阿司匹林含量測(cè)定方法綜述.doc

阿司匹林原料和制劑在體內(nèi)及體外含量測(cè)定方法藍(lán)星宇 藥學(xué)1101 31104026摘要 阿司匹林,又名：2-(乙酰氧基)苯甲酸或乙酰水楊酸，是一種歷史悠久，應(yīng)用最早，最廣和最普通的解熱陣痛藥。誕生于1899年3月6日。用于治感冒、發(fā)熱、頭痛、牙痛、關(guān)節(jié)痛、風(fēng)濕病，還能抑制血小板聚集，用于預(yù)防和治療缺血性、心絞痛、心肺梗塞、腦血栓形成，也可提高植物的出芽率，應(yīng)用于血管形成術(shù)及旁路移植術(shù)也有效。中國(guó)藥典（2010版）中阿司匹林原料藥及其制劑的含量測(cè)定采用酸、堿滴定法，而近幾十年來(lái)，隨著色譜技術(shù)、光譜技術(shù)、電泳技術(shù)等的飛快發(fā)展，阿司匹林的含量測(cè)定方法有了突破與發(fā)展。該文主要分析阿司匹林原料及以阿司匹林為主藥的多種制劑在體內(nèi)和體外的含量測(cè)定方法關(guān)鍵詞 阿司匹林 含量測(cè)定 制劑正文1. 阿司匹林原料藥在體內(nèi)含量測(cè)定方法反相高效液相色譜法色譜條件：填充劑十八烷基硅烷鍵合硅膠（5um）；色譜柱4.6mm150mm；流動(dòng)相甲醇-水-正丁醇-磷酸（300:200:10:0.05）；檢測(cè)波長(zhǎng)237nm；柱溫：室溫。對(duì)照品溶液制備：精密稱取阿司匹林對(duì)照品適量，加甲醇溶解并制成濃度分別為0.5mg/ml樣品處理：取血清樣品0.1ml，置于1.5ml具塞離心管中，加入50ul高氯酸（30%），再加不同濃度的阿司匹林及內(nèi)標(biāo)溶液適量，使?jié)舛染鶠?0ug/ml.渦旋振蕩2min，于10000r/min離心5min。測(cè)定方法：取上清液20l進(jìn)樣，用峰面積計(jì)算濃度CX。計(jì)算公式：CX=（CRAX）/AR（CR為對(duì)照品溶液的濃度（ug/ml）；AX和AR分別為樣品溶液與對(duì)照品溶液中阿司匹林的峰面積）2. 阿司匹林原料藥在體外含量測(cè)定方法1）直接滴定法 直接滴定法即將阿司匹林溶于中性乙醇、甲醇或丙酮中，以酚酞、酚紅或酚硫酞為指示劑，用氫氧化鈉滴定液直接滴定。阿司匹林含量測(cè)定的反應(yīng)原理： 測(cè)定方法：取本品約0.4g，精密稱定，加中性乙醇（對(duì)酚酞指示劑顯中性）20ml溶解后，加酚酞指示劑3滴，用氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于18.02mg的C9H8O4。計(jì)算公式：NaOH滴定度T=0.1180.16(1/1)=18.02（mg/ml）F=M（實(shí)際）/M(規(guī)定)含量（%）=（VTF）/W100%（V為滴定液體積（ml）； T為氫氧化鈉的滴定度 ，W為供試品稱樣量（g）； F為滴定液濃度校正因子（F=滴定液實(shí)際濃度/滴定液規(guī)定濃度）2）水解后剩余量滴定法利用阿司匹林酯結(jié)構(gòu)在堿性溶液中易于水解的特性，加入定量過(guò)量的氫氧化鈉滴定液，加熱使酯鍵水解后，再用硫酸滴定液回滴定剩余的氫氧化鈉滴定液。反應(yīng)原理：測(cè)定方法：取本品1.5g，精密稱定，加氫氧化鈉滴定液（0.5mol/L）50.0ml，混合，緩緩煮沸10min，放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液（0.25mol/L）滴定，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。計(jì)算公式：從上述反應(yīng)式可知：阿司匹林與硫酸的摩爾比為1:1硫酸的T=0.25（1/1）180.16=45.04(mg/ml)含量（%）=（V0-V）FT/W100%（V0為空白試驗(yàn)消耗硫酸滴定液的體積（ml）；V為樣品測(cè)定時(shí)消耗硫酸滴定液的體積（ml）；W為阿司匹林樣品的稱取量（g）；F為硫酸的濃度校正因數(shù)；T為硫酸溶液的滴定度）3. 阿司匹林制劑藥在體內(nèi)含量測(cè)定方法高效液相色譜法高效液相色譜法可用于小劑量阿司匹林制劑的體內(nèi)研究。色譜條件：色譜柱 Inertsil C18(250mm 46mm，5um)；流動(dòng)相 甲醇一25醋酸(45：55，vv)；柱溫 35 ；流速 12 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng) 237nm。