★-放線菌MY048的分子鑒定與抑菌活性成分分離-西南科技大學碩士學位論文.pdf

西南科技大學 碩士學位論文 植物根際放線菌MY048的分子鑒定與抑菌活性成分分離 姓名 趙俊凌 申請學位級別 碩士 專業(yè) 藥用植物 指導教師 侯大斌 阮期平 20070410 西南科技大學碩士研究生學位論文第1 頁 摘要 本文以抗金葡球菌的能力為指標 對藥用植物 川烏 的根際放線菌 M Y 0 4 8 菌株進行了菌株分子的鑒定 培養(yǎng)基組成與發(fā)酵條件的優(yōu)化 代謝活 性物質(zhì)的分離純化等幾個方面的研究 結果如下 運用現(xiàn)代的分子生物技術 從M Y 0 4 8 的基因組里獲取1 6 S r D N A 對其 進行序列測定及系統(tǒng)發(fā)育分析 最后鑒定M Y 0 4 8 為鏈霉屬放線菌 為了提高活性物質(zhì)的產(chǎn)量 進行通過碳氮源與其濃度及無機鹽實驗 篩選 出培養(yǎng)基組成的最佳配比為 可溶性淀粉2 葡萄糖O 5 酵母浸粉0 5 牛肉浸膏0 3 C a C 0 3 0 2 K 2 H P 0 4 0 0 2 通過培養(yǎng)條件的實驗 確定最適初始p H 為7 O 7 2 最適溫度為2 8 C 最適接種量為1 0 最佳種齡4 8 h 最佳裝液量為1 5 最佳搖床轉(zhuǎn)數(shù)為 2 0 0 r m i n 最佳發(fā)酵時間為1 4 4 1 6 8 h 按照上述優(yōu)化后的發(fā)酵條件 進行1 0 L 罐發(fā)酵培養(yǎng) 對經(jīng)乙酸乙酯萃取獲得有抑菌活性的粗提物的理化性質(zhì)進行研究 在此 基礎上 運用硅膠柱層析 S e p h a d e xL H 2 0 凝膠柱層析與制備型H P L C 等分 離純化手段 獲到1 個抑菌高活性化合物 最后通過分析型H P L C 分析純度 達到9 6 關鍵詞 放線菌抑菌活性菌種鑒定條件優(yōu)化分離純化 西南科技大學碩士研究生學位論文第1I 頁 A b s t r a c t B a s e do nt h ei n d e xo fa n t i b a c t e r i a la c t i v i t i e s t h i st h e s i ss t u d i e db i o a c t i v e m e t a b o l i t ep r o d u c e db ya c t i n o m y c e t e sM Y 0 4 8f r o mt h er o o to fA c o n i t u m T h e m a j o rc o n t e n t so fr e s e a r c hc o n t a i n e da sf o l l o w s m o l e c u l a ri d e n t i f i c a t i o no f M Y 0 4 8s t r a i n s o p t i m i z a t i o no ff e r m e n t a t i o nc o n d i t i o na n dc u l t u r em e d i u m a s w e l la ss e p a r a t i o na n dp u r i f i c a t i o no fb i o a c t i v es u b s t a n c e sa n dS Oo n B ym e a no ft h et e c h n i q u ef o rm o l e c u l a rb i o l o g y 1 6 S r D N As e q u e n c ew a s o b t a i n e df r o mt h eg e n o m eo fM Y 0 4 8 T i l er e s u l to fs e q u e n c i n ga n dp h y l o g e n e t i c a n a l y s i ss h o w e dM Y 0 4 8w a si d e n t i f i e da sS t r e p t o m y c e I no r d e rt oi n c r e a s et h ep r o d u c t i o n t h er e s e a r c hf o rm e d i u mc o m p o s i t i o n i n c l u d i n gc a r b O i ls o u r c e n i t r o g e ns o u r c ea n dt h e i rc o n c e n t r a t i o n s a sw e l la s o r t h o g o n a le x p e r i m e n t sw a si m p l e m e n t e d t h er e s u l ts h o w e dt h a t t h eo p t i m a l m e d i u mc o m p o s i t i o nc o n t a i n e ds o l u b l es t a r c h 2 g l u c o s eO 5 y e a s te x t r a c t P o w d e r0 5 b e e fE x t r a c t0 3 K H P 0 4O 0 2 a n dC a C 0 3 0 2 T h er e s u l to fc u l t u r ec o n d i t i o nd i s p l a y e dt h a tt h eo p t i m a lf e r m e n t a t i o n c o n d i t i o n sw a si n i t i a lp H 7 0 7 2 t e m p e r a t u r e2 8 i n o c u l a t i o nv o l u m e1O r s e e da g e4 8 h 1 i