（內(nèi)科學(xué)專業(yè)論文）ima、hfabp檢測在急性心肌梗死早期診斷中的應(yīng)用研究.pdf

目錄 中文摘要1 英文摘要4 研究論文i m a 、h f a b p 檢測在急性心肌梗死早期診斷中的應(yīng)用 研究 前言9 9日i j 吾 材料與方法9 結(jié)果14鄉(xiāng)口木 附圖1 7 附表1 9 討論2 2 結(jié)論：2 9 參考文獻2 9 綜述i m a 、h f a b p 在急性心肌梗死早期診斷中的研究進展3 4 致謝4 2 個人簡歷4 3 1 冬 一 中文摘要 i m a 、h f a b p 檢測在急性心肌梗死早期診斷中 的應(yīng)用研究 摘要 背景：急性心肌梗死( a c u t em y o c a r d i a li n f a r c ti o n ，a m i ) 是嚴(yán)重威 脅人類健康的疾病之一，近年來，其發(fā)病率及死亡率逐年上升，且有越來 越年輕化的趨勢。由于a m i 發(fā)病急、病情變化塊、臨床危險性大，越來越 引起臨床的廣泛關(guān)注。靜脈溶栓藥物的更新、冠狀動脈介入技術(shù)的廣泛應(yīng) 用和介入器械及技術(shù)的進步，使得a m i 的治療有了一個飛躍式的發(fā)展。但 是，不管是靜脈溶栓還是經(jīng)皮冠狀動脈成形術(shù)( p e r c u t a n e o u sc o r o n a r y i n t e r v e n t i o n ，p c i ) ，在挽救缺血壞死心肌方面都有很強的時間依賴性， 因此，如何早期、快速、準(zhǔn)確地診斷a m i ，縮短患者從發(fā)病到恢復(fù)冠脈血 流的時間成為臨床普遍關(guān)注的重要課題。在臨床實踐中，許多a m i 患者臨 床癥狀不典型，a m i 患者心電圖的陽性檢出率僅有2 3 左右，廣泛應(yīng)用于 a m i 診斷的生化標(biāo)志物肌酸激酶同工酶( m y o c a r d i a 卜b o u n dc r e a t i n e k i n a s e ，c k m b ) 和心肌肌鈣蛋白( c a r d i a ct r o p o n i n ，c t n ) 血清含量在發(fā) 病4 - - 6 小時后才升高，明顯滯后于對心肌進行再灌注治療時間窗的需求。 最近研究發(fā)現(xiàn)，血清缺血修飾白蛋白( is c h e m i am o d i f i e da l b u m i n ， i m a ) 和心肌型脂肪酸結(jié)合蛋白( h e a r t t y p ef a t t ya c i d b i n d i n g p r o t e i n ，h f a b p ) 是反映心肌缺血損傷的早期敏感標(biāo)志物。二者對a m i 早期均具有非常重要的診斷和預(yù)測價值。 目的： 本研究試圖通過探討i m a 、h - f a b p 檢測在急性心肌梗死早期診斷中的 意義，為指導(dǎo)臨床早期快速識別a m i 提供簡便可行的依據(jù)，達到早期診斷、 減少漏診、改善預(yù)后、降低死亡率的目的。 方法： 隨機選擇發(fā)病6 小時以內(nèi)以急性胸痛就診的疑似a m i 患者8 3 例，對 所有納入人群常規(guī)行1 2 導(dǎo)聯(lián)心電圖檢查，用雙抗夾心免疫熒光法定量檢 測肌紅蛋白( m y o g l o b i n ，m y o ) 、肌酸激酶同工酶( c k m b ) 、肌鈣蛋白i ( c t n i ) 含量。i m a 含量檢測利用白蛋白一鈷結(jié)合試驗( a l b u m i nc o b a l t b i n d i n gt e s t ，a c b ) 原理間接測定，血清h f a b p 的定量采用雙抗體夾心 中文摘要 酶聯(lián)免疫吸附一試驗( e n z y m e1i n k e di m m u n o s o r b e n ta s s a y ，e l i s a ) 原理 進行測量。設(shè)立健康對照組，探討i m a 和h - f a b p 在急性心肌梗死早期( 發(fā) 病6 小時內(nèi)) 的診斷效能。并與傳統(tǒng)的心肌標(biāo)志物m y o 、c k m b 、c t n i 進 行比較。 結(jié)果： i 入選的8 3 例研究對象按最終出院診斷分為a m i 組3 2 例，男女比 例1 8 1 4 ，年齡3 0 - - - 8 0 歲，平均年齡( 6 1 8 1 1 4 ) 歲。非a m i 組5 1 例， 其中不穩(wěn)定型心絞痛( u a p ) 者3 3 例，男女比例1 7 1 6 ，年齡4 2 8 4 歲， 平均年齡( 6 3 2 1 1 2 ) 歲。非心源性胸痛1 8 例，男女比例1 0 8 ，年齡 4 3 8 1 歲，平均年齡( 6 4 9 l o 5 ) 歲。健康對照組4 0 例，男女比例2 3 1 7 ， 年齡4 1 - - 一7 9 歲，平均年齡( 6 1 0 l o 8 ) 歲； 2a m i 組平均a c b 值為5 4 9 1 3 3u m l ，健康對照組為7 1 4 4 5 u m l ，不穩(wěn)定心絞痛( u a p ) 組為5 8 1 1 0 8u m l ，非心源性胸痛( n c c p ) 組為7 1 8 3 7u m l 。