梅毒實驗室診斷.ppt

梅毒感染現(xiàn)狀與實驗室診斷,梅毒流行與防治介紹梅毒的實驗室檢測,全國梅毒流行現(xiàn)狀,中國預(yù)防與控制梅毒規(guī)劃（2010-2020年）,先天梅毒,梅毒,MSM人群梅毒和HIV感染率,宜昌地區(qū)梅毒螺旋體感染情況,宜昌地區(qū)梅毒感染情況總結(jié),梅毒感染呈現(xiàn)逐年增多趨勢女性多于男性年齡分布主要集中在20-40歲之間梅毒患者多來自門診，但不自覺的現(xiàn)癥感染者逐漸增加。,梅毒預(yù)防與控制措施,廣泛開展宣傳教育，普及梅毒防治知識開展綜合防治，阻斷梅毒傳播提高監(jiān)測檢測質(zhì)量，開展主動檢測，促進梅毒早期發(fā)現(xiàn)提供規(guī)范化梅毒醫(yī)療服務(wù)預(yù)防和控制先天梅毒加強國際合作和應(yīng)用性研究,中國預(yù)防與控制梅毒規(guī)劃（2010-2020年）,到2015年底實現(xiàn)以下目標(biāo)梅毒預(yù)防和診療服務(wù)專業(yè)人員相關(guān)知識和技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)掌握合格率達到85%；孕產(chǎn)期保健人員預(yù)防梅毒母嬰傳播相關(guān)知識和技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)掌握合格率達到80%。到2020年底實現(xiàn)以下目標(biāo)梅毒預(yù)防和診療服務(wù)專業(yè)人員相關(guān)知識和技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)掌握合格率達到100%；孕產(chǎn)期保健人員預(yù)防梅毒母嬰傳播相關(guān)知識和技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)掌握合格率達到90%。,篩查與檢測,制定和下發(fā)梅毒實驗室檢測規(guī)范梅毒檢測三級實驗室網(wǎng)絡(luò)建立性病門診的梅毒主動篩查HIV咨詢檢測服務(wù)中納入梅毒篩查醫(yī)療機構(gòu)主動提供的HIV檢測咨詢中的梅毒檢測社區(qū)藥物維持治療門診中的梅毒檢測孕產(chǎn)婦梅毒篩查高危人群外展服務(wù)中的梅毒檢測,梅毒流行與防治介紹梅毒的實驗室檢測,梅毒病原體,小而纖細的螺旋狀微生物長520m，粗細2年），但妊娠時仍可傳染給胎兒病期越長，傳染性越小;輸血傳染,梅毒的診斷,梅毒的診斷早期梅毒（一期、二期和早期隱性梅毒）和晚期梅毒（三期和晚期隱性梅毒）必須依靠病史、癥狀及實驗檢查進行綜合分析梅毒的實驗室檢查結(jié)果對診斷有決定性意義,常用梅毒實驗室檢測方法,病原學(xué)檢測血清學(xué)檢測,病原學(xué)檢查,取材方法一期、二期梅毒時，取硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損部位組織液或淋巴結(jié)穿刺術(shù)得到的組織液暗視野顯微鏡、鍍銀染色法和直接熒光法在暗視野顯微鏡下，光線從聚光器的邊緣斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發(fā)出亮光，從而可根據(jù)其特殊形態(tài)和運動方式進行檢測。,病原學(xué)檢查的臨床意義,病原學(xué)方法直接鏡檢到梅毒螺旋體，在臨床可確診梅毒，且具有快速、方便、易操作的特點。螺旋體檢查是診斷早期現(xiàn)癥梅毒的最佳方法，對于患者的早期診斷、及時治療、預(yù)后和盡早切斷傳染源都有十分重要的意義。如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性。,梅毒血清學(xué)檢測方法,問題,Q1：實驗室診斷梅毒的兩類血清學(xué)檢測方法是什么？Q2：為什么需要這兩類血清學(xué)檢測方法？,梅毒血清學(xué)檢測分類,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗（非特異性梅毒抗體）梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗（特異性梅毒抗體）,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗,原理（抗心磷脂抗體）：人體感染了梅毒螺旋體后，組織受到破壞，釋放出來的一種類脂成分，與梅毒螺旋體結(jié)合形成完全抗原，刺激機體產(chǎn)生類脂質(zhì)抗體（反應(yīng)素）。主要是IgM和IgG混合抗體。,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗,抗體產(chǎn)生時間感染3周-4周，硬下疳出現(xiàn)1周-2周一般在感染后57周（或硬下疳出現(xiàn)后23周）產(chǎn)生。（郭紅亮，中外健康文摘2010年第20期）抗體作用無保護作用，治療監(jiān)測。未經(jīng)治療的病人，其血清內(nèi)的反應(yīng)素可長期存在。經(jīng)正規(guī)治療后，反應(yīng)素可以逐漸減少至轉(zhuǎn)為陰性。