動(dòng)態(tài)觀察柴胡皂苷a對(duì)實(shí)驗(yàn)性癲癇小鼠癇性發(fā)作的影響.doc

動(dòng)態(tài)觀察柴胡皂苷a對(duì)實(shí)驗(yàn)性癲癇小鼠癇性發(fā)作的影響【關(guān)鍵詞】柴胡皂苷摘要:目的研究柴胡皂苷a(saikosaponina,SSa)對(duì)戊四氮（PTZ）誘導(dǎo)的小鼠癇性發(fā)作的影響，了解其藥效特點(diǎn)。方法采用PTZ誘導(dǎo)小鼠急性癇性發(fā)作來(lái)制作癲癇模型，通過(guò)記錄不同時(shí)間點(diǎn)小鼠癇性發(fā)作潛伏期和強(qiáng)直性驚厥率的變化，研究SSa抗小鼠PTZ致癇作用的動(dòng)態(tài)特征。結(jié)果SSa腹腔注射30、60、90min組能顯著延長(zhǎng)陣發(fā)性痙攣潛伏期（P<；0.05），其中SSa90min組作用最為顯著（P<；001）。在60、90、120min組中，SSa腹腔注射也能明顯延長(zhǎng)強(qiáng)直性驚厥潛伏期（P<；0.05），其中尤以90min組作用顯著(P<；001)；SSa90min組對(duì)過(guò)渡時(shí)間延長(zhǎng)作用顯著（P<；0.05）；SSa30min、60min組能減少PTZ致癇小鼠強(qiáng)直性驚厥發(fā)作例數(shù)（P<；005），且以SSa60min組作用最為顯著。結(jié)論SSa具有對(duì)抗小鼠PTZ致癇作用；腹腔注射SSa對(duì)PTZ誘導(dǎo)小鼠的癇性發(fā)作在120min內(nèi)以60min、90min藥效作用較強(qiáng)。關(guān)鍵詞:實(shí)驗(yàn)性癲癇；柴胡皂苷a；PTZ；小鼠Abstract:ObjectiveTostudythedynamicvariationsoftheeffectofsaikosaponina(SSa)onepilepticmiceinducedbypentylenetetrazol（PTZ）,andtounderstandtheeffectcharacteristicsofSSa.MethodWiththeepilepticmiceinducedbyPTZasanimalmodel.Inthedifferenttimepoint,thetentativeseizureincubationperiodandthecaseoftetanicconvulsionwererecordedtostudythecharacteristicsoftheantiepilepticeffectofSSaonmouseinducedbyPTZ.ResultsInthegroupof30min,60minand90min,theincubationperiodofcloniccrampwassignificantlyprolongedbySSa(P<；0.05),andinthegroupof90min,theeffectwasremarkable(P<；0.01).Also,intraperitonealinjectionofSSacouldprolongtheincubationperiodoftetanicconvulsioninthegroupof60min,90minand120min(P<；0.05).Theeffectwasespeciallyevidentinthegroupof90min(P<；0.01).Inthegroupof90min,thetransitiontimewasremarkablyprolongedbySSa(P<；0.05).InthegroupofSSa30minandSSa60min,SSacouldreducethetetanicconvulsionofepilepticmiceintroducedbyPTZ(P<；0.05),andtheeffectismoresignificantinthegroupof60minthanthatinthegroupof30min.Inthegroupof30minand60min,SSacouldprotecttheepilepticmiceintroducedbyPTZfromtetanicconvulsionmoresignificantlythanthoseinthegroupof90minand120min.ConclusionsSSacaninhibittheepilepticmiceinducedbyPTZ,SSacanprotectthemousefromtetanicconvulsion,andin2hours,theeffectwasmoreremarkableat60thmin,90thminthanothers.Keywords:epilepsy；Saikosaponina；PTZ；mice柴胡皂苷（saikosaponin）為中藥柴胡的主要成分之一，其單體成分之一的柴胡皂苷a(SSa)有降血脂、抗?jié)B出、抗肉芽腫和保護(hù)肝細(xì)胞等作用1，對(duì)于慢性腎病的治療也有較好療效2，3，但目前尚沒(méi)有SSa抗癲癇作用的報(bào)道。不過(guò)已有不少證據(jù)表明柴胡及柴胡總皂苷具有鎮(zhèn)靜和抗實(shí)驗(yàn)性癲癇的作用4，5。在柴胡皂苷單體各成分中，為明確何種皂苷單體具有抗癲癇作用，筆者研究了SSa對(duì)PTZ致癇小鼠癇性發(fā)作的影響，并探討SSa對(duì)癇性發(fā)作影響的不同時(shí)間的動(dòng)態(tài)變化，以期了解SSa抗癲癇藥效作用的時(shí)間特點(diǎn)。