溶液的配制：水楊酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：精密稱取厄貝沙坦標(biāo)準(zhǔn)品1000mg，置100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻即為100 g/ml的水楊酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，并用甲醇稀釋成不同濃度的系列溶液。標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：分別精密吸取適量水楊酸溶液，加入空白血漿，配制成濃度為03、05、l、2、4、6、8ug/ml的血漿樣品，精密移取血漿樣品05ml于10 ml離心管內(nèi)，加入100ul磷酸，混勻。加入25 ml乙醚，渦旋提取3min，4000r/min 離心10 min，取上清液20ml，37 水浴中氮?dú)饬鞔蹈?。殘留物?00ul流動(dòng)相溶解，取20ul進(jìn)樣分析。以樣品峰面積(y)對(duì)血藥濃度(c)作線性回歸，得回歸方程Y=78038c-18518r=09996。血漿樣品的處理：精密移取血漿05ml于10 ml離心管內(nèi)，加入100ul磷酸，混勻。加入25 ml乙醚，渦旋提取3min，4000r/min 離心10 min，取上清液20ml，37 水浴中氮?dú)饬鞔蹈?。殘留物?00ul流動(dòng)相溶解。測(cè)定方法：取20ul進(jìn)樣，將血漿樣品的峰面積Y代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算樣品濃度C。4. 阿司匹林制劑藥在體外含量測(cè)定方法1）兩步滴定法因阿司匹林片劑中除存在其水解產(chǎn)物水楊酸及醋酸外，在制劑工藝中添加了抑制阿司匹林水解的穩(wěn)定劑酒石酸或枸櫞酸，因而采用此法。兩步滴定法系指測(cè)定過(guò)程分兩步進(jìn)行：第一步中和制劑中的酸性水解產(chǎn)物和酸性穩(wěn)定劑（同時(shí)中和阿司匹林的游離羧基），以消除其干擾；第二步水解與滴定，即水解后剩余量滴定法。阿司匹林片含量測(cè)定的原理：中和：水解與滴定：測(cè)定方法：中和：取本品10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取片粉適量（約相當(dāng)于阿司匹林0.3g），置錐形瓶中，加中性乙醇（對(duì)酚酞指示劑顯中性）20ml，振搖使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3滴，滴加氫氧化鈉滴定液（0.1mol/ml）至溶液顯粉紅色。此時(shí)中和了供試品中存在的游離酸，阿司匹林也同時(shí)成為鈉鹽。水解與滴定：在中和后的供試品溶液中，精密加氫氧化鈉滴定液（0.1mol/ml）40ml，置水浴上加熱15分鐘并時(shí)時(shí)振搖，迅速放冷至室溫，用硫酸滴定液（0.05mol/ml）滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。計(jì)算公式：從上述反應(yīng)式可知：阿司匹林與硫酸的摩爾比為2：1硫酸的T=0.05（2/1）180.16=18.02（mg/ml）標(biāo)示量%=（V0-V）FTW(平均)/（W標(biāo)示量）100%（V0為空白試驗(yàn)消耗硫酸滴定液的體積（ml）；V為樣品測(cè)定時(shí)消耗硫酸滴定液的體積（ml）；F為硫酸滴定液的濃度校正因數(shù)；T為硫酸的滴定度（mg/ml）；W為供試品片粉的取樣量（g）；W（平均）為供試品的平均片重（g）；標(biāo)示量為片劑的規(guī)格（mg/片）2）柱分配色譜-紫外分光光度法采用柱色譜分離法消除阿司匹林膠囊和栓劑中輔料及降解產(chǎn)物的干擾。以阿司匹林膠囊柱分配色譜-紫外分光光度法為例：色譜柱的制備：于玻璃柱(20cm2.5cm)下端塞入少量玻璃棉，裝入硅藻土3g和新制碳酸氫鈉(112)2ml的混合填充劑。對(duì)照溶液的制備：取阿司匹林對(duì)照品約50mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加冰醋酸0.5ml，加三氯甲烷溶解并稀釋至刻度，混勻。