q u i dv o l u m e l 5 c u l t u r et i m e1 4 4 h v i b r a t i o n2 0 0 r m i n O nt h e b a s i so ft h eo p t i m i z e dc o n d i t i o n s M Y 0 4 8w a sl e r m e n t e db y10 Lf e r m e n t o r 0 nt h ef o u n d a t i o no ft h er e s e a r c hf o rp h y s i c a la n dc h e m i c a ln a t u r eo ft h e r a ws u b s t a n c e se x t r a c t e df r o mt h ef e r m e n t a t i o nb r o t ho fM Y 0 4 8b ye t h y la c e t a t e t h ea c t i v es u b s t a n c elw e r es e p a r a t e da n dp u r i f i e db ym e a n so fs i l i c ag e lc o l u m n c h r o m a t o g r a p h y S e p h a d e xL H 2 0c o l u m nc h r o m a t o g r a p h ya n dp r e p a r a t i v eH P L C T h ea n a l y t i cH P L Ci n d i c a t e dt h a ti t sc o n t e n ti S9 6 t h ea n a l y s i so fH N M R 3 C N M RH M B C H S Q C a n dR O E S Yh a sb e e nc o n d u c t i n g K e yw o r d A c t i n o m y c e t e A n t i b a c t e r i a la c t i v i t y S t r a i n i d e n t i f i c a t i o n F e r m e n t a t i o nc o n d i t i o n s S e p a r a t i o na n dP u r i f i c a t i o n 獨創(chuàng)性聲明 本人聲明所呈交的論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究 成果 盡我所知 除了文中特別加以標注和致謝的地方外 論文中不包含其他人 已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果 也不包含為獲得西南科技大學或其它教育機構的 學位或證書而使用過的材料 與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已 在論文中作了明確的說明并表示了謝意 簽名 削衾疆日期 力鉀 關于論文使用和授權的說明 本人完全了解西南科技大學有關保留 使用學位論文的規(guī)定 即 學校有權 保留學位論文的復印件 允許該論文被查閱和借閱 學?？梢怨荚撜撐牡娜?或部分內(nèi)容 可以采用影印 縮印或其他復制手段保存論文 保密的學位論文在解密后應遵守此規(guī)定 簽名 趲 導師簽名 銩塵 兩 日期 m 9 f 口 西南科技大學碩士研究生學位論文第1 頁 1緒論 1 1立題背景與目的意義 金黃色葡萄球菌 sa U l 8 a U 8 是臨床常見的高致病性細菌 自從2 0 世 紀4 0 年代青霉素問世以來 該菌引起的感染性疾病曾受到較大控制 隨著 青霉素的廣泛使用 該菌的某些菌株產(chǎn)生青霉素酶 該酶能水解O 一內(nèi)酰胺 環(huán) 使青霉素失活 從而表現(xiàn)為對青霉素耐藥 甲氧西林能抗青霉素酶的水 解作用 自1 9 5 9 年應用臨床后曾經(jīng)有效控制了sa P a u s 產(chǎn)酶株的感染 然而 1 9 6 1 年在英國又首先發(fā)現(xiàn)了能耐甲氧西林的曼f d U l e f f U S M R S A 至2 0 世紀7 0 年代后各國相繼報道 8 0 年代其感染幾乎遍及全球 最高可占 曼a L I e S U S 感染總數(shù)的5 8 M R S A 感染 乙型肝炎和獲得性免疫缺陷綜合征 一直被列為世界范圍內(nèi)三大最難解決的感染性疾患 成為各國研究的熱點 近年來 a P a s 對抗生素的耐藥情況日漸嚴重 M R S A 不但對甲氧西林耐 藥 而且對所有B 一內(nèi)酰胺類抗生素及其他抗菌藥物耐藥M R S A 還可通過改變 抗生素的作用靶位 產(chǎn)生修飾酶 降低膜通透性等不同機制 對氨基糖苷類 大環(huán)內(nèi)酯類 四環(huán)素類 氟喹諾酮類 磺胺類 利福平產(chǎn)生不同程度的耐藥 叫 放線菌作為一類重要的微生物 以產(chǎn)生種類繁多的生物活性物質(zhì)而廣泛 受到重視 目前 放線菌仍是抗生素的主要微生物來源 臨床使用的抗生素 有7 0 是由放線菌產(chǎn)生的 現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)和分離出的由放線菌產(chǎn)生的抗生素多達 4 0 0 0 多種 其中 有5 0 多種抗生素已經(jīng)得到廣泛的應用 如鏈霉素 紅霉 素 多氧霉素 金霉素 卡那霉素 氯霉素和慶大霉素等用于臨床治療人的 多種疾病 隨著病原微生物對抗生素抗性的提高 尋找具有新型作用機制的 抗生素顯得十分必要 本實驗室在綿陽及附近地區(qū)主要藥用植物 烏頭 的根系特殊環(huán)境中篩 選抗有抑菌活性的放線菌 以置8 U O a U SA T C C 6 5 3 8 為指示菌株 對分離到 的1 0 0 