1材料1.1動(dòng)物健康昆明種小鼠180只，雌雄各半，體質(zhì)量（202）g,由南方醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證號(hào)為2004A063。1.2主要試劑柴胡皂苷a購(gòu)自上海醫(yī)藥工業(yè)研究所，批號(hào)050106；丙戊酸鈉（VPA）注射劑（德巴金）由杭州賽諾菲圣德拉保民生制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)0402049。戊四氮由美國(guó)Sigma公司生產(chǎn)，批號(hào)064k0686。2實(shí)驗(yàn)方法2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組將180只昆明小鼠隨機(jī)分為9組，每組20只，雌雄各半。A組:生理鹽水組（生理鹽水+PTZ致癇），作為以下各組的對(duì)照組；B、C、D、E組分別為經(jīng)SSa預(yù)處理30、60、90、120min組（SSa30min、SSa60min、SSa90min、SSa120min+PTZ致癇）；F、G、H、I組分別為經(jīng)VPA預(yù)處理30、60、90、120min組(VPA30min、VPA60min、VPA90min、VPA120min+PTZ致癇)。2.2模型制備及給藥方法A組小鼠在腹腔內(nèi)注射生理鹽水（10mL/kg）后30min時(shí)腹腔注射PTZ（85mg/kg）致癇；B、C、D、E組小鼠分別在腹腔注射SSa（7.24mg/kg）后30、60、90、120min時(shí)腹腔注射上述劑量的PTZ致癇；F、G、H、I組小鼠分別在腹腔注射VPA(200mg/kg)后30、60、90、120min時(shí)腹腔注射上述劑量的PTZ致癇。2.3觀察指標(biāo)小鼠癇性發(fā)作分級(jí)采用Racine標(biāo)準(zhǔn)4。0級(jí)：無(wú)發(fā)作反應(yīng)；1級(jí)：節(jié)律性口角、耳或面部肌肉抽動(dòng)陣攣；2級(jí)：點(diǎn)頭并伴隨更嚴(yán)重的面部肌肉抽動(dòng)陣攣；3級(jí):出現(xiàn)前肢陣攣但不伴隨直立；4級(jí)：前肢陣攣伴隨直立；5級(jí)：全身強(qiáng)直陣攣發(fā)作而跌倒。腹腔注射PTZ后立即觀察小鼠的行為動(dòng)作，連續(xù)10min，記錄小鼠癇性發(fā)作潛伏期，包括陣發(fā)性痙攣潛伏期（即從注射PTZ開始至相當(dāng)于13級(jí)發(fā)作的時(shí)間）、強(qiáng)直性驚厥潛伏期（即從注射PTZ開始至相當(dāng)于5級(jí)發(fā)作的時(shí)間），計(jì)算由陣發(fā)性痙攣向強(qiáng)直性驚厥發(fā)作的過(guò)渡時(shí)間；并記錄發(fā)生強(qiáng)直性驚厥的例數(shù)，計(jì)算其發(fā)作率。2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS10.0軟件，多樣本均數(shù)的比較采用方差分析，計(jì)數(shù)資料及率的比較用卡方檢驗(yàn)，以P<；005為差異有顯著性。3結(jié)果3.1SSa對(duì)PTZ致癇小鼠癇性發(fā)作潛伏期的動(dòng)態(tài)影響將對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)SSa預(yù)處理、VPA預(yù)處理組與生理鹽水組比較，B、C、D、F、G、H各組陣發(fā)性痙攣潛伏期明顯延長(zhǎng)，與A組比較差異有顯著性（P<；0.05），其中尤以D、F、G組差異顯著（P<；0.01）；C、D、E、F、H組強(qiáng)直性驚厥潛伏期同樣延長(zhǎng)，與A組比較差異有顯著性（P<；0.05），其中尤以D、F組差異顯著(P<；001)；在過(guò)渡時(shí)間的比較中，D、F組與A組比較差異均有顯著性（P<；0.05），其中尤以F組差異顯著(P<；0.01)。將對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的SSa組與VPA組比較，30min時(shí)SSa組對(duì)各潛伏期的延長(zhǎng)作用不如VPA組(P<；001)，其余各時(shí)間點(diǎn)比較差異無(wú)顯著性。見(jiàn)表1。以上結(jié)果提示，SSa不僅能明顯延長(zhǎng)陣發(fā)性痙攣潛伏期，而且能夠顯著延長(zhǎng)強(qiáng)直性驚厥潛伏期及其過(guò)渡時(shí)間，其作用在60min、90min時(shí)強(qiáng)于30min、120min時(shí)，而VPA的作用以30min和60min強(qiáng)于90min與120min，可見(jiàn)SSa達(dá)到最佳作用的時(shí)間比VPA延后。