分子生物學(xué)學(xué)生復(fù)習(xí)題答案

1、簡(jiǎn)答題1.簡(jiǎn)述Sanger法的DNA測(cè)序原理。利用DNA聚合酶，以待測(cè)單鏈DNA為模板，以dNTP為底物，設(shè)立四種相互獨(dú)立的測(cè)序反應(yīng)體系，在每個(gè)反應(yīng)體系中加入不同的雙脫氧核苷三磷酸（dideoxyribonucleoside triphosphate，ddNTP）作為鏈延伸終止劑。在測(cè)序引物引導(dǎo)下，按照堿基配對(duì)原則，每個(gè)反應(yīng)體系中合成一系列長(zhǎng)短不一的引物延伸鏈，通過(guò)高分辨率的變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，放射自顯影檢測(cè)后，從凝膠底部到頂部按53方向讀出新合成鏈序列，由此推知待測(cè)模板鏈的序列 。2.簡(jiǎn)述遺傳分析中用于點(diǎn)突變的代表性技術(shù)有哪些。 等位基因特異性寡核苷酸（ASO）分子雜交 反向點(diǎn)雜交

2、變性高效液相色譜 DNA序列分析 PCR - 限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析3.簡(jiǎn)述基因治療的策略。（1）缺陷基因精確的原位修復(fù)基因矯正基因置換（2）基因增補(bǔ)（3）基因沉默或失活4.簡(jiǎn)述基因治療的基本程序。1. 選擇治療基因 2. 選擇攜帶治療基因的載體3.選擇基因治療的靶細(xì)胞4.在細(xì)胞和整體水平導(dǎo)入治療基因5.治療基因表達(dá)的檢測(cè)5.簡(jiǎn)述癌基因活化的機(jī)制。獲得啟動(dòng)子與增強(qiáng)子染色體易位基因擴(kuò)增點(diǎn)突變6.簡(jiǎn)述RB基因（視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤基因。抑癌基因）的作用機(jī)制。 非磷酸化形式有活性，抑制細(xì)胞增殖 對(duì)腫瘤的抑制作用與轉(zhuǎn)錄因子E-2F有關(guān) 低磷酸化Rb能結(jié)合E2F-1使之失活，細(xì)胞周期進(jìn)展受抑，不能通過(guò)G1-

3、S關(guān)卡。 高磷酸化Rb不能結(jié)合E2F-1，相關(guān)基因開(kāi)放，促進(jìn)細(xì)胞通過(guò)G1-S關(guān)卡，細(xì)胞增殖。7.簡(jiǎn)述原癌基因的產(chǎn)物及功能。1. src家族 酪氨酸蛋白激酶（信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)類蛋白）2. ras家族 P21蛋白（GTP酶活性）3. myc家族 核內(nèi)DNA結(jié)合蛋白（核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子類）4. sis家族 P28（類人血小板源生長(zhǎng)因子)（生長(zhǎng)因子類）5. myb家族 核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子（核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子類）6. erb家族生長(zhǎng)因子及其受體和蛋白激酶 8.簡(jiǎn)述印跡技術(shù)的分類及應(yīng)用。DNA印跡 (Southern blotting)用于基因組DNA、重組質(zhì)粒和噬菌體的分析。RNA印跡 (Northern blotting)用于

4、RNA的定性定量分析蛋白質(zhì)的印跡 (Western blotting)用于蛋白質(zhì)定性定量及相互作用研究。9.簡(jiǎn)述 PCR 反應(yīng)體系的基本成分、 PCR 的基本反應(yīng)步驟和主要用途。成分：模板DNA、特異性引物、耐熱DNA聚合酶、dNTPs、Mg2+步驟：變性、退火，延伸用途：（一）目的基因的克?。ǘ┗蛲蛔儯ㄈ?DNA和RNA的微量分析（四）DNA序列測(cè)定（五）基因突變分析10.Southern blotting為什么要進(jìn)行預(yù)雜交？預(yù)雜交是為了篩選有利的變種.為了獲得目的物種，就需要預(yù)先的雜交篩選工作11.DNA的損傷的原因是什么?（一） 體內(nèi)因素-誘發(fā)DNA“自發(fā)損傷”DNA復(fù)制錯(cuò)誤DNA