多株放線菌進行活性測定 發(fā)現(xiàn)一株來自藥用植物的根部土壤的菌株 M Y 0 4 8 具有有較強抑菌活性的 本論文對菌株M Y 0 4 8 及次生代謝產(chǎn)物進行了 系統(tǒng)研究 擬為深入開發(fā)能夠用于臨床治療奠a 憎a s 感染的新藥尋找新的 先導化合物 西南科技大學碩士研究生學位論文第2 頁 1 2國內(nèi)外研究進展 1 2 1 抗生素 抗生素是由微生物產(chǎn)生的 具有抑制其它微生物生長或殺滅其他微生物 的性能的化學物質(zhì) 1 9 2 9 年秋 當英國科學家F l e m i n g 發(fā)現(xiàn)了在含有金黃 色葡萄球菌的培養(yǎng)基平板上的青霉菌菌落周圍細菌不能生長的現(xiàn)象 通過研 究 他發(fā)現(xiàn)了一種能夠抗細菌物質(zhì) 這就是青霉素 牛津大學病理學教授弗 洛里在1 9 3 8 1 9 3 9 年對已知的由微生物產(chǎn)生的抗生物質(zhì)進行了系統(tǒng)的研究 在以錢恩為首的一批優(yōu)秀化學家的幫助 于1 9 4 0 年提取和純化出可用于肌肉 注射的青霉素成品 抗生素的時代隨之而到來 隨著微生物學 生物化學 有機化學基礎理論的發(fā)展以及分子遺傳學和 新技術的進步 新抗生素的篩選方法已逐步從傳統(tǒng)方法過渡到更為理性化的 新方法 美國放線菌專家瓦克斯曼與他的研究小組于1 9 4 1 年從放線菌培養(yǎng)液 中找到了紫放線菌素 4 1 并在1 9 4 4 年發(fā)現(xiàn)了第一個用于臨床的由放線菌產(chǎn)生 的新抗生素一鏈霉素 瓦克斯曼的成就引起人們在世界范圍內(nèi)尋找土壤微生 物所產(chǎn)生的其它抗生素 于是開始了大規(guī)模篩選抗生素的時代 在短短的一 二十年間 相繼發(fā)現(xiàn)了金霉素 1 9 4 7 氯霉素 1 9 4 8 土霉素 1 9 5 0 制 霉菌素 1 9 5 0 紅霉素 1 9 5 2 卡那霉素 1 9 5 8 等 這些抗生素的間世 使當時的細菌性疾病與立克次體病得以成功的治療 也正是在這一時期 抗 生素研究進入了有目的 有計劃 系統(tǒng)化的階段 并建立了大規(guī)模的抗菌素 制藥工業(yè) 生產(chǎn)方法亦工業(yè)化 進入6 0 年代 人們從微生物中尋找新的抗生 素的速度明顯放慢 取而代之的是半合成抗生素的出現(xiàn) 從此開始了用化學 方法對已有的抗生素進行化學結構改造的新時期 開辟了抗生素研制的新道 路 目前 發(fā)現(xiàn)和分離的天然抗生素有四 五千種 半合成抗生素達三 四 千種 用于臨床的大約有3 5 0 種 1 2 1 1 抗生素的分類 1 按生物來源分類 放線菌 主要產(chǎn)生酸性 堿性 中性和兩性的抗生素 其中以堿性化合 物較多 包括氨基糖苷類 如鏈霉素 新霉索 卡拉霉素等 四環(huán)類 如四 環(huán)素 金霉素 土霉素等 放線菌素類 如放線菌素D 等 大環(huán)內(nèi)酯類 如 紅霉素 螺旋霉素 柱晶白霉素等 和多烯大環(huán)內(nèi)酯類 如制霉素 抗滴蟲 霉素等 等 西南科技大學碩士研究生學位論文第3 頁 真菌 產(chǎn)生脂環(huán)芳香類或簡單的氧雜環(huán)類抗生素 多數(shù)為酸性化合物 例如 桔霉素 青霉素 頭抱菌素等 細菌 產(chǎn)生一般是具有復雜化學結構的多肽類物質(zhì)抗生素 多數(shù)為堿性 對腎臟有毒性 例如 多粘霉素 桿菌肽 短桿菌素 枯草桿菌素等 動植物 植物主要產(chǎn)生蒜素 番茄素 魚素等 動物主要產(chǎn)生抗菌肽 等 2 按生物合成分類 氨基酸肽類衍生物 簡單的A A 類抗生素 如環(huán)絲氨酸 寡膚類抗生素 青霉素頭 孢菌素 多肽類抗生素 多粘菌素 桿菌肽 多肽大環(huán)內(nèi)酯類 放線菌素 含嘌呤及嘧啶基因類 曲古霉素 嘌呤霉素 糖類衍生物 糖苷類 鏈霉素 新霉素 卡那霉素和巴龍霉素等 與大環(huán)類內(nèi)酯連接的糖苷類抗生素 如紅霉素 碳霉素等 乙酸 丙酸衍生物 乙酸衍生物 如四環(huán)類抗生素 灰黃霉素等 丙酸衍生物 如紅霉素等 多烯和多炔類抗生素 如制霉菌素 曲古霉素等 3 化學結構分類 B 一內(nèi)酰胺類 主要包括頭孢菌素和青霉素兩大類 氨基糖苷類 如鏈霉素 新霉素 卡那霉素 慶大霉素 春日霉素 大環(huán)內(nèi)酯類 如紅霉素 柱晶白霉素 麥迪加霉素等 苯烴基胺類 如氯霉素 甲楓氯霉素等 四環(huán)類 如金霉素 土霉素 四環(huán)素等 多肽類 如多粘菌素 放線菌素 桿菌肽等 多烯類 如制霉菌素 兩性霉素B 等 蔥環(huán)類 如柔紅霉素 阿霉素 正定霉素等 環(huán)橋類 如利福霉素 利福平等 其他 如創(chuàng)新霉素 磷霉素等 西南科技大學碩士研究生學位論文第4 頁 4 按作用對象分類 抗G 菌的抗生素 主要是青霉素 紅霉素 林可霉素 抗G 菌的抗生素 主要多粘菌素 抗真菌 主要有放射線菌酮 制霉菌素 灰黃霉素 兩性霉素 抗結核分枝桿菌 主要有鏈霉素 新霉素 卡那霉素 巴龍霉素和絲 氨酸等 抗腫瘤 主要有放線菌素D 絲裂菌素c 博來霉素 柔毛霉 阿 霉素 抗病毒與噬菌體 主要有青霉素 四環(huán)類抗生素 艾霉素 抗原蟲 青霉素 紅霉素能抗梅毒螺旋體 四環(huán)類抗生素能抗阿米巴 原蟲 嘌呤霉素 巴龍 抗滴蟲素能抑制原蟲 1 2 1 2 抗生素的作用機制 1 抑制細胞壁合成 主要有磷霉素 環(huán)絲氨酸 桿菌肽 1 3 一內(nèi)酰胺類及萬古霉素 替考拉寧 等 磷霉素抑制有關酶系阻礙N 一乙酰胞壁酸的形成 環(huán)絲氨酸通過抑制D 一丙氨酸的消旋酶和合成酶阻礙了N 一乙酰胞壁酸五肽的形成 從而阻礙胞 漿內(nèi)肽聚糖前體的形成 萬古霉素的作用機制是抑制M N A c 一五肽與脂載體結 合形成直鏈十肽二糖聚合物 桿菌肽的作用機制是能與類脂載體上的十一聚 異戊二烯焦磷酸形成復合物 