Q3：臨床上非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗為什么有定性和定量兩種檢測方法,原理和方法,反應(yīng)原理抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物，凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼所見抗原基本成分心磷脂、卵磷脂和膽固醇方法包括：快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(RPR)不加熱血清反應(yīng)素(USR)甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）性病研究實驗室試驗(VDRL)等。,試驗特點,原理和成分與試驗相同血清不需要滅活不需要顯微鏡觀測結(jié)果可作定量試驗有現(xiàn)成的試劑盒攜帶方便操作簡單價格便宜,RPR/TRUST檢測流程,試驗前期準(zhǔn)備RPR儀(水平旋轉(zhuǎn)儀器)必須滴！試劑50l移液器、吸頭記號筆、廢物缸工作服一次性手套、口罩、帽子生物安全柜,梅毒自動旋轉(zhuǎn)儀,檢測流程,操作步驟：將檢測試劑盒從冰箱中取出，室溫放置30分鐘。測RPR自動旋轉(zhuǎn)儀轉(zhuǎn)速。在RPR紙卡上編上相應(yīng)的待檢樣本的編號。,測速:100轉(zhuǎn)/MIN（2轉(zhuǎn)）,測旋轉(zhuǎn)幅度:19mm,檢測流程（定性）,加樣：吸取50l血清（漿）放在卡片圈中，并均勻地涂布在整個圈內(nèi)。加抗原：將抗原輕輕搖勻，用試劑盒提供的針頭加1滴抗原。反應(yīng)：將卡片置梅毒自動旋轉(zhuǎn)儀8分鐘立即在亮光下觀察結(jié)果。,檢測流程（定量）,稀釋液準(zhǔn)備：在圈內(nèi)加入50l生理鹽水（根據(jù)需要確定稀釋度），勿將鹽水涂開。加樣：吸取50l血清(漿)與各圈中鹽水作系列稀釋，并涂布滿整個圈內(nèi)。重復(fù)定性試驗后兩步。,臨床意義,早期梅毒（一期、二期）經(jīng)足量規(guī)則抗梅毒治療后3個月，VDRL試驗抗體滴度下降2個稀釋度，6個月下降4個稀釋度。一期梅毒1年后轉(zhuǎn)為陰性二期梅毒2年后轉(zhuǎn)為陰性。晚期梅毒治療后血清滴度下降緩慢，2年后約50%病人血清反應(yīng)仍為陽性。,臨床意義,早期梅毒硬下疳出現(xiàn)1周-2周后，血清可呈陽性?！靖腥?7周（或硬下疳出現(xiàn)后23周）】經(jīng)治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征。,假陽性問題,假陽性：非梅毒患者的血清反應(yīng)呈陽性技術(shù)性假陽性由于標(biāo)本的保存不當(dāng)（如細胞污染或溶血）、試劑質(zhì)量差或過期、或?qū)嶒炇也僮麇e誤所造成。生物學(xué)假陽性是由于患者有其他疾病或生理狀態(tài)發(fā)生變化，使梅毒血清試驗出現(xiàn)陽性,急性生物學(xué)假陽性反應(yīng)的疾病,風(fēng)疹水痘傳染性單核細胞增多癥傳染性肝炎上呼吸道感染肺炎球菌性肺炎病毒性肺炎牛痘疹,慢性生物學(xué)假陽性反應(yīng)的疾病,系統(tǒng)性紅斑狼瘡自身免疫性溶血性貧血盤狀紅斑狼瘡結(jié)節(jié)性多動脈炎類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎橋本氏甲狀腺炎,風(fēng)濕性心臟病干燥綜合征毒品癮者慢性腎炎肝硬化老年麻風(fēng)(是唯一產(chǎn)生慢性生物學(xué)假陽性的感染性疾病),妊娠的假陽性反應(yīng),這是一種生理情況下的生物學(xué)假陽性假陽性發(fā)生率較低有報告為0.4%，滴度低。,假陽性問題,梅毒假陽性反應(yīng)的處理技術(shù)性假陽性反應(yīng)一般是由于操作錯誤引起的假陽性反應(yīng)，經(jīng)過重復(fù)試驗即可除外。對急性生物學(xué)假陽性反應(yīng)，應(yīng)做TPHA（TPPA）等試驗進行排除。,前帶現(xiàn)象,原理指二期梅毒患者非梅毒螺旋體抗原血清試驗中，有時血清中存在高濃度的抗體時出現(xiàn)的弱陽性、不典型或陰性反應(yīng)的結(jié)果。處理將血清稀釋后再進行試驗。,血清固定,耐血清性（血清固定）指經(jīng)抗梅毒治療后，非梅毒螺旋體抗原血清試驗在一定時期內(nèi)不陰轉(zhuǎn)。早期的耐血清性常與治療量不足或不規(guī)則治療、復(fù)發(fā)、再感染或有神經(jīng)系統(tǒng)梅毒等因素有關(guān)。,梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗,試驗原理,檢測血中特異性抗梅毒螺旋體特異蛋白為抗原的抗體（IgG和IgM）。特異性IgM型抗梅毒螺旋體抗體，感染2周后即可測出。Q3：梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗的定量試驗在梅毒診療中有意義嗎？