5、自身的不穩(wěn)定性機(jī)體代謝過(guò)程中產(chǎn)生的活性氧（ROS）（二） 體外因素物理因素（電離輻射、紫外線）化學(xué)因素（自由基，堿基類似物，堿基修飾劑、烷化劑，嵌入性染料）生物因素（黃曲霉毒素）12.簡(jiǎn)述堿基切除修復(fù)的大致過(guò)程。在多種酶的作用下，先將損傷區(qū)域切除，然后利用互補(bǔ)鏈為模板，合成一段正確配對(duì)的堿基順序來(lái)修補(bǔ)。（作用過(guò)程：識(shí)別并切除 修復(fù)合成并連接）13.真核生物基因及基因組的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)各是什么？基因：真核基因的基本結(jié)構(gòu)（斷裂基因）基因編碼區(qū)編碼多肽鏈和特定的RNA分子調(diào)控序列參與真核基因表達(dá)調(diào)控基因組：基因的編碼序列少有大量的重復(fù)序列存在多基因家族和假基因有可變剪接DNA+蛋白質(zhì)染色體體細(xì)胞的基因組為

6、二倍體14.簡(jiǎn)述質(zhì)粒的基本特征。 是細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)、染色體外共價(jià)閉合環(huán)狀DNA分子 能夠獨(dú)立于細(xì)胞的染色質(zhì)DNA而進(jìn)行復(fù)制 對(duì)宿主細(xì)胞的生存不是必需的 能賦予細(xì)菌特定的遺傳性狀15.真核生物染色質(zhì)活化有哪些主要表現(xiàn)？論述題1.試述基因診斷的特點(diǎn)及基本技術(shù)。特點(diǎn)：針對(duì)直接病因診斷特異性強(qiáng)，靈敏度高適應(yīng)性強(qiáng)，診斷范圍廣目的基因是否處于活化狀態(tài)均可，無(wú)組織和發(fā)育特異性在感染性疾病的基因診斷中，可檢測(cè)正在生長(zhǎng)的病原體或潛伏病原體基本技術(shù)：核酸雜交（斑點(diǎn)印跡、Southern印跡、Northern印跡、原位雜交、等位基因特異寡核苷酸探針雜交）聚合酶鏈反應(yīng)（具體）DNA測(cè)序（具體）基因芯片技術(shù)（具體） 限制性

7、內(nèi)切酶酶譜分析法2.舉例說(shuō)明原癌基因和抑癌基因是如何調(diào)控細(xì)胞增殖和凋亡的。(1)原癌基因的編碼產(chǎn)物是生長(zhǎng)因子、生長(zhǎng)因子受體、胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子、轉(zhuǎn)錄因子、cyclin 及CDK等。(2)正常情況下，原癌基因的編碼產(chǎn)物為細(xì)胞生長(zhǎng)所必需。如 ras 編碼Ras蛋白，是一種小G蛋白，參與細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)信號(hào)的傳導(dǎo)，從而促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)。 (3)特定條件下，原癌基因通過(guò)點(diǎn)突變、DNA重排、基因擴(kuò)增、染色體易位、病毒啟動(dòng)子及增強(qiáng)子的插入等機(jī)制活化，過(guò)度轉(zhuǎn)導(dǎo)生長(zhǎng)信號(hào)，導(dǎo)致細(xì)胞惡性增殖。(4)抑癌基因的編碼產(chǎn)物起著抑制細(xì)胞增殖信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、負(fù)性調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的作用，從而抑制細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。如p53蛋白可以抑制細(xì)胞的