阻斷二糖五肽與胞壁受體結合 青霉素作用靶 位是胞漿膜上的青霉素結合蛋白 P B P s 表現(xiàn)為抑制轉(zhuǎn)肽酶的轉(zhuǎn)肽作用 從 而阻礙了肽聚糖的交叉聯(lián)接 2 影響細胞膜的通透性 主要包括多肽類抗生素 如多粘菌素B E 多烯類抗生素 如兩性霉 素B 制霉菌素 與吡咯類抗生素 如咪康喹 酮康喹 氟康噢 等 多粘 菌素分子具兩極性 能選擇性地與細菌細胞膜中的磷脂結合 從而影響細胞 膜結構 兩性霉素 制霉菌素等主要與細胞膜上麥角固醇結合 使膜通透性 增加導致菌體內(nèi)的蛋白質(zhì) 核苷酸 氨基酸 糖和鹽類等外漏 從而使細菌 死亡 咪康唑 酮康唑 氟康唑等可抑制真菌細胞膜中固醇類生物合成而影 響其通透性 3 抑制蛋白質(zhì)合成 西南科技大學碩士研究生學位論文第5 頁 屬于此類的抗生素有氨基糖苷類 氯霉素 紅霉素 林可霉素類 四環(huán) 素類及大環(huán)內(nèi)酯類抗生素 氯霉素 林可霉素和大環(huán)內(nèi)酯類抗生素與細菌核 糖體5 0 S 亞基結合 抑制蛋白質(zhì)合成的延長階段 四環(huán)素類抗生素與核糖體 3 0 S 亞基結合 阻止氨基酰t R N A 向3 0 S 亞基的A 位結合 從而抑制蛋白質(zhì)合 成 氨基糖苷類抗生素與3 0 S 亞基結合 抑制蛋白質(zhì)合成的起始及密碼子識 別 4 抑制核酸代謝 屬于此類的藥物有利福霉素 新生霉素 灰黃霉素 喹諾酮類 磺胺類 和抗腫瘤藥物 不同的抗生素通過不同的機制干擾或抑制微生物細胞核酸 D N A 或R N A 的合成 喹諾酮類藥物能抑制D N A 的合成 利福霉素和利福平 直接作用于R N A 聚合酶而抑制R N A 的合成 磺胺類抗生素抑制二氫葉酸合成 酶而妨礙葉酸代謝 最終影響核酸合成 從而抑制細菌的生長和繁殖 5 抑制生物能作用 如抗霉素A 是呼吸鏈電子傳遞體系的抑制劑 能夠抑制電子轉(zhuǎn)移 寡 霉素能阻抑細胞能量代謝中的氧化磷酸化過程 1 2 2 細菌耐藥性研究 隨著抗生素的廣泛運用 在臨床上亦引起了一些問題 如細菌耐藥性逐 年增加致使一些抗生素療效降低 一些不致病的細菌成為條件致病菌等 1 2 2 1 耐藥性產(chǎn)生的方式 1 固有耐藥性 在長期抗生素壓力下通過誘導突變 對抗生素產(chǎn)生了抵抗力 這種耐藥 有種屬特異性 來源于該細菌固有的自然特性 耐藥基因存在于染色體上 非發(fā)酵的一桿菌如綠膿桿菌 醋酸不動桿菌 假單胞菌屬及大多數(shù)一桿菌耐萬 古霉素和甲氧西林 腸球菌耐頭飽菌素 厭氧菌耐氨基糖甙類藥物 銅綠假 單孢菌耐頭孢氨芐 頭孢克洛 頭孢噻肟 頭孢呋辛 四環(huán)素 嗜麥芽窄食 假單孢菌耐泰能 美平等 這些是耐藥性產(chǎn)生的原始遺傳基礎 這種高度固 有耐藥性是由于菌體外膜的通透性低與繼發(fā)的雙重耐藥機制 誘導產(chǎn)生頭孢 菌素酶和抗生素導出泵所致 西南科技大學碩士研究生學位論文第6 頁 2 染色體突變 染色體突變是細菌耐藥性產(chǎn)生的原始遺傳基礎 質(zhì)粒的產(chǎn)生和傳播是細 菌擴散耐藥性 新菌株獲得耐藥性的一種快捷方式 突變可發(fā)生于分子 也 可發(fā)生于質(zhì)粒和轉(zhuǎn)座子的基因上 如質(zhì)粒編碼產(chǎn)生的超廣譜B 一內(nèi)酰胺酶可 能由于和酶基因點突變導致 若酶基因連續(xù)突變可從本質(zhì)上增強酶的活力 使新一代頭孢菌素滅活 某些調(diào)節(jié)區(qū)共同的突變可產(chǎn)生頭孢菌素酶 致對第 三代頭孢菌素耐藥 耐藥質(zhì)粒廣泛存在于G 一 G 菌中 耐藥性質(zhì)?？赏ㄟ^轉(zhuǎn)導 轉(zhuǎn)化 接合 及轉(zhuǎn)座4 種方式進行傳遞或轉(zhuǎn)移 轉(zhuǎn)座現(xiàn)象是細菌耐藥性播散的重要方式 可使耐藥因子增多造成多重耐藥性 帶有多重耐藥基因的質(zhì)粒 從一種微生 物進入另一種微生物 不斷傳給后代還可轉(zhuǎn)移至無此質(zhì)粒的細菌 使敏感菌 變?yōu)槟退幘?耐藥菌株在長期進化過程中可能通過染色體斷裂或缺失 使帶 有耐藥基因的片段脫離形成耐藥性質(zhì)粒 通過質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移和插入堆積 使耐 藥性在不同菌株間傳播 使同一菌株抗菌譜擴大 3 多重耐藥性 細菌耐藥性從對單種藥物耐藥發(fā)展至多種耐藥 即某種細菌對多種作用 機制不同的抗菌藥物產(chǎn)生的耐藥性 耐藥機制是兩個或多種不同的機制相互 作用決定一種細菌對一種抗菌藥物的耐藥水平 如多重耐藥大腸桿菌菌株是 外膜通透性下降與主動外排系統(tǒng)的協(xié)同作用所致高度的耐藥性 1 2 2 2 耐藥機制 細菌的耐藥機制非常復雜 不同的細菌其耐藥機制不同 歸納起來有以 下幾種機制 1 產(chǎn)生滅活酶或鈍化酶 產(chǎn)生滅活酶是引起細菌耐藥性的最重要機制 產(chǎn)酶菌往往表現(xiàn)明顯的耐 藥性 細菌產(chǎn)生的滅活酶有多種 主要有B 一內(nèi)酰胺酶 氨基糖甙滅活酶 乙酰轉(zhuǎn)移酶C A T 核苷酸轉(zhuǎn)移酶 酯酶等通過修飾 它們能通過水解乙酰化 磷酸化等方式破壞抗生素的活性 B 一內(nèi)酰胺酶質(zhì)粒介導或染色體突變使細菌產(chǎn)生6 一內(nèi)酰胺酶 可水 解破壞1 3 一內(nèi)酰胺環(huán) 使B 一內(nèi)酰胺類抗生素滅活 這是大多數(shù)致病菌對此類 抗生素產(chǎn)生耐藥性的主要機制 目前B 一內(nèi)酰胺酶已有2 3 0 余種 包括T E M 系列酶 S H V 系列酶 O X A 系列酶 P S E 系列酶 頭孢菌素酶等 隨著新的 一 西南科技大學碩士研究生學位論文第7 頁 內(nèi)酰胺類抗生素的臨床應用 新的酶類不斷產(chǎn)生 近年報道的E S B L 可能來源 于T E