RNA凝膠電泳試驗.doc

餐后高血糖大血管疾病。他汀完全阻滯TAGE引起的核因子活性上升、VEGF表達(dá)增加和隨之的DNA合成增加，微血管，甲羥戊酸抑制他汀的生長阻滯作用，他汀可能阻TAGE-RAGE信號通路（血管高通透性和生成）。還劑量依賴性降低TAGE引起的超氧族產(chǎn)生。阿托伐他汀抑CRP表達(dá)TAGE(toxic),是否有非毒性AGE? AGE引起并發(fā)癥的主要成分？甘油醛與蛋白的氨基快速反應(yīng)后形成TAGE,導(dǎo)致血管炎癥和氧化應(yīng)激。TAGE形成可能較糖化血（glc-AGEs的前體）快。Cerivastainadvanced glycation end products &atherosclerosis糖基化終末產(chǎn)物對大鼠腎皮質(zhì)基質(zhì)金屬蛋白酶-2活性的影響SD大鼠，100，40天，微血管病變（視網(wǎng)膜，腎臟），結(jié)果變化不明顯。Wistar,100,一個月，腎臟病變，僅比較了腎功能，無結(jié)構(gòu)變化的比較。胰高血糖素樣肽-1（GLP-1），一種腸促胰島素因子，空腸、回腸和盲腸的L細(xì)胞分泌促胰島素釋放，延緩胃排空，降低胰高血糖素和降低食欲等。可進(jìn)一步水解，GLP-1(736)NH2是體內(nèi)GLP-1的自然形式，其促胰島素分泌的作用最強。GLP-1的生理功能：促葡萄糖依賴性促胰島素的分泌，有效降低餐后血糖，抑制胰高血糖素分泌，避免低血糖；影響腸胃消化，GLP-1可能通過促進(jìn)生長抑素的釋放和抑制胃泌素的釋放而抑制胃酸分泌，控制餐后血糖；GLP-1顯著影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)，明顯抑制食欲；GLP-1可促進(jìn)B細(xì)胞增殖、再生，抑制其凋亡，GLP-1分泌減少被認(rèn)為是B細(xì)胞功能衰退的重要因素；GLP-1血管內(nèi)皮功能明顯效果，對神經(jīng)元具有保護(hù)作用。血糖正常時，GLP-1作用隨之降低，治療不會引起低血糖。最主要是降低餐后高血糖。160 0 240RNA凝膠電泳試驗實驗基本原理RNA可以使用非變性或變性凝膠電泳進(jìn)行檢測。在非變性電泳中，可以分離混合物中不同分子量的RNA分子，凡是無法確定分子量。只有在變性情況下，RNA分子完全伸展，其泳動率才與分子量成正比。判斷RNA提取物的完整性是進(jìn)行電泳的主要目的之一。完整的未降解的RNA制品的電泳圖譜應(yīng)可清晰看到18s rRNA、28s rRNA、5s rRNA的三條帶，且28s rRNA的亮度應(yīng)為18s rRNA的兩倍。實驗試劑1、0.1%DEPC水：200ml雙蒸去離子水加0.2mlDEPC焦炭酸、二乙酯混勻，室溫放置過夜，高壓滅菌。2、10x電泳緩沖液：嗎啉代丙烷磺酸（MOPS）0.4mol/L（pH 7.0）；NaAc 0.1mol/L；乙二胺四乙酸(EDTA) 10mmol/L；3、50mL變性瓊脂糖凝膠（1%）：10x電泳緩沖液5 mL；瓊脂糖0.5 g；0.1%DEPC水36.5 mL；加熱溶解，稍冷卻，加入8.5 ml 37%甲醛。4、上樣緩沖液（染料）：50%甘油，1mmol/LEDTA，0.4% 溴酚蘭，0.4%二甲苯藍(lán)。5、甲酰胺（去離子）。v電泳槽清洗：去污劑洗干凈（一般浸泡過夜）水沖洗乙醇干燥3%H2O2灌滿室溫放置10分鐘0.1%DEPC水沖洗。操作步驟1、將制膠用具用70%乙醇沖洗一遍，晾干備用。2、制膠：稱取0.5g瓊脂糖粉末，加入放有36.5mL的DEPC水（蒸餾水40ml）的錐形瓶中，加熱使瓊脂糖完全溶解。稍冷（6070）卻后加入5ml的10x電泳緩沖液、8.5（9）ml的甲醛（+0.5l溴化乙錠）。然后在膠槽中灌制凝膠，插好梳子，水平放置待凝固后使用。3、加樣：在一個潔凈的小離心管（DEPC處理過的500l的）中混合以下試劑：電泳緩沖液（10x）2l、甲醛3.5ml、甲酰胺10ml（l）、RNA樣品3.5（4.5）l?；靹?，置60保溫10min，冰上速冷。加入3l的上樣緩沖液（染料）混勻，取適量加樣于凝膠點樣孔內(nèi)。同時點RNA標(biāo)準(zhǔn)樣品。4、電泳：打開電泳儀(電泳槽內(nèi)加入1XMOPS緩沖液)，穩(wěn)壓7.5V/cm（ml）電泳。5、電泳結(jié)束后通過紫外透視儀觀察。注意事項本實驗中必須保持RNase污染以免RNA降解。所有試劑用DEPC水配制，用具也用DEPC水沖洗，并滅菌。電泳RNA所用器械如制膠的模具、梳子、電泳槽等用肥皂粉洗干凈后用雙蒸水沖洗二遍后在室溫晾干備用。用新的1XTBE配制1.2%瓊脂糖凝膠，倒膠時溴化乙錠（EB）直接加入凝膠中。制備好的瓊脂糖凝膠板放入電泳槽后再加入經(jīng)高壓滅菌過的1XTBE，液面只能剛好同膠面平齊，緩沖液不要淹過膠面。點樣時，樣品RNA每10l加入2l上樣緩沖液，上樣緩沖