精密量取5ml，置100ml量瓶中，用冰醋酸三氯甲烷（1100）稀釋至刻度，混勻。制成每1ml中約50ug的溶液。供試品的制備：取膠囊20粒，盡可能完全傾出內(nèi)容物，精密稱定，研細(xì)，混勻；取細(xì)粉適量(相當(dāng)于阿司匹林50mg)，精密稱定，置50ml量瓶中，加鹽酸甲醇溶液（150）1ml，加三氯甲烷稀釋至刻度，混勻。精密量取5ml，移至色譜柱填充劑上，用三氯甲烷5ml、25ml相繼洗滌，棄去洗液，用冰醋酸三氯甲烷溶液（150）10ml洗滌后，再用冰醋酸三氯甲烷溶液（1100）85ml洗脫，收集洗脫于100ml量瓶中，并用冰醋酸三氯甲烷溶液（1100）稀釋至刻度，混勻。測(cè)定法：用1cm吸收池，以三氯甲烷為空白，立即于最大吸收波長(zhǎng)280nm處測(cè)定對(duì)照溶液和供試溶液的吸光度。計(jì)算公式：阿司匹林（mg）=CR(AX/AR)（CR為阿司匹林對(duì)照溶液濃度（ug/ml）；AX和AR分別為供試溶液和對(duì)照溶液的吸光度） 3）離子抑制-反相高效液相色譜法典型芳酸類非甾體抗炎藥物制劑大多采用離子抑制-反相高效液相色譜法測(cè)定，用外標(biāo)法計(jì)算含量。以阿司匹林栓的含量測(cè)定為例，方法如下：色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-四氫呋喃-冰醋酸-水（20：5：5：70）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為276nm。理論板數(shù)按阿司匹林峰計(jì)算不低于3000，阿司匹林峰與水楊酸峰的分離度應(yīng)符合要求。測(cè)定方法：取本品5粒，精密稱定，置小燒杯中，在4050水浴上微溫熔融，在不斷攪拌下冷卻至室溫，精密稱取適量（約相當(dāng)于阿司匹林0.1g），置50ml量瓶中，加1%冰醋酸的甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中冷卻1小時(shí)，取出，迅速濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品貯備液。精密量取供試品貯備液5ml，置100ml量瓶中，用1%冰醋酸的甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ul，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取阿司匹林對(duì)照品，精密稱定，加1%冰醋酸的甲醇溶液振搖使溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.1mg的溶液，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。計(jì)算公式：標(biāo)示量%=CR(AX/AR) DW(平均)/(W標(biāo)示量) 100% （CR為對(duì)照品溶液濃度（mg/ml）；AX和AR分別為供試品溶液和對(duì)照品溶液的峰面積；D為稀釋體積（ml，D=50100/5=1000）；W為栓劑熔融物取樣量（g）；W(平均)為栓劑平均粒重(g)；標(biāo)示量為栓劑規(guī)格（mg/支）4）可見(jiàn)分光光度法以阿司匹林腸溶片為例：原理：阿司匹林腸溶片的主要成分為乙酰水楊酸，分子中酯基在堿性溶液中可與羥胺反應(yīng)生成羥肟酸;后者在酸性條件下與三氯化鐵形成酒紅色的羥肟酸鐵，最大吸收波長(zhǎng)為520nm，在一定濃度范圍內(nèi)，吸光度呈線性關(guān)系，可測(cè)出阿司匹林藥片中乙酰水楊酸的含量。標(biāo)準(zhǔn)溶液系列和樣品溶液的配制：分別取0.5gL-1乙酰水楊酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.00mL(空白溶液)，0.50mL，1.00mL，1.50mL，2.00mL和阿司匹林樣品溶液1.00mL置于25mL容量瓶中，分別加入7%鹽酸羥胺乙醇液1.00ml，2molL-1NaOH1.00ml，放置3分鐘，再分別加入4molL-1HCl和10%FeCl3各1.00mL，加水至刻度，搖勻。