a m i 組與n c c p 組、a m i 組與健康對照組、u a p 組與 n c c p 組、u a p 組與健康對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義( 檢驗水準(zhǔn) c t = o 0 0 8 ，p o 0 5 ) ； 3 依據(jù)a m i 組與正常對照組所測a c b 值繪制的r o c 曲線，曲線下面積 ( a u c ) 為0 9 11 ( 9 5 c i ：0 8 3 9 0 9 8 3 ) ，分析所得i m a 診斷急性心肌 梗死的最佳截斷值為6 7 0 8u m l ； 4i m a 診斷發(fā)病6 小時以內(nèi)a m i 的敏感度、特異度、陰性預(yù)測值及 準(zhǔn)確率分別為8 1 2 5 、4 7 0 6 、8 0 、6 0 2 4 。其敏感度和陰性預(yù)測 值明顯高于傳統(tǒng)心肌標(biāo)志物m y o 、c k - m b 和c t n i ，比較差異具有統(tǒng)計學(xué) 意義( p 0 0 5 ) ； 5 各組h f a b p 血清平均濃度分別為：a m i 組為2 3 5 6 7 n g m l 、u a p 組7 2 2 6 n g m l 、n c c p 組3 9 1 8n g m l 、健康對照組4 6 1 9n g m l 。 a m i 組與n c c p 組、a m i 組與健康對照組、a m i 組與u a p 組、u ap 組與n c c p 組、u a p 組與健康對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義( 檢驗水準(zhǔn)q = o 0 0 8 ，p 0 0 5 ) ； 6 依據(jù)a m i 組與正常對照組所測h - f a b p 濃度定量值繪制的r o c 曲線， 2 中文摘要 曲線下面積( a u c ) 為0 9 5 4 ( 9 5 c i ：0 9 1 2 - 0 9 9 7 ) ，分析所得h f a b p 診斷急性心肌梗死的最佳截斷值為6 6 5 n g m l ； 7h - f a b p 診斷發(fā)病6 小時以內(nèi)a m i 的敏感度、特異度、陰性預(yù)測值 及準(zhǔn)確率分別為9 0 2 6 、8 0 3 9 、9 3 1 8 、8 4 3 4 。與傳統(tǒng)心肌標(biāo) 志物m y o 、c k - m b 和c t n l 比較，敏感度、陰性預(yù)測值及準(zhǔn)確率明顯高于 傳統(tǒng)心肌標(biāo)志物，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義( p 0 0 5 ) ； 8 若采用并聯(lián)的方法i m a 與h - f a b p 聯(lián)合應(yīng)用，診斷發(fā)病6 小時以內(nèi) a m i 的敏感度可達到9 8 2 4 。 結(jié)論： 1 缺血修飾白蛋白( i m a ) 對發(fā)病早期的a m i 和非心源性胸痛病人有很 好的鑒別診斷價值，對a m i 病人的早期檢出較傳統(tǒng)的心肌標(biāo)志物具有更高 的敏感度，是診斷心肌缺血的早期敏感標(biāo)記物，但對a m i 和u a p 沒有鑒別 診斷價值； 2 心肌脂肪酸結(jié)合蛋白( h f a b p ) 對發(fā)病早期的a m i 與a m i 疑似病人 ( 包括u a p 病人) 有很好的鑒別診斷價值，對a m i 的早期識別，較傳統(tǒng)的 心肌損傷標(biāo)志物具有更好的診斷預(yù)測價值，是診斷心肌壞死的早期敏感標(biāo) 志物 3i m a + h - f a b p 聯(lián)合可明顯提高對a m i 的診斷和鑒別診斷價值。 關(guān)鍵詞：急性心肌梗死；缺血修飾白蛋白；心型脂肪酸結(jié)合蛋白；肌 紅蛋白；肌鈣蛋白 英文摘要 t h es t u d y0 fi m aa n dh f a b pi nt h ed i a g n o s i so fa c u t e 一一 一一一一一 m y o c a r d i a li n f a r c t i o nw i t h i ne a r l ys t a g e a b s t r a c t b a c k g r o u n d ：a c u t em y o c a r d i a li n f a r c t i o n ( 伽沮) i so n e o ft h em o s t h a r m f u ld i s e a s e st h r e a t e n i n gh u m a nh e a l t h i nr e c e n ty e a r s ，t h ei n c i d e n c ea n d d e a t hr a t eo fa m ia r er i s i n gy e a ra f t e ry e a r m o r ea n dm o r ey o u n gp e o p l