動態(tài)觀察柴胡皂苷a對實驗性癲癇小鼠癇性發(fā)作的影響.doc

動態(tài)觀察柴胡皂苷a對實驗性癲癇小鼠癇性發(fā)作的影響【關(guān)鍵詞】柴胡皂苷摘要:目的研究柴胡皂苷a(saikosaponina,SSa)對戊四氮（PTZ）誘導的小鼠癇性發(fā)作的影響，了解其藥效特點。方法采用PTZ誘導小鼠急性癇性發(fā)作來制作癲癇模型，通過記錄不同時間點小鼠癇性發(fā)作潛伏期和強直性驚厥率的變化，研究SSa抗小鼠PTZ致癇作用的動態(tài)特征。結(jié)果SSa腹腔注射30、60、90min組能顯著延長陣發(fā)性痙攣潛伏期（P<；0.05），其中SSa90min組作用最為顯著（P<；001）。在60、90、120min組中，SSa腹腔注射也能明顯延長強直性驚厥潛伏期（P<；0.05），其中尤以90min組作用顯著(P<；001)；SSa90min組對過渡時間延長作用顯著（P<；0.05）；SSa30min、60min組能減少PTZ致癇小鼠強直性驚厥發(fā)作例數(shù)（P<；005），且以SSa60min組作用最為顯著。結(jié)論SSa具有對抗小鼠PTZ致癇作用；腹腔注射SSa對PTZ誘導小鼠的癇性發(fā)作在120min內(nèi)以60min、90min藥效作用較強。關(guān)鍵詞:實驗性癲癇；柴胡皂苷a；PTZ；小鼠Abstract:ObjectiveTostudythedynamicvariationsoftheeffectofsaikosaponina(SSa)onepilepticmiceinducedbypentylenetetrazol（PTZ）,andtounderstandtheeffectcharacteristicsofSSa.MethodWiththeepilepticmiceinducedbyPTZasanimalmodel.Inthedifferenttimepoint,thetentativeseizureincubationperiodandthecaseoftetanicconvulsionwererecordedtostudythecharacteristicsoftheantiepilepticeffectofSSaonmouseinducedbyPTZ.ResultsInthegroupof30min,60minand90min,theincubationperiodofcloniccrampwassignificantlyprolongedbySSa(P<；0.05),andinthegroupof90min,theeffectwasremarkable(P<；0.01).Also,intraperitonealinjectionofSSacouldprolongtheincubationperiodoftetanicconvulsioninthegroupof60min,90minand120min(P<；0.05).Theeffectwasespeciallyevidentinthegroupof90min(P<；0.01).Inthegroupof90min,thetransitiontimewasremarkablyprolongedbySSa(P<；0.05).InthegroupofSSa30minandSSa60min,SSacouldreducethetetanicconvulsionofepilepticmiceintroducedbyPTZ(P<；0.05),andtheeffectismoresignificantinthegroupof60minthanthatinthegroupof30min.Inthegroupof30minand60min,SSacouldprotecttheepilepticmiceintroducedbyPTZfromtetanicconvulsionmoresignificantlythanthoseinthegroupof90minand120min.ConclusionsSSacaninhibittheepilepticmiceinducedbyPTZ,SSacanprotectthemousefromtetanicconvulsion,andin2hours,theeffectwasmoreremarkableat60thmin,90thminthanothers.Keywords:epilepsy；Saikosaponina；PTZ；mice柴胡皂苷（saikosaponin）為中藥柴胡的主要成分之一，其單體成分之一的柴胡皂苷a(SSa)有降血脂、抗?jié)B出、抗肉芽腫和保護肝細胞等作用1，對于慢性腎病的治療也有較好療效2，3，但目前尚沒有SSa抗癲癇作用的報道。