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：標(biāo)準(zhǔn)溶液系列和樣品溶液放置10分鐘后，用空白溶液作對(duì)照，在520nm處測(cè)定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)作圖，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品的測(cè)定：通過(guò)測(cè)定樣品的吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上，找出阿司匹林樣品稀釋溶液的濃度C（g/L），計(jì)算公式：原阿司匹林樣品溶液的濃度=C25（C為阿司匹林樣品稀釋溶液的濃度（g/L）；25為稀釋倍數(shù)）5）差示分光光度法差示分光光度法是利用被測(cè)物在兩種不同溶液中吸收光譜發(fā)生了特征性變化，而共存干擾物在該兩種溶液中未引起光譜變化，測(cè)定兩種溶液的吸收度差值（A值），根據(jù)A與被測(cè)物濃度C的線性關(guān)系進(jìn)行定量測(cè)定。以阿司匹林腸溶片為例：原理：利用阿司匹林在01 mol/L 鹽酸溶液和01 mol/L 氫氧化鈉溶液中紫外光譜發(fā)生變化的特征，試用差示分光光度法，通過(guò)測(cè)定差示吸收值(A)直接測(cè)定阿司匹林的含量。測(cè)定波長(zhǎng)的選擇：精密稱取阿司匹林對(duì)照品1029 mg，置100 ml量瓶中，加01 mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，制成阿司匹林對(duì)照品溶液。精密量取2等份，每份10ml，各置l0 ml量瓶中，分別以01 mol/L鹽酸溶液和01mol/L氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻。以前者作參比液，后者為樣品液，在波長(zhǎng)260320 nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，本品在297 nm波長(zhǎng)處有最大差示吸收值(A)，而輔料在此處的吸收值(A)為零，故選用297 nm為測(cè)定波長(zhǎng)線性關(guān)系考察：精密量取對(duì)照品溶液10、15、20、25、30 ml各兩等份，分別置10 ml量瓶中，每組分別用01mol/L 鹽酸溶液和01 mol/L 氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻。以前者作參比液，后者為樣品液，在297nm處測(cè)定A，求得回歸方程：A=518746C一004373，r=09998。結(jié)果表明，阿司匹林在10293087 mg/L 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。樣品的測(cè)定：取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于阿司匹林25 mg)，置100 ml量瓶中，加01mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液兩等份，每份20 ml，各置25 ml量瓶中，分別用01mol/L鹽酸溶液和01 mol/L氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，以前者作參比液，后者為樣品液，照紫外可見(jiàn)分光光度法，在297 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度；另精密稱取阿司匹林對(duì)照品適量，同法測(cè)定，計(jì)算含量。計(jì)算公式：C樣=（A樣C對(duì)）/A對(duì)標(biāo)示量（%）=( C樣DW（平均）) /（W標(biāo)示量）100%(A樣為樣品差示吸收值；C對(duì)為對(duì)照品濃度；A對(duì)為對(duì)照品差示吸收值；D為稀釋倍數(shù)；W（平均）為樣品的平均片重（g）；W為樣品片粉的取樣量（g）)6）百分吸收系數(shù)法供試品：精密稱取阿司匹林注射液適量，置100ml量瓶，用乙醇定容。精密量取2ml置100ml量瓶，用乙醇定容，即得。含量測(cè)定：在276nm下測(cè)定A計(jì)算公式：（A= E1%cmCL）C= A / E1%cm 樣品% = A / E1%cm F/W（F = 稀釋倍數(shù)和濃度換算因子 W = 取樣量）7）電極法以三芐基錫辛酸酯為活性物質(zhì), 制備具有良好的電位響應(yīng)性能和選擇性能的PVC 膜水楊酸根離子敏感電極，該電極應(yīng)用于阿司匹林制劑的含量測(cè)定。