ea r e s u f f e r i n gf r o ma m i a sar e s u l t o ft h ef a s to n s e t ，r a p i dc h a n g ea n dm a j o r c l i n i c a lr i s k s ，a m ih a sd r a w nm o r ea n dm o r ea t t e n t i o no ft h ec l i n i c s w i t h u p d a t eo fi n t r a v e n o u st h r o m b o l y s i sd r u g ，w i d ed e v e l o p m e n to fi n t e r v e n e t e c h n i q u e s o fc l i n i c a l c o r o n a r ya r t e r y a n dt h ep r o g r e s so fi n t e r v e n e e q u i p m e n t s ，a m it h e r a p yh a sm a d eg r e a tp r o g r e s s b u t ，t h e i n t r a v e n o u s t h r o m b o l y s i s a n d p e r c u t a n e o u sc o r o n a r ya n g i o p l a s t y ( p c i ) a r e b o t h t i m e d e p e n d e n t i n r e s c u i n gp a t i e n t s f r o mi s c h e m i am y o c a r d i a ln e c r o s i s t h e r e f o r e ，h o wt om a k et h ed i a g n o s i so fa m ie a r l y , r a p i d l ya n da c c u r a t e l yi s a ni m p o r t a n ts u b je c tc o n c e m e db yc l i n i c i nc l i n i c a lp r a c t i c e ，t h es y m p t o m so f m a n ya m ip a t i e n t sa r ea t y p i c a l t h ep o s i t i v er a t eo fe c g i so n l y2 3 t h e b i o c h e m i c a lm a r k e r ss u c ha sm y o c a r d i a l - b o u n dc r e a t i n ek i n a s e ( c k m b ) a n d c a r d i a ct r o p o n i n ( c t n ) a r eu s e dw i d e l yi na m id i a g n o s i s ，b u tt h e i rp l a s m a c o n c e n t r a t i o n sb e g i nt oi n c r e a s ej u s tf r o m4 - 6h o u r sa f t e ro n s e t i to b v i o u s l y l a g sb e h i n dt h en e e do fm y o c a r d i a lr e p e r f u s i o nt h e r a p yt i m e w i n d o w r e c e n tr e s e a r c h e ss h o w e dt h a ti s c h e m i am o d i f i e da l b u m i n ( i m a ) a n d h e a r t t y p ef a t t ya c i d b i n d i n gp r o t e i n ( h f a b p ) a r ee a r l ys e n s i t i v em a r k e r s r e f l e c t i n gt h em y o c a r d i a li n j u r y t h e ya r eb o t hv e r yi m p o r t a n t i nd i a g n o s i sa n d p r e d i c t i o no fa m i a te a r l ys t a g e o b j e c t i v e ：t h ep u r p o s eo ft h i ss t u d yi s t op r o v i d ec l i n i cs i m p l i f i e da n d f e a s i b l ee v i d e n c et od i s t i n g u i s ha m i p a t i e n t sf r o ms u s p e c t e da m ip a t i e n t si n t h ee a r l yp h a s et h r o u g hd i s c u