,實驗方法,梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(TPPA)梅毒螺旋體血球凝集試驗(TPHA)梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測(RT)熒光螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS）化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（WB）,TPPA/TPHA,TPPA試驗原理與TPHA試驗基本相同TPPA試驗用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒TPHA試驗中梅毒螺旋體致敏羊紅細胞特點梅毒螺旋體全抗原,TPPA原理示意圖,熒光螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS）,原理將有完整形態(tài)的梅毒螺旋體作為抗原，加上經(jīng)吸收劑（用Reiter螺旋體制備而成）吸收過的梅毒患者血清形成抗原抗體復(fù)合物，再加入熒光素（FTIC）標(biāo)記的抗人免疫球蛋白，與抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，形成熒光的抗原抗體復(fù)合物。在熒光顯微鏡下，螺旋體顯出蘋果綠色的熒光，即為陽性反應(yīng)。曾經(jīng)認(rèn)為FTA-ABS試驗是檢測梅毒的“金標(biāo)準(zhǔn)”試驗。,TP-ELISA,原理用重組梅毒螺旋體抗原包被固相板條，加上梅毒血清和單克隆抗體酶標(biāo)記物，形成抗原抗體復(fù)合物與酶標(biāo)記物結(jié)合，用酶聯(lián)檢測儀判定試驗陽性反應(yīng)。特點本法可用于大規(guī)模血清檢測。,免疫層析,臨床應(yīng)用,梅毒螺旋體試驗的作用是作為證實試驗它們可以幫助確定非梅毒螺旋體試驗陽性反應(yīng)是真陽性還是假陽性。一旦這些試驗呈陽性，則患者終身陽性。,方法特點,特異性強，敏感性高很少出現(xiàn)假陽性。據(jù)統(tǒng)計，在普通人群中，有1%的生物學(xué)假陽性發(fā)生。如系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清可使FTA-ABS試驗呈假陽性反應(yīng)，但大多數(shù)病例中螺旋體呈串株狀熒光。傳染性單核細胞增多癥，可能由于嗜異性抗體所致，可使TPHA呈假陽性。麻風(fēng)患者也可使特異試驗呈陽性。,臨床意義,作為RPR初篩陽性標(biāo)本的確證試驗。不能作為療效觀察的指標(biāo)。陽性不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應(yīng)結(jié)合RPR結(jié)果進行診斷。,假陽性問題,存在交叉反應(yīng)的抗體處理方法：用Reiter株吸收血清中交叉反應(yīng)的抗體。,老年人抗體陽性的問題,1、真陽性2、假陽性：這些老年患者所患的基礎(chǔ)疾病可能使機體釋放誘導(dǎo)產(chǎn)生抗類脂抗體和/或抗T.pallidum抗體的交叉抗原；,梅毒血清學(xué)試驗結(jié)果解釋,梅毒血清學(xué)試驗結(jié)果的臨床意義,RPR結(jié)果解釋示意圖,陽性陰性,TPPA結(jié)果解釋示意圖,陽性陰性,梅毒血清學(xué)試驗適用范圍,梅毒檢測策略與流程,梅毒檢測技術(shù)規(guī)范,非梅毒螺旋體抗原血清試驗：RPR、TRUST、VDRL梅毒螺旋體抗原血清試驗：TPPA、TPHA、TP-ELISA、RT、FTA-ABS、CLIA、梅毒IgM抗體檢測、WB,策略一采用任何一種非梅毒螺旋體抗原血清試驗對樣品進行初篩,策略二采用任何一種梅毒螺旋體抗原血清試驗對樣品進行初篩,以臨床診斷為目的檢測策略一,以臨床診斷為目的檢測策略二,梅毒實驗室檢測策略思考（1）,梅毒實驗室檢測策略思考（2）,？初篩目的和方法選擇敏感性、特異性（試劑評估）操作流程（可及性）試劑的價格、結(jié)果時間（可接收性）,策略一和策略二比較,2010年梅毒螺旋體抗原血清學(xué)檢測試劑評估結(jié)果,2010年非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)檢測試劑評估結(jié)果,小結(jié),1、非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗陽性往往是梅毒現(xiàn)癥感染者，臨床上即可開展治療。2、定量試驗可作為療效觀察的指標(biāo)。3、特異性：假陽性反應(yīng)。4、敏感性：約1%-2%的二期梅毒病人可以出現(xiàn)因為抗體過量引起的前帶反應(yīng)現(xiàn)象導(dǎo)致結(jié)果假陰性。5、可作為梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗的確診試驗。,小結(jié),盡早完善操作的標(biāo)準(zhǔn)化，杜絕有個人特點的操作。對于只做TRUST檢測的患者要注意：定性：陰性，TP-ELISA陽性的稀釋定量