M 和S H Y 酶 由于其固有序列的基因點突變導致的 1 金屬酶 碳青霉稀酶I M P 一1 金屬酶為B u s h 的B 類酶 1 其由染色體 介導 能水解亞胺培南 美羅培南以及大多數(shù)B 一內(nèi)酰胺類藥物 但對氧哌 嗪 青霉素和氨曲南影響較小 不被克拉維酸和他唑巴坦所抑制 氨基糖甙類滅活酶雙功能的氨基糖甙類滅活酶 6 N 氨基糖甙類乙 酰轉(zhuǎn)移酶 2 o 一氨基糖甙類磷酸轉(zhuǎn)移酶 是葡萄球菌和腸球菌高水平耐氨基 糖甙類藥的重要機制 也是不動桿菌對氨基糖甙類耐藥機制 3 此酶在分子 不同的區(qū)域內(nèi)存在二種不同的氨基糖甙改造因子 是由T h 一4 1 0 0 轉(zhuǎn)座子內(nèi) 6 a a c A 一2 0 基因編碼合成 該基因可插入R 質(zhì)粒及氨基糖甙類抗生素染色 體基因中 導致革蘭陽性菌中氨基糖甙類抗藥性的快速傳播 乙酰基轉(zhuǎn)移酶某些細菌 如金黃色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 腸球 菌 肺炎鏈球菌及流感嗜血桿菌等 對氯霉素耐藥性主要是由于質(zhì)粒編碼產(chǎn) 生的乙?；D(zhuǎn)移酶所致 該酶使氯霉素轉(zhuǎn)化為無活性代謝產(chǎn)物 而失去抗菌 活性 拓撲異構酶該酶又稱脫氧核糖核酸旋轉(zhuǎn)酶 由g y r A 和g y r B 編碼 基因的突變引起靶酶脫氧核糖核酸旋轉(zhuǎn)酶的改變 使喹諾酮類藥物失去抑制 此酶的活性 而使細菌獲得耐藥性 氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶某些革蘭陰性桿菌 葡萄球菌 D 組鏈球菌可產(chǎn) 生氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶 使氯霉素失去抗菌活性 紅霉素酯酶和其它滅活酶革蘭陰性桿菌 某些鏈球菌 葡萄球菌可 分離出滅活酶 使大環(huán)內(nèi)酯類 林可霉素等抗菌藥物滅活 2 靶位結構的改變 靶位結構包括靶標蛋白空間結構變化和靶部位組成的變化 細菌在抗生 素作用下產(chǎn)生誘導酶對菌體成分進行化學修飾 使其與抗生素結合的有效部 位變異 使藥物不敏感而細菌本身的生物功能正常 青霉素結合蛋白編碼 的基因突變 青霉素結合蛋白的編碼基因突變致構象改變 與B 一內(nèi)酰胺類 藥物結合降低而耐藥 拓撲異構酶編碼基因突變 編碼促旋酶的 基因及 編碼拓撲異構酶的 基因突變 其表達產(chǎn)物的構象改變即可致細菌對喹諾酮 類耐藥 細菌1 6 S r R N A 基因突變 氨基糖甙類藥物對其失去作用 編碼s 1 2 核糖體蛋白的r p s L 基因及編碼1 6 S r R N A 的r r s 基因的突變 都會使核糖體靶 位點改變 使得細基因突變 紅霉素類藥物對其失去作用 亙寅科技大學碩士研究生學位論文第8 頁 肺炎鏈球菌對青霉素與其它1 3 一內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥機制的根本原因 是青霉素結合蛋白P B P s 的改變 肺炎鏈球菌有6 個P B P s 分子量由4 3 l O O K b 敏感肺炎鏈球菌的P B P l a l b P B P 一2 a 2 x 2 b 都很容易被1 3 一內(nèi)酰胺 類抗生素結合而殺菌 肺炎鏈球菌耐藥株則P B P l a 2 x 2 a 與2 b 這4 個分 子量較大的P B P s 與青霉素的親和力明顯降低 1 鏈霉素耐藥株的細菌核蛋白體3 0 S 亞基上鏈霉素作用靶位P I O 蛋白質(zhì)發(fā) 生改變 利福平的耐藥性是細菌R N A 多聚酶的B 亞基發(fā)生改變 使其與藥物 的結合力降低而耐藥 由質(zhì)粒介導的對林可霉素和紅霉素的耐藥性 系細菌 核蛋白體2 3 S 亞基的腺嘌呤甲基化 使藥物不能與細菌結合所致變 3 膜的通透性改變 藥物長期作用 導致細菌改變了外膜蛋白 使菌體外膜通透性下降 阻 礙抗生素進入細胞內(nèi)膜靶位 外膜通透性降低是由于膜孔蛋白的缺陷 多向 性突變 特異性通道的改變及膜脂質(zhì)雙層的改變所致 常見于假單孢菌 醋 酸不動桿菌 腸球菌等對p 一內(nèi)酰胺類 氨基糖甙類 氯酶素 喹諾酮類抗 生素的耐藥 基因突變也可導致膜的通透性降低 可使能量代謝如電子運受到影響而 減少氨基糖苷類藥物的吸收 也可藥物的轉(zhuǎn)運系統(tǒng)缺損而減少藥物的攝取量 細菌四環(huán)素耐藥主要由于所帶的耐藥質(zhì)粒可誘導產(chǎn)生種新的蛋白 阻塞了細 胞壁水孔 使藥物無法進入有研究表明 細菌對藥物的攝取量與藥物的親水 性或琉水性也有關 4 主動泵出 細菌獲得編碼轉(zhuǎn)運蛋白基因 表達的編碼蛋白能細菌中形成存在主動外 排系統(tǒng)可排出已進入細菌內(nèi)的藥物使抗生素在細菌體內(nèi)的積累減少從而使細 菌獲得耐藥性 這些基因都由質(zhì)粒介導 膜主動外排系統(tǒng)一般由3 部分組成 外膜通道蛋白 融合蛋白和質(zhì)膜外排蛋白 近年來研究表明 在細菌的主動 外排系統(tǒng)主要分為四大類 主要易化超家族 M F S 與哺乳動物的葡萄糖 易化轉(zhuǎn)運器具有同源性 耐藥結節(jié)分化家族 R N D 包括能夠泵出鎘 鈷 和鎳離子的轉(zhuǎn)運蛋白 葡萄球菌多重耐藥家族 由比較小的含有四個跨膜 螺旋的轉(zhuǎn)運器組成 A T P 組合盒轉(zhuǎn)運器 A B C 包括兩個跨膜區(qū)和兩個A T 結合亞單位 藥物代謝轉(zhuǎn)運分子 D M T 家族和M O P M O P 家族 真核細胞 中 除上述個主要超家族外 還存在有機陰離子轉(zhuǎn)運分子 O A T 家族和內(nèi)涵 西南科技大學碩士研究生學位論文第9 頁 體多重藥物轉(zhuǎn)分子 M E T 家族 1 