s s i o no ft h er o l eo fi m aa n dh f a b pi na m i d i a g n o s i s t h i ss t u d yi st oa c h i e v et h ep u r p o s eo fe a r l yd i a g n o s i s ，d e c r e a s i n g m i s d i a g n o s i s ，i m p r o v i n gp r o g n o s i sa n dr e d u c i n gd e a t hr a t e m e t h o d s ：w es e l e c t e d8 3p a t i e n t sr a n d o m l y ( f i n a l l y3 2p a t i e n t sw e r e 4 英文摘要 d i a g n o s e d a c u t em y o c a r d i a li n f a r c t i o n ) w h ow e r es u s p e c t e da c u t em y o c a r d i a l i n f a r c t i o na ta d m i s s i o nw i t h i n6h o u r sa f t e ro n s e to fc h e s tp a i n a l lp a t i e n t s u n d e r w e n ts t a n d a r d12 1 e a de c gw eu s e di m m u no fl u o r e s c e n c e d o u b l e a n t i b o d ys a n d w i c hq u a n t i t a t i v et om e a s u r et h em y o g l o b i n ( m y o ) ， c r e a t i n ek i n a s e ( c k m b ) ，t r o p o n i ni ( c t n i ) c o n t e n t t h ep l a s m al e v e lo fi m a w a sm e a s u r e db ya l b u m i nc o b a l tb i n d i n gt e s t ( a c b ) i n d i r e c t l y t h ep l a s m a l e v e lo fh f a b pw a sm e a s u r e db ye n z y m el i n k e di m m u n o s o r b e n ta s s a y ( e l i s a ) ah e a l t h yc o n t r a s tg r o u pi s e s t a b l i s h e dt od i s c u s st h ed i a g n o s i s e f f e c t i v e n e s so fi m aa n dh - f a b pi np a t i e n t sw h ow e r ea c u t em y o c a r d ia l i n f a r c t i o n ( o n s e tw i t h i n6 h ) ，a n dt oc o m p a r ew i t ht h et r a d i t i o n a lm a r k e r ss u c h a sm y o ，c k m ba n dc t n i r e s u l t s ： 1t h e8 3p a t i e n t sw e r ec l a s s i f i e db yd i s c h a r g ed i a g n o s e s ，3 2p a t i e n t s w e r ec l a s s i f i e di n t oa m i g r o u p ，t h er a t i oo f m a l ea n df e m a l ew a s18 14 ，r a n g e 3o 8 0y e a r so l d ，t h ea v e r a g ea g eo ft h es u b j e c t sw a s ( 61 8 + 11 4 ) y e a r so l d 51 p a t i e n t s w e r ec l a s s i f i e di n t on o n - a m ig r o u p ，3 3p a t i e n t so fw h i c hh a d u n s t a b l e a n g i n ap e c t o r i s ( u a pg r o u p ) ：t h er a t i o o fm a l ea n df e m a l ew a s 17 16 ，r a n g e4 2 8 4y e a r so l d ，t h ea v e r a g ea g eo ft h e s u b j e c t sw a s ( 6 3 2 4 - 11 2 ) y e a r so l d ，a n d18p a t i e n t sh a dn o n c a r d i a cc h e s tp a i n ( n c c p g r o u p ) ：t h er a t i oo fm a l ea n df e m a l ew a s10 8 ，r a n g e4 3 - - 。