)果明顯，呈強陽性，胞漿呈明顯的棕褐色，胞核染色呈藍色，且在 I 型膠原表達越密集的區(qū)域染色越強（ 圖 3C）。 對于 膠原的染色結(jié)果顯示，在對照組中， 膠原免疫化學染色陰性，細胞及細胞外基質(zhì)均少見，偶見胞漿呈淺黃色（圖 3B）；而在誘導組的細胞染色顯示 , 膠原合成較多，細胞外基質(zhì)內(nèi)可見棕黃色顆粒，胞核藍染（圖 3D）。 圖 3 I 和 膠原免疫組織化學染色（ 400）。 I 型膠原對照組未見明顯表達（ A）； I 型膠原 呈陽性表達（ C）； 膠原對照組未見明顯表達（ B）；而 膠原 呈明顯的陽性表達（ D）。 (400). A); C)； I B); I D)； 蘭州大學碩士研究生學位論文 脂肪間充質(zhì)干細胞 向纖維軟骨細胞誘導分化的影響 13 3. 討論 關(guān)節(jié)軟骨損傷的修復仍是臨床面臨的挑戰(zhàn)之一。傳統(tǒng)的治療方法如軟骨移植及關(guān)節(jié)置換術(shù)并不 能完全恢復軟骨的結(jié)構(gòu)，組織工程學的興起為關(guān)節(jié)軟骨損傷治療提供了新的選擇 10。組織工程軟骨的構(gòu)建中，關(guān)鍵的任務是尋找合適的種子細胞。多能干細胞因為具有多向分化能力 11，近 20 年來成為研究的熱點。 12于 2001 年在人體皮下脂肪組織中提取到了具有多向分化能力的細胞，并稱之為脂肪來源的成體干細胞 ( 實驗表明吸脂手術(shù)吸取的每 100 脂肪組織中， 數(shù)量相當于等量骨髓中 40 倍，且成纖維細胞集落形成單位 (驗中表明， 干細胞數(shù)目至少是骨髓的 500 多倍 13,14，而且 其他的干細胞分化時間要短，是目前生長最快的干細胞 15，因此有望成為優(yōu)秀的纖維軟骨組織工程的種子細胞。 但是，體外培養(yǎng)條件下 纖維軟骨細胞的分化受多種因素的影響，如細胞培養(yǎng)基、細胞密度、細胞因子、空間組織以及機械力等 16,17。目前對干細胞的定向分化和擴增尚缺乏有力的調(diào)控手段，干細胞作為移植物定向增殖分化為器官 18，用于組織損傷修復的技術(shù)瓶頸成為阻礙其進入臨床的難題 19。 轉(zhuǎn)化生長因子 系列生長因子是一族具有多種功能的多肽，它能夠促進細胞增殖，調(diào)節(jié)細胞分化，促進細胞合成并分泌細胞外基質(zhì) 20。 一種具有雙向調(diào)節(jié)作用的生長因子。關(guān)節(jié)軟骨合成 無活性的形式貯存在基質(zhì)，能被局部下降的 和蛋白酶激活， 用于間充質(zhì)來源的細胞，促進軟骨細胞增生、分化和蛋白質(zhì)合成 21。 組織學實驗結(jié)果表明，經(jīng) 用后， 胞開始向成纖維細胞樣細胞分化。阿利新藍染色，實驗組為陽性，表明誘導后細胞有合成 能力。免疫組織化學染色結(jié)果顯示 I、 膠原呈強陽性，表明誘導后的細胞產(chǎn)生膠原的能力明顯增強。 本研究在體外聚集體培養(yǎng)條件下證實了 以在 作用下，細胞向成纖維細胞樣細胞分化，能夠合成 I 型膠原及 型膠原，細胞形成許多有功能的聚集體，這些聚集體中可能具有接近的細胞 形成蘭州大學碩士研究生學位論文 脂肪間充質(zhì)干細胞 向纖維軟骨細胞誘導分化的影響 14 類似于體內(nèi)組織的結(jié)構(gòu)，因而表現(xiàn)出比早先單層貼壁培養(yǎng)的細胞更好的生理功能。說明經(jīng)過適當微環(huán)境誘導， 以向纖維軟骨細胞方向分化，有望成為纖維軟骨組織工程的種子細胞。 蘭州大學碩士研究生學位論文 脂肪間充質(zhì)干細胞 向纖維軟骨細胞誘導分化的影響 15 參考文獻 1 2010. 2006. 2 郝偉 ,胡蘊玉 ,魏義勇 ,等 中國矯形外科雜志 ,2006;21:16573 , , , et of an in 2007;2:314 H, J, Y, Y, C, M, H, C. in , 2012;18:21145 S, I. of on of , 2010;16:35696 T, , A, M, J, . of 2008;372:2307 A, A. of on 2005;11:11418 N, J, A. of on MJ 2011;7:17108. 9 J, A. of as a 2011;32:20528. 10 A, P. m,1994;27:26311 , K. 010;85:64712 A, , , et 001;7(2):21113 K, , , et an of 006;24:15014 K, , , et 008;449:5915 , 010;42:12416 ,et of on in 006;290: 17 I,A,F,et of 004;113:58518 of in 2008;22:262蘭州大學碩士研究生學位論文 脂肪間充質(zhì)干細胞 向纖維軟骨細胞誘導分化的影響 16 19 M,. of of J 009;218:920 r J, D, et of on of 000;61:100321 , ,et of on in 004;10:1414蘭州大學碩士研究生學位論文 脂肪間充質(zhì)干細胞 向纖維軟骨細胞誘導分化的影響 17 第二部分 誘導時間對 脂肪間充質(zhì)干細胞向軟骨細胞分化的影響 關(guān)節(jié)軟骨損傷的修復一直是骨科醫(yī)生面臨的巨大挑戰(zhàn)。近年來，利用軟骨組織工程原理修復軟骨缺損已經(jīng)成為該領(lǐng)域研究的熱 點。它是結(jié)合細胞生物學、工程學、材料科學和外科學，旨在重建新的 功能組織，為關(guān)節(jié)軟骨的修復奠定物質(zhì)基礎，以期能夠獲得最終的長期的功能恢復，目前成為解決軟骨修復難題中較有前景的一種途徑 1但種子細胞和生物活性因子是該組織工程的難題 3目前應用的以軟骨細胞為種子細胞修復關(guān)節(jié)軟骨缺損的自體軟骨細胞移植等方法存在諸多缺點，如種子細胞來源有限，軟骨細胞體外擴 增培養(yǎng)時易發(fā)生去分化、無法維持其生物學特性，軟骨供區(qū)損傷等。因此，該方法的應用受到了很大限制 5 因此，具有強大增殖和多向分化能力的干細胞，尤其是脂肪來源的間充質(zhì)干細胞 (成為軟骨組織工程研究的熱點 7脂肪間質(zhì)干細胞是來源于脂肪組織的干細胞，與其它成體干細胞一樣具有自我更新和多向分化的能力，在適宜誘導條件下可以分化為成骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞等。脂肪間質(zhì)干細胞在組織工程和細胞治療方面具有廣泛的應用前景，吸