在這些外排泵超家族中 僅僅A B C 超家族 以A T P 解提供能量 其余都以質(zhì)子驅(qū)動力提供能量 D M T 家族以小多重耐藥 轉(zhuǎn)運子 S M R 為代表 M O P 家族以多種抗菌藥排出轉(zhuǎn)運分子 M A T E 為代表 h c r A B T o l C 外排泵系統(tǒng)是大腸埃希菌的最主要多重藥物外排系統(tǒng) 由藥 物質(zhì)子轉(zhuǎn)運子A c r B 周質(zhì)融合蛋白A c r A 和外膜通道蛋白T o l C 組成 在正常 狀況下 A c r A B T o l C 表達有助于大腸埃希菌抵抗腸道的膽鹽 脂肪酸等疏水 性物質(zhì)的入侵 但是A c r A B T o l C 高水平表達表現(xiàn)出對多種化合物的耐受 外排底物包括四環(huán)素 氯霉素 紅霉素 8 一內(nèi)酰胺類 利福平和氟喹諾酮類 等 銅綠假單胞菌主動外排系統(tǒng)主要由3 部分組成 外膜通道蛋白 如 O p r M O p r J 和O p r N 主要形成細胞內(nèi)有害物質(zhì)排出細胞外的通道 融合蛋 白 如M e x A M e x C 和M e x E 內(nèi)膜蛋白 具有主動識別有害物質(zhì)作用 如 M e x B M e x D 和M e x F 在銅綠假單胞菌中至少存在3 類主動外排系統(tǒng) 1 M e x A B O p r M M e x C D O p r J 和M e x E F O p r N 在銅綠假單胞菌膜主動外排系統(tǒng)中 起最主要作用的是M e x A B O p r M 它是銅綠假單胞菌固有多重耐藥性和獲得性 多重耐藥性的主要原因 M e x A B O p r M 主動外排系統(tǒng)所需能量由H 藥物反轉(zhuǎn)運 體逆轉(zhuǎn) r 形成H 濃度差而產(chǎn)生的動力所提供川 5 形成生物被膜 1 細菌生物被膜 B B F 是指細菌粘附于固體或有機腔道表面 形成微菌落 并分泌細胞外多糖蛋白復合物將自身包裹其中而形成的膜狀物 細菌間的多 糖蛋白復合物形成孔道維持細菌物質(zhì)代謝 細菌形成生物被膜后 往往對抗 菌藥物產(chǎn)生耐藥性 其原因有 細菌生物被膜可減少抗菌藥物滲透 吸 附抗菌藥物鈍化酶 促進抗菌藥物水解 細菌生物被膜下細菌代謝低下 對抗菌藥物不敏感 生物被膜的存在阻止了機體對細菌的免疫力 產(chǎn)生免 疫逃逸現(xiàn)象 減弱機體免疫力與抗菌藥物的協(xié)同殺菌作用 生物被膜的阻止?jié)B透作用也不相同 銅綠假單胞菌形成的生物被膜對環(huán) 丙沙星 哌拉西林和過氧化氫的滲透有屏障作用 而氨芐西林和環(huán)丙沙星可 透過肺炎克雷伯菌形成的生物被膜 利福平可透過表葡菌形成的生物被膜 但卻不能殺死膜內(nèi)細菌 提示包埋于被膜中的細菌除了依靠生物被膜的屏障 作用以外 一定存在著其它機制保護膜內(nèi)細菌的生存 6 保護抗生素作用靶位 西南科技大學碩士研究生學位論文第10 頁 核糖體保護蛋白 核糖體保護蛋白 R P P S 由基因編碼 該蛋白能 阻遏四環(huán)素與細菌核糖體結合使藥物失去作用 淋病萘瑟菌 金黃色葡萄球 菌 表皮葡萄球菌 肺炎鏈球菌 李斯特菌 加德納菌均可獲含基因質(zhì)粒而 耐四環(huán)素 紅霉素甲基化酶 當細菌獲得e r m 基因表達紅霉素甲基化酶 使細菌 核糖體2 3 S r R N A 基因甲基化 大環(huán)內(nèi)酯類對細菌失效而耐藥 在肺炎鏈球菌 中發(fā)現(xiàn)有e r m A e r m B 基因 得到e r m 基因的細菌可同時表現(xiàn)為對大環(huán)內(nèi)脂類 一林可霉素一鏈陽菌素B 耐藥 簡稱M S L B 耐藥 獲得功能取代蛋白 酶 金黃色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 溶血葡 萄球菌可獲M E C A 基因 表達P B P 2 蛋白 使B 一內(nèi)酰胺類藥物雖與P B P 2 結合 但P B P 2 仍占具轉(zhuǎn)肽酶活性 仍然可合成細胞壁 連接酶 萬古霉素等糖肽類 可與細菌細胞壁成分一丙胺酰 丙氨酸結合抑制細菌細胞壁肽聚糖的合成 耐 萬古酶素菌株獲得V A N A V A N B V A N C V A N D 與V A N E 基因可表達一組功能相 似的連接酶 即3 D 一丙胺酰一D 一乳酸取代正常的細胞壁肽聚糖成分一丙胺酰一D 一 丙氨酸 一丙胺酰一D 一絲氨酸取代正常胞壁成分 1 2 3 耐藥型金葡球菌的耐藥機制 1 2 3 1P B P 2 a 與相關基因 青霉素結合蛋白 P B P s 由金黃色葡萄球菌自身合成 普通的金黃色葡萄 球菌合成5 種與1 3 一內(nèi)酰胺類抗生素親和力較高的P B P s 包括P B P l P B P 2 P B P 3 P B P 3 c 和P B P 4 P B P s 參與合成細菌細胞壁的轉(zhuǎn)肽酶 羧肽酶和內(nèi)肽 酶 催化糖肽交叉聯(lián)接反應 對細菌的生長繁殖起著極其重要的作用 M R S A 染色體中含有m e c A 基因 能合成一種相對分子質(zhì)量為7 8 X1 0 3 的 與B 一內(nèi)酰胺類抗生素親和力較低的青霉素結合蛋白P B P 2 a P B P 2 c P B P 2 a 蛋白屬高分子量P B P 具有與高親和力P B P s 相同的青霉素結合基序 結合能力卻很低 能在M R S A 中高親和性P B P s 結合B 一內(nèi)酰胺類抗生素失活 后 代替P B P s 維持細菌的生長和存活 從而使M R S A 表現(xiàn)出耐藥性 m e c A 基因的基本調(diào)節(jié)基因為m e a I 和m e c R l 基因 m e c I 基因編碼m e a I 蛋白 后者為抑制因子 D N A 結合蛋白 抑制下游結構基因的表達 當其結 合到m e