81y e a r so l d ，t h e a v e r a g ea g eo f t h es u b j e c t sw a s ( 6 4 9 4 - 10 5 ) y e a r so l d 4 0h e a l t h ya d u l t sw e r e r e c r u i t e da sc o n t r o lg r o u p ，t h er a t i oo fm a l ea n df e m a l ew a s2 3 17 ，r a n g e41 7 9y e a r so l d ，t h ea v e r a g ea g eo ft h es u b j e c t sw a s ( 61 0 4 - 10 8 ) y e a r so l d 2t h ea v e r a g eo fa c bi na m ig r o u pw a s5 4 94 - 13 3u m l ，h e a l t h y c o n t r o lg r o u pw a s71 44 - 4 5u m l ，u n s t a b l ea n g i n ap e c t o r i s ( u a p ) g r o u pw a s 5 8 14 - 1 0 8u m l ，n o n c a r d i a cc h e s tp a i n ( n c c p ) g r o u pw a s7 1 84 - 3 7u m 1 t h e r ea r ec o m p a r a t i v e d i f f e r e n c e sw i t has t a t i s t i c a ls i g n i f i c a n c eb e t w e e nt h e g r o u p so f a m ia n dn c c p , a m ia n d h e a l t h yp e r s o n s ，a m a n du a p , u a p a n d n c c p , u a pa n dh e a l t h yp e r s o n s ( t e s tl e v e lq - o 0 0 8 ，p 5 英文摘要 o 0 5 ) 3a c c o r d i n gt ot h er o cc u r v ed r a w n b ya c b v a l u e so fa m i g r o u pa n d c o n t r o lg r o u p ，t h ea r e au n d e rt h ec u r v e ( a u c ) w a so 9 1 1 ( 9 5 c i ：o 8 3 9 0 9 8 3 ) ，t h eo p t i m u mc u t o f fp o i n tf o ra m il e v e l si nt h i si m a d i a g n o s t i cw a sf o u n dt ob e6 7 0 8u m 1 4t h es e n s i t i v i t y , s p e c i f i c i t y , n e g a t i v ep r e d i c t i v ev a l u ea n da c c u r a c yo f a m id i a g n o s e db yi m aw i t h i n6h o u r sw e r e8 1 2 5 ，4 7 0 6 ，8 0 a n d 6 0 2 4 r e s p e c t i v e l y t h es e n s i t i v i t y a n dn e g a t i v ep r e d i c t i v ev a l u ew a s o b v i o u s l yh i g h e rt h a nt h et r a d i t i o n a lc a r d i a cm a r k e r sm y o ，c k m ba n dc t n i ， t h ed i f f e r e n c ew a ss t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t ( p 6 4 7 u m l 2 3 2h f a b p 實驗操作 2 3 2 1 檢測前一天，把檢測血清從一8 6 低溫冰箱中取出，放入4 冰箱中 自然解凍。檢測當(dāng)天，把檢測血清、試劑盒從4 c 冰箱中取出，放室溫平 衡3 0 分鐘。把解凍的血清放入離心機中2 0 0 0 轉(zhuǎn)分鐘離心5 分鐘，備查。 2 3 2 2 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：將l m l 樣品稀釋液加到u 型標(biāo)準(zhǔn)品試管內(nèi)，充分混 勻，以此標(biāo)準(zhǔn)管為基準(zhǔn)管，濃度為2 0 n g m l ，在此基礎(chǔ)上進一步作倍比稀 釋，操作步驟見下表，稀釋完成后，基準(zhǔn)、# l 、# 2 、# 3 、# 4 、# 5 號 管對應(yīng)的濃度依次為2 0n g m l 、1 0n g m l 、5n g m l 、2 5n g m l 、1 2 5n g m l 、 0 6 2 5n g m l 、0 3 1 2 5 n g m l 。 