RNA的瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)原理和步驟

1、精選文庫RNA的瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)原理和步驟關(guān)鍵詞： RNA 瓊脂糖 電泳 2012-03-09 00:00 來源：互聯(lián)網(wǎng) 點(diǎn)擊次數(shù)：38148 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆罩参锟俁NA非變性膠電泳的原理和方法。二、實(shí)驗(yàn)原理RNA電泳可以在變性及非變性兩種條件下進(jìn)行。非變性電泳使用1.0%-1.4%的凝膠，不同的RNA條帶也能分開，但無法判斷其分子量。只有在完全變性的條件下，RNA的泳動(dòng)率才與分子量的對(duì)數(shù)呈線性關(guān)系。因此要測(cè)定RNA分子量時(shí)，一定要用變性凝膠。在需快速檢測(cè)所提總RNA樣品完整性時(shí)，配制普通的1%瓊脂糖凝膠即可。三、實(shí)驗(yàn)材料、器具及藥品蘑菇的總RNA溶液。 電泳儀，電泳槽，電子天平，移液器，

2、槍頭，微波爐，紫外透射檢測(cè)儀等。 瓊脂糖，1XTAE電泳緩沖液，0.5g/ml溴化乙錠（EB）10X載樣緩沖液。四、實(shí)驗(yàn)步驟（1）用1TAE電泳緩沖液制作瓊脂糖凝膠，加1TAE電泳緩沖液至液面覆蓋凝膠。（2）在超凈工作臺(tái)上，用移液器吸取總RNA樣品4l于封口膜上。在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上再加入5l 1TAE電泳緩沖液及1l 的10X載樣緩沖液，混勻后，小心加入點(diǎn)樣孔。（3）打開電源開關(guān)，調(diào)節(jié)電壓至100V，使RNA由負(fù)極向正極電泳，約30min后將凝膠放入EB染液中染色5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射檢測(cè)儀上觀察RNA電泳結(jié)果。RNA的變性瓊脂糖凝膠檢測(cè)試劑：（1）MOPS緩沖液（10*）:0.4mol

3、/L 嗎啉代丙烷磺酸（MOPS） (Ph7.0)，0.1mol/L NaAc, 10mol/L EDTA。（2）上樣染料：50%甘油，1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚藍(lán)，0.4%二甲苯藍(lán)。（3）甲醛。（4）去離子甲酰胺。v電泳槽清洗：去污劑洗干凈（一般浸泡過夜）水沖洗乙醇干燥3%H2O2灌滿室溫放置10分鐘0.1%DEPC水沖洗。操作：（1） 將制膠用具用70%乙醇沖冼一遍，晾干備用。（2） 配制瓊脂糖凝膠。稱取0.5g瓊脂糖，置干凈的100ml 錐形瓶中，加入40ml蒸餾水，微波爐內(nèi)加熱使瓊脂糖徹底溶化均勻。待膠涼至60-70 ，依次向其中加入9ml 甲醛、5ml 10X MOPS緩沖液和0.5ul 溴化乙錠，混合均勻。灌制瓊脂糖凝膠。（3） 樣品準(zhǔn)備： 取 DEPC處理過的500ul小離心管，依次加入如下試劑： 10x MOPS緩沖液2ul，甲醛3.5ul,甲酰胺（去離子）10ul，RNA 樣品 4.5ul,混勻。 將離心管置于60水浴中保10分鐘，再置冰上2分鐘。 向管中加入3ul 上樣染料，混勻。（4）上樣。（5