c A 基因的啟動子上時 抑制m e c A 基因的轉(zhuǎn)錄 從而不能產(chǎn)生P B P 2 a m e c R l 基因編碼的m e c R l 蛋白為誘導因子 當其接觸到誘導劑B 2 內(nèi)酰胺類抗 生素時被活化 活化的m e c R l 蛋白能夠去除m e c I 蛋白對m e a A 基因的阻遏作 用 使m e a A 編碼產(chǎn)生P B P 2 a 蛋白 m e c 序列中含有一個或數(shù)個拷貝的插入 西南科技大學碩士研究生學位論文第 頁 序列I S 4 3 1 I S 2 5 7 在其他耐藥基因的同源重組和轉(zhuǎn)座子整合中起到接受連 接位點的作用 這些其他抗生素及金屬離子抗性 耐藥基因可以通過轉(zhuǎn)座子 作用及質(zhì)粒傳播整合到插入序列外側(cè) 進而表達出來 使M R S A 表現(xiàn)出多重耐 藥性 并且使源于質(zhì)粒的耐藥基因可以穩(wěn)定地遺傳 1 2 3 2 其它基因 f e m 因子 是金黃色葡萄球菌染色體中的固有基因 包括f e m A f e m B e m C f e m D f e m E 和f e m F f e m A 和f e m B 為兩個相連的開放閱讀框?qū)毦?細胞壁的五甘氨酸側(cè)鏈以及肽間橋的生物合成是必需的 當其失活時 金黃 色葡萄球菌細胞壁糖肽中的五甘氨酸肽間橋變成單甘氨酸 并且影響細菌的 多種代謝機制 導致M R S A 對B 2 內(nèi)酰胺酶類抗生素以及多種其他類抗生素的 耐藥性降低 f e m C 引起谷氨酰胺合成酶基因g l n A 轉(zhuǎn)錄和活化及異谷氨酰胺 的酰胺化 其失活時 谷氨酰胺合成受阻 異谷氨酰胺的酰胺化作用降低 導致糖肽的交叉聯(lián)接降低M R S A 對1 3 一內(nèi)酰胺酶類抗生素耐藥性降低 h m r C h m r D 和c h r 基因是染色體突變基因 引起M R S A 對甲氧西林的高 度耐藥 其機制尚未闡明 控制胞壁及胞外蛋白質(zhì)表達的球狀調(diào)節(jié)子a g r 和s a r 任一個發(fā)生失活均可導致小球狀的高水平耐藥M R S A 亞群出現(xiàn) 并使 細菌胞壁中P B P l 和P B P 3 數(shù)量減少 1 2 4 放線菌 放線菌是因菌絲呈放射狀而得名 自從1 8 7 7 年C o h n 從牛的頸腫病中發(fā) 現(xiàn)放線菌以后 直到本世紀4 0 年代初期 放線菌還是未被人們所熟知的一類 微不足道的微生物 當時僅報道了含義不很明確的四五個屬 比較知名的是 對人和動物有致病性的放線菌屬 A c t i n o m y c e t e s 諾卡氏菌屬 N o c a r d i a 和被認為是細菌的分枝桿菌 M y c o b a c t e r i u m 隨著認識的深入 到6 0 年代 放線菌被確認是原核生物 與細菌的關系極為密切 甚至可以包括在廣義的 細菌中 目前 在 伯杰氏系統(tǒng)細菌學手冊 第四卷中 放線菌屬于原核生 物界 厚壁菌門 放線菌綱 放線菌目 A c t i n o m y c e t a l e s 放線菌在自然界的分布極為廣泛 存在于各種不同的自然生態(tài)環(huán)境里 其種類繁多 代謝功能各異 是一類有著廣泛實際用途的生物資源 現(xiàn)在己 發(fā)現(xiàn)的數(shù)萬種微生物來源的生物活性物質(zhì)和l 臨床使用的大約1 0 0 種抗生素 中 約有7 0 是由放線菌所合成的次生代謝產(chǎn)物 放線菌產(chǎn)生的活性物質(zhì)主 要有抗菌物質(zhì)與抗腫瘤物質(zhì) 還包括抗病毒物質(zhì) 抗蟲物質(zhì) 免疫抑制劑 西南科技大學碩士研究生學位論文第12 頁 酶抑制荊 受體拮抗劑 抗氧化劑 多糖 色素以及胞外水解酶 如淀粉酶 幾丁質(zhì)酶 纖維素酶 果膠酶 木聚糖酶和蛋白酶等 近2 0 年來 從普通環(huán)境中的放線菌分離得到的先導化合物的數(shù)量銳減 據(jù)估計 目前分離到的放線菌種類 僅為實際存在種類的0 1 1 0 因此 放線菌還存在著大量的未知種群等待發(fā)現(xiàn) 在這種理論的指導下 各國的科 研人員采用新的分離技術從一些特殊環(huán)境中等發(fā)現(xiàn)能產(chǎn)生新化合物的放線 菌 1 2 4 1 抗真菌活性物質(zhì) K u r o s a w aK 報道 從放線菌 S t r s p e c t a b i l i S 發(fā)酵液中分離的硝苯 吡喃酮 n i t r o p h e n y lp y r o n e S N F4 4 3 5 C D 圖卜1 它們都具有免疫抑 制活性和抗白色念珠菌的作用 來自鏈霉菌S t r s pS N A1 5 8 9 6 的大環(huán)結 構的N e o a n t i m y c i n 類似物S W 一1 6 3A 和B 也具有免疫抑制作用和抗絲狀和 酵母樣真菌的作用 G e r b e r 等從海洋線菌 1 2 3 9 6 中分離得到桔色色素 圖卜2 它有抑制真菌活性 C a p o n 等從維多利亞L o r n e 海岸采集到的海 洋放線菌M S T M A l 9 0 培養(yǎng)液中分離得到芳香氨基酸類化合物l o r n e a m i d e s Aa n dB 活性研究結果顯示L o m e a m i d e sB 圖卜3 對枯草桿菌的L D P 為 5 0 u g m L 具有中等抗菌活性 K i t a m u r a 研究組在海洋鏈霉菌A P 7 7 的培養(yǎng) 液中分離得到一種抗真菌的1 6 0k D 的蛋白質(zhì)S A P 顯示強烈的抗真菌活性 此外 我國焦炳華0 3 3 課題組從中國東海一株嗜鹽的海洋放線菌X D 2 0 菌 株中分離到2 個體生物堿類化合物C P A 和C P B 具有抗真菌和細胞毒活性 崔洪霞 等從膠州灣海洋鏈霉菌M 0 9 