不過已有不少證據(jù)表明柴胡及柴胡總皂苷具有鎮(zhèn)靜和抗實驗性癲癇的作用4，5。在柴胡皂苷單體各成分中，為明確何種皂苷單體具有抗癲癇作用，筆者研究了SSa對PTZ致癇小鼠癇性發(fā)作的影響，并探討SSa對癇性發(fā)作影響的不同時間的動態(tài)變化，以期了解SSa抗癲癇藥效作用的時間特點。1材料1.1動物健康昆明種小鼠180只，雌雄各半，體質(zhì)量（202）g,由南方醫(yī)科大學動物實驗中心提供，合格證號為2004A063。1.2主要試劑柴胡皂苷a購自上海醫(yī)藥工業(yè)研究所，批號050106；丙戊酸鈉（VPA）注射劑（德巴金）由杭州賽諾菲圣德拉保民生制藥有限公司生產(chǎn)，批號0402049。戊四氮由美國Sigma公司生產(chǎn)，批號064k0686。2實驗方法2.1實驗動物分組將180只昆明小鼠隨機分為9組，每組20只，雌雄各半。A組:生理鹽水組（生理鹽水+PTZ致癇），作為以下各組的對照組；B、C、D、E組分別為經(jīng)SSa預處理30、60、90、120min組（SSa30min、SSa60min、SSa90min、SSa120min+PTZ致癇）；F、G、H、I組分別為經(jīng)VPA預處理30、60、90、120min組(VPA30min、VPA60min、VPA90min、VPA120min+PTZ致癇)。2.2模型制備及給藥方法A組小鼠在腹腔內(nèi)注射生理鹽水（10mL/kg）后30min時腹腔注射PTZ（85mg/kg）致癇；B、C、D、E組小鼠分別在腹腔注射SSa（7.24mg/kg）后30、60、90、120min時腹腔注射上述劑量的PTZ致癇；F、G、H、I組小鼠分別在腹腔注射VPA(200mg/kg)后30、60、90、120min時腹腔注射上述劑量的PTZ致癇。2.3觀察指標小鼠癇性發(fā)作分級采用Racine標準4。0級：無發(fā)作反應；1級：節(jié)律性口角、耳或面部肌肉抽動陣攣；2級：點頭并伴隨更嚴重的面部肌肉抽動陣攣；3級:出現(xiàn)前肢陣攣但不伴隨直立；4級：前肢陣攣伴隨直立；5級：全身強直陣攣發(fā)作而跌倒。腹腔注射PTZ后立即觀察小鼠的行為動作，連續(xù)10min，記錄小鼠癇性發(fā)作潛伏期，包括陣發(fā)性痙攣潛伏期（即從注射PTZ開始至相當于13級發(fā)作的時間）、強直性驚厥潛伏期（即從注射PTZ開始至相當于5級發(fā)作的時間），計算由陣發(fā)性痙攣向強直性驚厥發(fā)作的過渡時間；并記錄發(fā)生強直性驚厥的例數(shù)，計算其發(fā)作率。2.4統(tǒng)計學處理應用SPSS10.0軟件，多樣本均數(shù)的比較采用方差分析，計數(shù)資料及率的比較用卡方檢驗，以P<；005為差異有顯著性。3結(jié)果3.1SSa對PTZ致癇小鼠癇性發(fā)作潛伏期的動態(tài)影響將對應時間點SSa預處理、VPA預處理組與生理鹽水組比較，B、C、D、F、G、H各組陣發(fā)性痙攣潛伏期明顯延長，與A組比較差異有顯著性（P<；0.05），其中尤以D、F、G組差異顯著（P<；0.01）；C、D、E、F、H組強直性驚厥潛伏期同樣延長，與A組比較差異有顯著性（P<；0.05），其中尤以D、F組差異顯著(P<；001)；在過渡時間的比較中，D、F組與A組比較差異均有顯著性（P<；0.05），其中尤以F組差異顯著(P<；0.01)。將對應時間點的SSa組與VPA組比較，30min時SSa組對各潛伏期的延長作用不如VPA組(P<；001)，其余各時間點比較差異無顯著性。見表1。以上結(jié)果提示，SSa不僅能明顯延長陣發(fā)性痙攣潛伏期，而且能夠顯著延長強直性驚厥潛伏期及其過渡時間，其作用在60min、90min時強于30min、120min時，而VPA的作用以30min和60min強于90min與120min，可見SSa達到最佳作用的時間比VPA延后。