阿司匹林易水解得到水楊酸根離子, 且反應(yīng)定量。因此, 通過(guò)對(duì)水楊酸根離子的測(cè)定即可得出樣品中的阿司匹林含量。待測(cè)樣品的處理將適量阿司匹林片藥品( 10 片) 研制成粉狀，精密稱取11. 5 g ， 在0. 5 mol/ L NaOH 溶液25 ml 中加熱回流1 h 后過(guò)濾，定容至250 ml。吸取10ml 濾液，用稀硫酸調(diào)至pH 5. 5， 再用pH 5. 5的磷酸鹽緩沖液定容至100 ml 作為待測(cè)液。測(cè)定方法：使用該電極通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)溶液法和樣品加入法, 分別測(cè)定藥品經(jīng)前述處理后所得試樣中的水楊酸根離子濃度, 通過(guò)換算得出藥劑中阿司匹林的含量。8）同步掃描熒光光譜原理：熒光光度計(jì)同步掃描時(shí), 得到兩組分互不干擾的熒光峰, 借此分別測(cè)定兩組分的含量。溶液的配制：對(duì)照液：精密稱取阿司匹林對(duì)照品適量，置100ml量瓶，用乙醇定容。精密量取2ml置100ml量瓶，用乙醇定容，即得。供試品：精密稱取阿司匹林注射液適量，置100ml量瓶，用乙醇定容。精密量取2ml置100ml量瓶，用乙醇定容，即得。測(cè)定方法：用對(duì)照品溶液測(cè)定熒光強(qiáng)度與濃度的線性關(guān)系后，再在每次測(cè)定前，用一定濃度的對(duì)照品溶液校正儀器的靈敏度；然后再相同的條件下，分別讀取對(duì)照品溶液及其試劑空白的熒光強(qiáng)度與供試品溶液及其空白的熒光強(qiáng)度計(jì)算公式：CX =（RXRXb）/（RrRrb）Cr（CX和 Cr為供試品溶液、對(duì)照品溶液的濃度，RX供試品溶液熒光強(qiáng)度，RXb供試品溶液試劑空白的熒光強(qiáng)度，Rr對(duì)照品溶液的熒光強(qiáng)度，Rrb為對(duì)照品溶液的試劑的空白熒光強(qiáng)度）9）線性掃描伏安法以玻碳電極為指示電極, 用線性掃描伏安法測(cè)定水楊酸, 從而間接測(cè)定阿司匹林。原理：在硫酸- 硫酸鉀底液中,阿司匹林的水解產(chǎn)物水楊酸在玻碳電極上產(chǎn)生一靈敏的氧化峰, 峰電位為1. 16 V; 在4. 010- 5mol/ L8. 010- 3mol/ L 濃度范圍內(nèi)水楊酸與峰電流呈良好線性關(guān)系, 最低檢測(cè)濃度為2. 010- 5 mol/ L。溶液的配制：0. 1 mol/ L NaOH 溶液: 稱取4g NaOH 于100 ml燒杯,用水溶解并轉(zhuǎn)移到1 000 ml容量瓶中, 用水定容。0.01mol/ L 水楊酸標(biāo)準(zhǔn)溶液: 稱取0. 138 2 g分析純水楊酸, 用0. 1 mol/ L NaOH 溶液溶解并定容到100ml, 放置陰涼處保存。5 mol/ L硫酸溶液: 于720 ml水中徐徐加入280 ml濃硫酸, 同時(shí)用玻璃棒攪拌。0. 5 mol/ L 硫酸鉀溶液: 稱取8. 713 g 硫酸鉀于100 ml燒杯中, 用水溶解并轉(zhuǎn)移到100 ml容量瓶中, 用水定容。所用水均為去離子水.工作曲線制作：按選定實(shí)驗(yàn)條件對(duì)不同濃度水楊酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行線性掃描伏安測(cè)定, 結(jié)果表明水楊酸在4. 010- 5mol/L8. 010- 3mol/ L 濃度范圍內(nèi)與峰電流呈良好線性關(guān)系, 最低檢測(cè)濃度為2. 010- 5mol/ L. 工作曲線回歸方程為I p= - 7. 336 2C- 4. 687 6, 相關(guān)系數(shù)R= 0. 9941.精密稱取10 片阿司匹林藥片, 均勻研細(xì), 再?gòu)闹袦?zhǔn)確稱取相當(dāng)于一片重量的樣品, 用0. 1 mol/ L NaOH溶液溶解, 放置10 min, 再用0. 1 mol/ L NaOH 溶液定容至50 ml。 從中移取1. 00 ml至25. 00 ml容量瓶, 加入5 mol/ L 硫酸2