5 的代謝產(chǎn)物中獲得一種對絲狀真菌毛 霉m i e h e i T 2 8 4 有顯著抑制作用的化合物 霆l l S N F 4 3 5 c D 圖l 一2 桔色色素 O 圖1 3 L o m e m 避髂B 擴 淵H 吒 C 掣l 畦n母姚 西南科技大學碩士研究生學位論文第13 頁 1 2 4 2 抗細菌活性物質(zhì) A s o l k a rR N 通過抗菌活性跟蹤篩選 從海洋鏈霉菌B 7 0 4 6 得到一大環(huán) 內(nèi)酯類新化合物C a l c o m y c i nB 它對金黃色葡萄球菌的M I C 達到0 3 9 u g m L 對枯草桿菌的M I C 為6 2 5 u g m L 顯示高效的抗菌活性 R i e d l i n g e rJ 等從一 株海洋放線菌V e r r u c o s i s p o r a 中分離到有抗G 及金黃色葡萄球菌的物質(zhì) a b y s s o m i e i nC 圖卜4 廖文彬等從海洋放線菌H S L 6 0 7 1 中分離能產(chǎn)生對 金黃色葡萄球菌有強烈抑制作用的活性物質(zhì) P S u j a t h a 等 蚰從放線菌 B T 一4 0 8 中分離到多肽類抗生素S B R 一2 2 它抗菌譜廣泛 特別對M R S A 有很強的 抑制作用 黃惠琴等 從海南三亞海域的海綿中分離到一株杭M R S A 的海洋放 線菌A 1 1 5 其對8 1 株M R S A 中的6 4 株有明顯的抑制效果 從小單孢菌屬A M l 0 5 發(fā)酵液中分離得到一種新結構的化合物is o r i f a m y c i n S 圖1 5 M I C 結果反 映i s o r i f a m y c i nS 抑菌活性明顯優(yōu)于目前臨床藥物r i f a m y c i nS V 張海濤等 在大連海域潮間帶繁茂膜海綿上分離到一株鏈霉菌B 3 7 它 的代謝產(chǎn)物能夠?qū)Ｒ坏囊种聘锾m氏陽性細菌 金葡菌 此外 C h o 等從一棵 海洋放線菌中分離得到具有抗菌活性的五元環(huán)內(nèi)酯化合物 M i n c e r 等從 一種新放線菌屬海洋單孢菌中分離鑒定出一系列結構新穎的化合物 命名為 S a l i n o s p o r a m i d e s 這些化合物具有很強抗菌活性 d i e t e r 等 從嗜堿放線 菌2 4 0 9 的發(fā)酵液中分離得到了p y r o c o l l 圖卜6 該化合物具有抗菌活性 對不同的A r t h r o b a c t e r 菌株均有較好的抑制作用 為11 1g m L 且對絲狀真 菌也有一定的抑制作用 田1 一 b o 1 n 1 2 4 3 抗腫瘤活性物質(zhì) 鹽屋鏈霉菌S t r e p t o m y c e ss i o y a e n s i s S A 1 7 5 8 是從海底淤泥中分離 到的 該菌株可產(chǎn)生一種結構新穎的生物堿A l t e m i c i n d i n 圖卜7 此化合 西南科技大學碩士研究生學位論文第14 頁 物在體外對腫瘤細胞株L 1 2 1 0 及I M C 肉瘤細胞的I C 分別為0 8 4g m L 和0 8 2g m L 且還有微弱的抗菌活性 但是體內(nèi)毒性較高 L D 為0 3m g k g T a p i o c a s 等人在采集于加利福尼亞海溝的一種珊瑚表面分離到的鏈霉菌的 培養(yǎng)物中發(fā)現(xiàn)了結構新穎的O c t a l a c i o n sA 和B 這兩種化合物分別是 寡霉素A 的2 0 一羥基衍生物和腸菌素的5 一脫氧衍生物 是含有少見的八元環(huán) 的內(nèi)酯官能團的1 9 碳酮基化合物 O c t a l a c i o i l SA 在體外有抗B 1 6 F 1 7 鼠 黑素瘤和H C T 一1 1 6 人胃癌細胞活性 其I c 值分別為0 0 0 7 2g m L 0 5 g m Lg 曾偉等從海洋放線菌N 3 5 0 73 的脂溶性發(fā)酵產(chǎn)物中純化并鑒定了4 個化 合物 分別為反式一1 3 一二十二碳單烯酰胺 7 4 一二羥基異黃酮 6 一甲氧基一7 4 一二羥基異黃酮及B 一胡蘿h 甙 其中 前三中物質(zhì)具有抗腫瘤活性 抑制人 口腔上皮癌K B 細胞生長的I D 分別為1 5 8 l l 5 1 2 u g c m 3 抑制人白血病細 胞H L 一6 0 生長的I D 分別為7 2 1 8 1 1 9I Ig c m 這些化合物均首次在海洋放線 菌中得到分離 S t r e p t o m y c e sa u r e o v e r t i C i l l a t u sN P S 0 0 1 5 8 3 是來自于海底沉積物 的鏈霉菌 它能代謝產(chǎn)生一種2 2 個原子的大環(huán)內(nèi)酰胺A u r e o v e r t i c 訂l a c t a m A u r e o v e r t i c i l l a c t a m 對多種腫瘤細胞有細胞毒性 王健等從黃直絲鏈霉菌 Z 4 0 0 7 發(fā)酵物中分離得到1 個活性化合物卜 2 4 二羥基一3 5 一二甲基 一 2 E 4 E 一己二烯一卜酮 該化合物是一種新的細胞周期抑制劑 該化合物 在高濃度時將小鼠乳腺癌t s F T 2 1 0 細胞分裂周期抑制在G G 期 而在低濃度 時則抑制在G M 期并顯示出一定的細胞凋亡誘導活性 s t r e p t o m y c e s n o d o s u sN P S 0 0 7 9 9 4 是從加尼福利亞的海底沉積物中分離到的一株放線菌 它 產(chǎn)生的L a j o l l a m y c i n 對腫瘤細胞B 1 6 一F I O 有抑制作用 他還對藥敏型及耐 藥型革蘭氏陽性菌有抑制作用 T h i o v i r i d a m i d e 是橄欖綠鏈霉菌產(chǎn)生的 類細胞凋亡誘