表1SSa對PTZ致癇小鼠癇性發(fā)作潛伏期的動態(tài)影響（略）3.2SSa對PTZ致癇小鼠強直性驚厥發(fā)作例數(shù)的動態(tài)影響根據(jù)小鼠10min內(nèi)在PTZ誘導下出現(xiàn)強直性驚厥的例數(shù)，將對應時間點SSa預處理組、VPA預處理組與生理鹽水組比較，SSa與VPA預處理30min、60min組出現(xiàn)強直性驚厥例數(shù)與生理鹽水組比較差異有顯著性，其作用優(yōu)于90min、120min組。見表2。表2SSa對PTZ致癇小鼠強直性驚厥發(fā)作例數(shù)的動態(tài)影響（略）4討論PTZ為很強的致癇劑，其致癇模型被認為是理想的全身強直性驚厥發(fā)作模型之一,PTZ本身無特殊的神經(jīng)毒性作用6,所以被廣泛應用于癲癇發(fā)病機理的研究、抗癲癇藥物的篩選。當PTZ誘發(fā)小鼠癲癇發(fā)生時，其癇性發(fā)作的特點是初期以陣攣性發(fā)作為主，很快以全身強直性驚厥發(fā)作為主要特點，根據(jù)其發(fā)作特點，在本研究中以這2種發(fā)作形式為指標并結(jié)合目前公認的Racine標準來分析其癇性行為。VPA是臨床常用抗癲癇的主要藥物之一，有廣譜抗癲癇作用，對單純失神發(fā)作及全身強直陣攣(驚厥)發(fā)作療效最好，對單純及復雜部分性發(fā)作、肌陣攣性發(fā)作等也有良效。有文獻研究VPA在大鼠血清和腦脊液濃度變化時發(fā)現(xiàn)，腦脊液內(nèi)最高藥物濃度低于血清濃度，且其達到最高藥物濃度時間遲于血清藥物最高濃度，其半衰期約為60min7。本研究也證實VPA既能延長陣發(fā)性痙攣、強直性驚厥的潛伏期，也能抑制強直性驚厥發(fā)作率，明顯減少驚厥發(fā)生例數(shù)，其作用以30min和60min時尤為明顯，與文獻報道一致。本研究結(jié)果顯示，SSa不僅能明顯延長小鼠陣發(fā)性痙攣的潛伏期，而且能夠顯著延長強直性驚厥的潛伏期及其過渡時間，能明顯減少小鼠發(fā)生強直性驚厥的例數(shù)，抑制驚厥發(fā)作率，其作用在60min、90min時較強。提示SSa具有較好的抗實驗性癲癇作用，可能對肌陣攣性發(fā)作、全身強直陣攣發(fā)作有效。就本研究給出的劑量而言，30min時SSa對小鼠各潛伏期的延長作用不如VPA，但隨著時間的延長，SSa在60min、90min時對潛伏期的延長明顯，可能與SSa的起效作用較慢有關(guān)。至于SSa的代謝特點，有研究顯示其口服代謝時與消化道的菌群有密切關(guān)系8，其代謝呈現(xiàn)時間依賴性，早期有學者將其在體外胃液及腸道細菌共同培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)SSa在3h內(nèi)完全被代謝，而轉(zhuǎn)化為其他類型的皂苷或苷元9。但SSa在血清及腦脊液中的變化情況如何，其代謝與藥效作用是否相關(guān)，以及SSa能否在更長的時間內(nèi)維持其作用，還有待進一步研究。參考文獻:1歐明，林勵，李衍文.簡明中藥成分手冊M.北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2003：318.2張相年,張相波.柴胡皂苷的生理活性及在治療腎病中的應用J.廣東藥學院學報,2000,16(2):121.3HATTORIT,ITOM,SUZUKIY.Studiesonantinephriticeffectsofplantcomponentsinrats(1)：effectsofsaikosaponinsoriginaltypeantiGBMnephritisinratsanditsmechanismsJ.NipponYakurigakuZasshi，1991,97(1):13.4李靜，謝煒，陳寶田.柴胡對實驗性癲癇大鼠的治療作用J.中藥藥理與臨床,2000,16：28.5黃運生，謝煒，陳寶田.柴胡皂苷對癲癇大鼠腦電圖影響J.第一軍醫(yī)大學學報,2004,24(12)：1379.6HOLMESGL.SeizureinducedneuronalinjuryanimaldataJ