步驟稀釋液 濃度n g m l 基準(zhǔn)管 l m l2 0 # l基準(zhǔn)管吸2 5 0 u l2 5 0 u l1 0 # 2從# 1 吸2 5 0 u l 2 5 0 u l 5 # 3從# 2 吸2 5 0 u l2 5 0 u l2 5 # 4從# 3 吸2 5 0 u l 2 5 0 u l1 2 5 # 5從# 4 吸2 5 0 u l2 5 0 u l0 6 2 5 # 6從# 5 吸2 5 0 u l 2 5 0 u lo 3 1 2 5 2 3 2 3 將1 1 8 8 m l 的稀釋液加入1 2 0 u l 的h - f a b p 抗體中，充分混勻待用。 研究論文 將11 9 4 m l 的稀釋液加入6 0 u lh r p 酶中，充分混勻待用。加8 0 u l 血清到 2 4 0 u l 樣品稀釋液中，檢測血清做l ：4 稀釋，充分混勻待用。5 0 u l 濃縮 沈液加4 5 0 u l 蒸餾水稀釋，配成標(biāo)準(zhǔn)洗滌液待用。 2 3 2 4 在9 6 孔微量反應(yīng)板中，加入試劑對照標(biāo)準(zhǔn)品，以及檢測標(biāo)本，在 a 1 、a 2 孔加入樣品稀釋液l o o u l ，作為樣品稀釋液對照， 2 3 2 5 用塑料貼膜封板，把微量反應(yīng)板在振蕩器上8 0 0 分鐘2 小時，于 室溫勻混。 2 3 2 6 洗板：首先吸干微量反應(yīng)孔中的液體，在每孔中，分別加入3 5 0 u l 洗滌液充分混勻，吸干，重復(fù)5 次。洗滌完成后，微量反應(yīng)孔中沒有液體 殘留。加入相應(yīng)抗體，每孔均加入稀釋完成的h f a b p 抗體l o o u l ，用塑料 貼膜封板，把微量反應(yīng)板在振蕩器上8 0 0 分鐘2 小時，于室溫勻混。 2 3 2 7 加入相應(yīng)酶，每孔均加入稀釋完成的h r p 酶l o o u l ，用塑料貼膜封 板，把微量反應(yīng)板在振蕩器上8 0 0 分鐘l 小時，于室溫勻混。 2 3 2 8 加入相應(yīng)底物，每孔加入t m b 底物l o o u l ，用塑料貼膜封板，把微 量反應(yīng)板在振蕩器上8 0 0 分鐘勻混2 0 分鐘。 2 3 2 9 加入終止液，每孔加入0 2m m o l l 的h 2 s o 。l o o u l ，選擇4 5 0 n m 的 濾光片，6 2 0 n m 為干擾濾光片，3 0 分鐘內(nèi)讀取吸光度值。 2 3 2 1 0 以標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值繪標(biāo)準(zhǔn)曲線。按照“4 5 0 n m 處吸光度濃度： 線性對數(shù) 的原則建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1 所示。樣本濃度通過相應(yīng)的吸 光度經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線換算得來。 2 4 統(tǒng)計學(xué)處理 定量資料用均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差中位數(shù)表示，多組間均數(shù)的多重比較采用 k r u s k a l w a l l i s 秩和檢驗。調(diào)整后的顯著性水準(zhǔn)q = o 0 0 8 ，p 1 0 7 n g m l 為陽性。c k m b 4 3 n g m l 為陽性。c t n i 1 o n g m l 為陽性。各標(biāo)志物檢測陽性及陰性例數(shù)見表6 。采用診斷實驗四 格表法分別計算i m a 、h f a b p 、m y o 、c k 一船和c t n l 的敏感性、特異性、 陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值及準(zhǔn)確性，具體見附表7 。 敏感性( s e n s i t i v i t y ，s e ) = 真陽性( 真陽性+ 假陰性) 1 0 0 ，理想的敏感性為 1 0 0 ，敏感度越高的診斷性實驗，漏診率越低。 特異性( s p e c i f i c ，s p ) - - - - 真陰性( 真陰性+ 假陽性) 1 0 0 ，理想的特異度為 1 0 0 ，特異度越高的診斷性實驗，誤診率越低。 研究論文 陽性預(yù)測值( p o s i t i v ep r e d i c t i v ev a l u e ，+ p v ) = 真陽性( 真陽性+ 假陽性) 1 0 0 ，指所有陽性結(jié)果中真陽性的百分比。 陰性預(yù)測值( n e g t i v ep r e d i c t i v ev a l u e ，一p v ) = 真陰性( 真