恒溫平臺(tái)石墨爐法測(cè)定人血白蛋白制劑中的鋁.doc

恒溫平臺(tái)石墨爐法測(cè)定人血白蛋白制劑中的鋁牛映斗 李長(zhǎng)青 劉體生（北京普析通用儀器公司原子光譜儀器部 北京 100081）作為臨床治療用的人血白蛋白制劑，具有高效的維持機(jī)體內(nèi)膠體滲透壓的作用，常用于失血、創(chuàng)傷引起的休克等急癥治療中。由于系直接靜脈注入，故對(duì)于制劑中有害元素鋁的含量國家藥典中有明確的限定。建立有效準(zhǔn)確的測(cè)定白蛋白中鋁含量的方法是保證制劑安全的措施之一，而石墨爐原子吸收法是測(cè)定生物物質(zhì)中鋁的有效方法。本文報(bào)告應(yīng)用北京普析通用儀器公司生產(chǎn)的TAS-990原子吸收分光光度計(jì)以平臺(tái)石墨爐法測(cè)定人血白蛋白制劑中鋁的方法。1 儀器及試劑1.1儀器TAS-990型原子吸收分光光度計(jì)，帶橫向加熱等溫平臺(tái)石墨爐；各種規(guī)格聚乙烯比色管、塑料管；微量可調(diào)移液器。1.2試劑鋁標(biāo)準(zhǔn)溶液：濃度 1000g/ml Al，購自國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心；Mg(NO3)2，優(yōu)級(jí)純；Triton X-100；高純純水，比電阻18.3M/cm。2 儀器條件2.1鋁空心陰極燈，燈電流5mA。2.2分析波長(zhǎng)：309.3nm ，光學(xué)帶寬 0.4nm。2.3石墨爐工作條件帶全熱解平臺(tái)的熱解涂層橫向加熱石墨管系普析通用公司產(chǎn)品，平臺(tái)系全熱解石墨制成，具有更高的密度和耐腐蝕耐高溫性和特長(zhǎng)的使用壽命，極適合用于如鋁、鉬、釩等這類高溫元素的測(cè)定。人血白蛋白制劑含有96以上的人血白蛋白。如何有效的去除大量有機(jī)物的干擾，保證充分灰化是極為重要的測(cè)試條件。文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，有人作血清中鋁測(cè)定時(shí)以900在灰化可保證有最高的檢測(cè)峰1。而更多的作者23認(rèn)為兩步灰化法能有效去除石墨管內(nèi)的炭垢，明顯減少了干擾。我們經(jīng)過多次測(cè)試證明兩步灰化（即600和1500各保持一定加熱時(shí)間）法比一步灰化更可取，而且在TAS-990儀器上證明最高1500的灰化溫度更完全不會(huì)有任何鋁的損失！橫向平臺(tái)加熱使樣品在等溫氣氛中原子化，在最大功率下原子化會(huì)形成更密集的原子云，有利于降低干擾，提高靈敏度。最終確定的加熱程序如下。序號(hào)溫度/升溫時(shí)間/S保持時(shí)間/S原子化內(nèi)氣流量11501010否大22501020否大36001020否大415001020否大5230002是小6250012否大3 樣品測(cè)試3.1樣品制備：人血白蛋白制劑系某藥廠贈(zèng)品。樣品的前處理大多采用直接稀釋法。稀釋劑可分為兩類，一類單純使用稀HNO3水溶液，為了防止蛋白質(zhì)遇酸凝固，HNO3的酸度不應(yīng)大于1。另一類稀釋劑采用混和試劑，將基體改進(jìn)劑（多為Mg(NO3)2，）表面活性劑（多為Triton X-100）和稀HNO3混和而成。就蛋白樣品和分析元素鋁而論，混和稀釋劑更可取，由于不含鋁的Mg(NO3)2和Triton X-100難于獲得，也由于全熱解平臺(tái)的使用故本法采用0.5HNO3作稀釋劑。3.2樣品測(cè)定：為克服可能存在的干擾，本法采用標(biāo)準(zhǔn)加入法。標(biāo)準(zhǔn)鋁溶液（100ng/mLAl）：用微量可調(diào)移液器準(zhǔn)確吸取100L鋁儲(chǔ)備標(biāo)液（100g/mLA l），注入100mL 容量瓶中，用0.2HNO3溶液稀釋至100mL刻度，搖勻。此溶液Al濃度為100ng/mL。溶液保存于聚乙烯瓶中。具體配法如下：第一管（空白管），在1.5mL帶蓋聚乙烯離心管中加入1.25mL0.5HNO3。第二管（樣品管），在1.5mL帶蓋聚乙烯離心管中加入0.10mL樣品（人血白蛋白制劑）和1.15mL0.5HNO3。第三管（標(biāo)準(zhǔn)加入管），在1.5mL帶蓋聚乙烯離心管中加入0.10mL樣品（人血白蛋白制劑），0.25mL濃度為100ng/mL的鋁標(biāo)準(zhǔn)溶液和0.90mL0.5HNO3。將三管蓋子蓋嚴(yán)壓緊，在高速混勻器上震蕩混勻半min,以10L進(jìn)樣量石墨爐分析鋁含量，調(diào)出儀器標(biāo)準(zhǔn)加入法操作程序，樣品管溶液中鋁濃度直接以ng/mL單位報(bào)告出。此報(bào)告值乘以稀釋倍數(shù)12.5后即得到人血白蛋白制劑中鋁的含量（ng/mL）。分析結(jié)果：雙份平衡樣品8次分析結(jié)果如下：28.551 RSD6.431.407 RSD8.4總平均值(+)/2=29.979=30.0(ng/mL)樣品中鋁的含量30012.5375ng/mL3.3方法學(xué)檢驗(yàn)為驗(yàn)證分析方法的準(zhǔn)確性，進(jìn)行了同一樣品的高溫灰化硝酸融解標(biāo)準(zhǔn)曲線法分析鋁的含量和國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)“牛血清成分分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)”（GBW0912）中鋁含量的標(biāo)準(zhǔn)加入法分析?；一ǎ喝?0.0mL人血白蛋白制劑，注入100mL石英燒杯中，低溫蒸干，炭化后移入高溫爐，600完成灰化?；曳萦蒙倭浚?mL）1+1 HNO3溶解后定容100mL，石墨爐分析?；一y(cè)定結(jié)果：36.54ng/mL10010365.4ng/mLGBW0913鋁分析結(jié)果：3.235ng/mL12.540.4ng/mLGBW0913標(biāo)樣報(bào)告值（參考值）為37ng/mL，與40.4ng/mL相比，兩者相對(duì)誤差8.9，在正常允許范圍內(nèi)?；一ńY(jié)果365.4ng/mL與標(biāo)準(zhǔn)加入法結(jié)果375ng/mL相比，兩者結(jié)果十分一致。從方法學(xué)檢驗(yàn)證明，本測(cè)定方法準(zhǔn)確可靠。4 注意事項(xiàng)：生物物質(zhì)中微量鋁測(cè)定的難點(diǎn)在于污染！鋁是一個(gè)常見元素，存在與分析場(chǎng)所的環(huán)境（空氣、水、試劑、所有容器量器等）中。因此所有試劑應(yīng)盡量純凈，所有容器應(yīng)用10HNO3或1EDTA浸泡24h后用超純水沖凈，晾干。微量移液器取液尖亦應(yīng)如此處理。參考文獻(xiàn)1郭金蘭：無火焰原子吸收法測(cè)定尿毒癥病人血清中鋁含量。江西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，2000年12月