8、生長(zhǎng)，同時(shí)它也可以促進(jìn)細(xì)胞的凋亡。(5)細(xì)胞增殖與凋亡是癌基因和抑癌基因的相互作用的結(jié)果。正常細(xì)胞向惡性細(xì)胞轉(zhuǎn)化涉及原癌基因活化、抑癌基因失活等因素的綜合作用。 (6) 癌基因和抑癌基因在某些條件下可以相互轉(zhuǎn)變，如 野生型的p53基因?qū)儆谝职┗?，而突變的p53基因卻發(fā)揮癌基因的作用。 3.試述逆轉(zhuǎn)錄 PCR 、原位 PCR 和實(shí)時(shí) PCR 技術(shù)的基本原理和主要區(qū)別。逆轉(zhuǎn)錄PCR：逆轉(zhuǎn)錄PCR(reverse transcription PCR，RT-PCR)是將RNA的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)和PCR反應(yīng)聯(lián)合應(yīng)用的一種技術(shù)。RT-PCR是目前從組織或細(xì)胞中獲得目的基因以及對(duì)已知序列的RNA進(jìn)行定性及半定量

9、分析的最有效方法。 原位PCR：原位PCR(in situ PCR)是在組織切片或細(xì)胞涂片上的單個(gè)細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行的PCR反應(yīng)，然后用特異性探針進(jìn)行原位雜交，即可檢出待測(cè)DNA或RNA是否在該組織或細(xì)胞中存在。原位PCR方法彌補(bǔ)了PCR技術(shù)和原位雜交技術(shù)的不足，是將目的基因的擴(kuò)增與定位相結(jié)合的一種最佳方法。實(shí)時(shí)PCR：引入了熒光標(biāo)記分子，并使熒光信號(hào)強(qiáng)度與PCR產(chǎn)物量成正比，對(duì)每一反應(yīng)時(shí)刻的熒光信號(hào)進(jìn)行實(shí)時(shí)分析，就可算出PCR產(chǎn)物量，實(shí)現(xiàn)了mRNA水平的快速定量分析，已經(jīng)在基因診斷方面得到臨床應(yīng)用4.試述酵母雙雜交技術(shù)的基本原理及應(yīng)用。原理：應(yīng)用： 證明兩種已知基因序列的蛋白質(zhì)可以相互作用的生物信息

10、學(xué)推測(cè)。 分析已知存在相互作用的兩種蛋白質(zhì)分子的的相互作用功能結(jié)構(gòu)域或關(guān)鍵的氨基酸殘基。、 將擬研究的蛋白質(zhì)的編碼基因與BD基因融合成為“誘餌”表達(dá)質(zhì)粒，可以篩選AD基因融合的“獵物”基因表達(dá)文庫(kù)，篩選未知的相互作用蛋白質(zhì)。5.PCR的引物設(shè)計(jì)一般遵守什么原則？ 引物長(zhǎng)度，15-30bp,常用20bp左右堿基分布均衡，同一堿基連續(xù)不應(yīng)超過(guò)5個(gè)，GC含量一般40-60%引物Tm值一般為55C到60C不能有反向重復(fù)和自身互補(bǔ)序列6.試述常見(jiàn)的DNA損傷途徑及每條途徑的修復(fù)對(duì)象和參與修復(fù)的酶或蛋白。7、討論乳糖操縱子的正負(fù)調(diào)控機(jī)制。(1)乳糖操縱子包含3個(gè)結(jié)構(gòu)基因（編碼半乳糖苷酶、半乳糖苷通透酶和轉(zhuǎn)乙?；福?個(gè)調(diào)控元件（啟動(dòng)子、操縱基因和CAP結(jié)合位點(diǎn)）和1個(gè)調(diào)節(jié)基因（編碼阻遏蛋白）。 (2)阻遏蛋白的負(fù)調(diào)控：無(wú)乳糖時(shí)，阻遏蛋白結(jié)合操縱基因，妨礙RNA聚合酶結(jié)合啟動(dòng)子，抑制結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄。有乳糖時(shí)，生成別位乳糖（誘導(dǎo)劑）結(jié)合阻遏蛋白，不能封閉操縱基因，結(jié)構(gòu)基因可以轉(zhuǎn)錄。(3)cAMP-CAP復(fù)合物的