表1SSa對(duì)PTZ致癇小鼠癇性發(fā)作潛伏期的動(dòng)態(tài)影響（略）3.2SSa對(duì)PTZ致癇小鼠強(qiáng)直性驚厥發(fā)作例數(shù)的動(dòng)態(tài)影響根據(jù)小鼠10min內(nèi)在PTZ誘導(dǎo)下出現(xiàn)強(qiáng)直性驚厥的例數(shù)，將對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)SSa預(yù)處理組、VPA預(yù)處理組與生理鹽水組比較，SSa與VPA預(yù)處理30min、60min組出現(xiàn)強(qiáng)直性驚厥例數(shù)與生理鹽水組比較差異有顯著性，其作用優(yōu)于90min、120min組。見(jiàn)表2。表2SSa對(duì)PTZ致癇小鼠強(qiáng)直性驚厥發(fā)作例數(shù)的動(dòng)態(tài)影響（略）4討論P(yáng)TZ為很強(qiáng)的致癇劑，其致癇模型被認(rèn)為是理想的全身強(qiáng)直性驚厥發(fā)作模型之一,PTZ本身無(wú)特殊的神經(jīng)毒性作用6,所以被廣泛應(yīng)用于癲癇發(fā)病機(jī)理的研究、抗癲癇藥物的篩選。當(dāng)PTZ誘發(fā)小鼠癲癇發(fā)生時(shí)，其癇性發(fā)作的特點(diǎn)是初期以陣攣性發(fā)作為主，很快以全身強(qiáng)直性驚厥發(fā)作為主要特點(diǎn)，根據(jù)其發(fā)作特點(diǎn)，在本研究中以這2種發(fā)作形式為指標(biāo)并結(jié)合目前公認(rèn)的Racine標(biāo)準(zhǔn)來(lái)分析其癇性行為。VPA是臨床常用抗癲癇的主要藥物之一，有廣譜抗癲癇作用，對(duì)單純失神發(fā)作及全身強(qiáng)直陣攣(驚厥)發(fā)作療效最好，對(duì)單純及復(fù)雜部分性發(fā)作、肌陣攣性發(fā)作等也有良效。有文獻(xiàn)研究VPA在大鼠血清和腦脊液濃度變化時(shí)發(fā)現(xiàn)，腦脊液內(nèi)最高藥物濃度低于血清濃度，且其達(dá)到最高藥物濃度時(shí)間遲于血清藥物最高濃度，其半衰期約為60min7。本研究也證實(shí)VPA既能延長(zhǎng)陣發(fā)性痙攣、強(qiáng)直性驚厥的潛伏期，也能抑制強(qiáng)直性驚厥發(fā)作率，明顯減少驚厥發(fā)生例數(shù)，其作用以30min和60min時(shí)尤為明顯，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。本研究結(jié)果顯示，SSa不僅能明顯延長(zhǎng)小鼠陣發(fā)性痙攣的潛伏期，而且能夠顯著延長(zhǎng)強(qiáng)直性驚厥的潛伏期及其過(guò)渡時(shí)間，能明顯減少小鼠發(fā)生強(qiáng)直性驚厥的例數(shù)，抑制驚厥發(fā)作率，其作用在60min、90min時(shí)較強(qiáng)。提示SSa具有較好的抗實(shí)驗(yàn)性癲癇作用，可能對(duì)肌陣攣性發(fā)作、全身強(qiáng)直陣攣發(fā)作有效。就本研究給出的劑量而言，30min時(shí)SSa對(duì)小鼠各潛伏期的延長(zhǎng)作用不如VPA，但隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，SSa在60min、90min時(shí)對(duì)潛伏期的延長(zhǎng)明顯，可能與SSa的起效作用較慢有關(guān)。至于SSa的代謝特點(diǎn)，有研究顯示其口服代謝時(shí)與消化道的菌群有密切關(guān)系8，其代謝呈現(xiàn)時(shí)間依賴性，早期有學(xué)者將其在體外胃液及腸道細(xì)菌共同培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)SSa在3h內(nèi)完全被代謝，而轉(zhuǎn)化為其他類型的皂苷或苷元9。但SSa在血清及腦脊液中的變化情況如何，其代謝與藥效作用是否相關(guān)，以及SSa能否在更長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)維持其作用，還有待進(jìn)一步研究。參考文獻(xiàn):1歐明，林勵(lì)，李衍文.簡(jiǎn)明中藥成分手冊(cè)M.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2003：318.2張相年,張相波.柴胡皂苷的生理活性及在治療腎病中的應(yīng)用J.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào),2000,16(2):121.3HATTORIT,ITOM,SUZUKIY.Studiesonantinephriticeffectsofplantcomponentsinrats(1)：effectsofsaikosaponinsoriginaltypeantiGBMnephritisinratsanditsmechanismsJ.NipponYakurigakuZasshi，1991,97(1):13.4李靜，謝煒，陳寶田.柴胡對(duì)實(shí)驗(yàn)性癲癇大鼠的治療作用J.中藥藥理與臨床,2000,16：28.5黃運(yùn)生，謝煒，陳寶田.柴胡皂苷對(duì)癲癇大鼠腦電圖影響J.第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2004,24(12)：1379.6HOLMESGL.SeizureinducedneuronalinjuryanimaldataJ